肠杆菌科讲解培训课件.ppt

1、肠杆菌科讲解肠杆菌科讲解 一、种类一、种类肠杆菌科细菌目前已有44个属170多个种。临床上常见的有 埃希菌属埃希菌属（Escherichia）沙门菌属沙门菌属（Salmonella）志贺菌属志贺菌属（Shigella）耶尔森菌属（耶尔森菌属（Yersinia）枸橼酸杆菌属枸橼酸杆菌属（Citrobacter）克雷伯菌属克雷伯菌属（Klebsiella）肠杆菌属、多源菌属、哈夫尼亚属肠杆菌属、多源菌属、哈夫尼亚属 沙雷菌属沙雷菌属（Serratia）变形杆菌属、普罗菲登菌属、摩根菌属变形杆菌属、普罗菲登菌属、摩根菌属 肠杆菌科中的其他菌属肠杆菌科中的其他菌属肠杆菌科讲解2 第一节第一节 埃希菌属

2、埃希菌属 （Escherichia）蟑螂埃希菌伤口埃希菌赫尔曼埃希菌弗格林埃希菌大肠埃希菌埃希菌属(E.coli)(E.fergusonii)(E.hermannii)(E.vulneris)(E.blattae)不脱胺/凝聚埃希菌。(E.abecarboxylata/agglomeransE.abecarboxylata/agglomerans)代表菌：大肠埃希菌（Escherichia coli）肠杆菌科讲解3学习大肠埃希菌有何意义学习大肠埃希菌有何意义?1.大肠埃希菌为肠道正常菌群成员。大肠埃希菌为肠道正常菌群成员。2.又为条件致病菌又为条件致病菌,引起肠道外感染。引起肠道外感染。3.一

3、些血清型具有致病性。一些血清型具有致病性。4.环境卫生学和食品卫生学常用作粪便污染的指标。环境卫生学和食品卫生学常用作粪便污染的指标。5.用于基因工程研究。用于基因工程研究。肠杆菌科讲解4 一、生物学性状一、生物学性状（一）形态与染色（一）形态与染色1.G-两端钝圆的中等两端钝圆的中等 大小的短杆菌。大小的短杆菌。2.周鞭毛，无芽胞，电镜周鞭毛，无芽胞，电镜 观察有周身菌毛观察有周身菌毛。菌毛：普通菌毛、性菌毛：普通菌毛、性菌毛菌毛 3.某些菌株有包膜（某些菌株有包膜（K）。4.培养初期或分泌物中可培养初期或分泌物中可形成球形形成球形。肠杆菌科讲解51.对营养要求不高，自身合成能力很强对营养要

4、求不高，自身合成能力很强。2.兼性厌兼性厌O2 1545均可发育，最适温度均可发育，最适温度37，最适最适pH7.47.6。3.在普通琼脂上可形成光滑、湿润、灰白色半透在普通琼脂上可形成光滑、湿润、灰白色半透明、凸起、边缘整齐中等大小（明、凸起、边缘整齐中等大小（23mm）的）的菌落。菌落。4.在血平板上生长更佳，某些菌株（溶血性菌株）在血平板上生长更佳，某些菌株（溶血性菌株）可产生可产生溶血。溶血。（二）培养特点（二）培养特点肠杆菌科讲解6（1）SSA指示剂为中性红，分解乳糖产酸的细菌指示剂为中性红，分解乳糖产酸的细菌（大肠埃希菌）呈红色菌落（大肠埃希菌）呈红色菌落（2）中国蓝）中国蓝 大肠

5、埃希菌分解乳糖产酸形成大而浑浊的蓝色菌落，大肠埃希菌分解乳糖产酸形成大而浑浊的蓝色菌落，其他不分解乳糖的肠道菌为透明淡红色菌落。其他不分解乳糖的肠道菌为透明淡红色菌落。5.在肠道选择性培养基上，因能分解乳糖产酸，在肠道选择性培养基上，因能分解乳糖产酸，使指示剂变色形成有色菌落。使指示剂变色形成有色菌落。肠杆菌科讲解7肠杆菌科讲解8（三）生化反应（三）生化反应 1.可分解多种糖（醇）类可分解多种糖（醇）类 葡、乳、麦、甘葡、乳、麦、甘对蔗糖、卫矛醇、棉子糖、对蔗糖、卫矛醇、棉子糖、鼠李糖则因菌株而异。鼠李糖则因菌株而异。2.IMVC为为+-。3.尿素酶、苯丙氨酸、丙尿素酶、苯丙氨酸、丙二酸盐二酸

6、盐-。4.克氏双糖铁克氏双糖铁/肠杆菌科讲解9 I M V C I M V C +-+肠杆菌科讲解10 (四四)Ag构造复杂构造复杂主要有主要有O、H、K三种三种Ag1.O-Ag 本质本质是细菌细胞壁的成分，其化学组成是细菌细胞壁的成分，其化学组成是脂多糖是脂多糖组成组成其分子由其分子由3部分组成：部分组成：特 异 性 多 糖（）是 重 复 结 构 的 多 糖 链，位 于核 心 多 糖 的 最 外 层 核 心 多 糖 肠 杆 菌 科 各 属 核 心 多 糖 是 相 同 的 脂 类 在 核 心 多 糖 的 内 侧，是 内 毒 素 的 毒 性 成 分O-Ag A肠杆菌科讲解11 2.H-Ag本质本

7、质其化学组成为鞭毛蛋白其化学组成为鞭毛蛋白性质性质不耐热不耐热其特异性取决于多肽链排列顺序和其特异性取决于多肽链排列顺序和空间构型空间构型 肠杆菌科讲解12 3.K-Ag本质本质化学成分是多糖化学成分是多糖性质性质 细菌的种类不同，其名称也不同细菌的种类不同，其名称也不同 E.coliK-Ag S.typhi-不耐热的作用与相应故可阻断周围因其包绕.bAbAgO，AgO.a 区别点区别点 L A B破坏其本身的可凝集性破坏其本身的可凝集性 1001h 1202.5h 100 1h破坏其抑制破坏其抑制O血清的凝集血清的凝集 1001h 1202.5h 100 1h与抗体结合力的破坏与抗体结合力的

8、破坏 1001h 1212.5h不破坏不破坏 100 2.5h不破坏不破坏抗原性破坏抗原性破坏 1001h 1202h 100 1h本质本质 菌毛抗原菌毛抗原 荚膜荚膜 荚膜抗原荚膜抗原表示法：上述表示法：上述3种抗原均用阿拉伯数字表示种抗原均用阿拉伯数字表示 其型别按其型别按O:K:H 例如：例如：O111:K58:H2 简写：简写：O111:58:2 O86:B7:H3简写：简写：O86:7:3Vi Ag肠杆菌科讲解13（五）抵抗力（五）抵抗力不强不强1.10g/L石炭酸石炭酸1530min被杀死被杀死;2.加热加热6010min即死即死;3.对酸敏感对酸敏感肠杆菌科讲解14 二、致病性(

9、一一)致病物质致病物质1.黏附素黏附素 使细菌紧密黏附于肠道泌尿道细胞上使细菌紧密黏附于肠道泌尿道细胞上,避免尿液避免尿液的冲刷和肠蠕动排除。的冲刷和肠蠕动排除。特点特点:具有高度的特异性具有高度的特异性 定植抗原定植抗原、(CFA/、CFA/、CFA/)集聚黏附菌毛集聚黏附菌毛和和 (AAF/、AAF/)束形成菌毛束形成菌毛(bundle forming pili,Bfp)种类种类 紧密黏附素紧密黏附素(intimin)P菌毛菌毛 侵袭质粒抗原侵袭质粒抗原(invasion plasmid antigen,Ipa)蛋白蛋白 Dr菌毛菌毛肠杆菌科讲解15(1)志贺毒素志贺毒素和和(Shiga

10、toxins,Stx-,Stx-)（2）耐热肠毒素）耐热肠毒素a和和b（heat stable enterotoxin,STa,STb）(3)不耐热肠毒素不耐热肠毒素和和 （heat labile enterotoxin,LT-,LT-）(4)溶血素溶血素A2.外毒素外毒素 肠杆菌科讲解16 (1)志贺毒素志贺毒素和和 (Shiga toxins,Stx-,Stx-)产生菌株及作用产生菌株及作用 肠出血性大肠埃希菌肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagic E.coli,EHEC)可可表达表达志贺毒素志贺毒素,引起上皮细胞微绒毛的破坏。引起上皮细胞微绒毛的破坏。性质性质 Stx-与

11、志贺菌产生的志贺毒素基本相同。与志贺菌产生的志贺毒素基本相同。Stx-则有则有60%的同源。的同源。两型毒素均由溶原性噬菌体介导。两型毒素均由溶原性噬菌体介导。肠杆菌科讲解17结构及作用结构及作用A亚单位亚单位可裂解可裂解60S核糖体亚单核糖体亚单位的位的28SrRNA阻止与氨酰阻止与氨酰tRNA的结合的结合,终止蛋白质合成。终止蛋白质合成。Stx由由1个个A亚单位和亚单位和5个个B亚单位成。亚单位成。B亚单位亚单位与宿主细胞特异性糖脂受与宿主细胞特异性糖脂受体结合体结合(肠绒毛和肾上皮细胞均有肠绒毛和肾上皮细胞均有高浓度的糖脂受体高浓度的糖脂受体)肠杆菌科讲解18作用机制作用机制A.绒毛结构

12、的破坏引起吸收减低和液体分泌的相对绒毛结构的破坏引起吸收减低和液体分泌的相对增加。增加。B.溶血性贫血的尿毒综合征溶血性贫血的尿毒综合征(hemolytic uremic syndrome,HUS)在产生志贺毒素在产生志贺毒素(Stx-)的的 EHEC中较多中较多,因因Stx-能选择性破坏肾小球内皮细能选择性破坏肾小球内皮细胞胞,引起肾小球滤过减少和急性肾功能衰竭。引起肾小球滤过减少和急性肾功能衰竭。C.志贺毒素志贺毒素(Stx)还能刺激炎症细胞因子还能刺激炎症细胞因子(肿瘤坏死肿瘤坏死因子因子-,白细胞介素白细胞介素-6)的表达。的表达。D.还可加强糖脂受体的表达。还可加强糖脂受体的表达。肠

13、杆菌科讲解19产生菌株及作用产生菌株及作用肠产毒素性大肠埃希菌肠产毒素性大肠埃希菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC)产生产生耐耐热肠毒素由质粒编码热肠毒素由质粒编码。STb与人类疾病无关与人类疾病无关。STa 的性质的性质:A.低分子量多肽低分子量多肽;B热稳定热稳定(10020min不失活不失活)C.免疫原性差。免疫原性差。STa的作用机制的作用机制:与与LT-不同。是通过激活肠黏膜细胞的鸟苷环化酶不同。是通过激活肠黏膜细胞的鸟苷环化酶使使cGMP水平水平引起腹泻，细菌产生肠毒素的能力与引起腹泻，细菌产生肠毒素的能力与 两种两种Plasmid有关。有关。应当指出的是应

14、当指出的是:STa阳性菌株同时产生阳性菌株同时产生LT,具有更强的致病性。具有更强的致病性。（2）耐热肠毒素）耐热肠毒素a和和b（heat stable enterotoxin,STa,STb）肠杆菌科讲解20 (3)不耐热肠毒素不耐热肠毒素和和 （heat labile enterotoxin,LT-,LT-）产生菌株及作用产生菌株及作用肠产毒素性大肠埃希菌肠产毒素性大肠埃希菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC)产生产生耐耐热肠毒素由质粒编码热肠毒素由质粒编码。LT-与人类疾病无关与人类疾病无关LT-是引起人类胃肠炎的致病物质是引起人类胃肠炎的致病物质,在结构和功能上与

15、霍乱弧菌在结构和功能上与霍乱弧菌产产 生的肠毒素密切相关生的肠毒素密切相关。特点特点:不耐热不耐热 结构结构:A亚单位亚单位(毒素的活性部位毒素的活性部位)B亚单位亚单位与肠黏膜上皮细胞与肠黏膜上皮细胞表面的表面的GM1神经节苷脂神经节苷脂结合后结合后,使使A亚单位穿过亚单位穿过细胞膜与腺苷环化酶作用细胞膜与腺苷环化酶作用肠杆菌科讲解21 LT-小肠上皮小肠上皮C的腺苷环化的腺苷环化E 刺激前列腺刺激前列腺素素 的释放和炎症因子的释放和炎症因子 的产生的产生ATPcAMP 促进肠粘膜分泌功能促进肠粘膜分泌功能 进一步导致水进一步导致水 分的丧失分的丧失 引起腹泻引起腹泻致病作用致病作用肠杆菌科

16、讲解22 (4)溶血素溶血素A在尿路致病性大肠埃希菌所致疾病中有在尿路致病性大肠埃希菌所致疾病中有重要作用重要作用。肠杆菌科讲解233.侵袭力侵袭力（1）K-Ag抗吞噬有抵抗抗体和补体抗吞噬有抵抗抗体和补体（2）菌毛）菌毛帮助细菌粘附于粘膜表面。帮助细菌粘附于粘膜表面。4.内毒素内毒素 5.型分泌系统型分泌系统是一种向真核靶细胞内输送毒性基因产物的细菌效是一种向真核靶细胞内输送毒性基因产物的细菌效应系统。应系统。肠杆菌科讲解24 （二）所致疾病（二）所致疾病(一一)1.肠外感染肠外感染（1）尿路感染）尿路感染常见的有常见的有O1、O2、O6、O7、O11、O25、O75，这些大肠埃希，这些大肠

17、埃希菌具有菌具有K-Ag（抗吞噬）和菌毛（粘附泌（抗吞噬）和菌毛（粘附泌尿道抗冲洗）。尿道抗冲洗）。（2）败血症）败血症如烧伤引起如烧伤引起G-败血症败血症（3）胆囊炎、肺炎以及新生儿或婴幼儿）胆囊炎、肺炎以及新生儿或婴幼儿脑膜炎。脑膜炎。肠杆菌科讲解25（二）所致疾病（二）所致疾病(二二)2.胃肠炎胃肠炎（1）产毒素大肠埃希菌）产毒素大肠埃希菌(ETEC)引起婴幼儿及旅游者腹泻。引起婴幼儿及旅游者腹泻。（2）致病性大肠埃希菌）致病性大肠埃希菌(EPEC)主要引起婴儿腹泻。主要引起婴儿腹泻。（3）侵袭性大肠埃希菌）侵袭性大肠埃希菌(EIEC)引起较大儿童和成年人腹泻，引起较大儿童和成年人腹泻，

18、有时可形成暴发性流行。有时可形成暴发性流行。（4）肠出血性大肠埃希菌）肠出血性大肠埃希菌(EHEC)：由：由O157:H7引起的腹引起的腹泻，有泻，有27发展成溶血性尿毒综合征，出现溶血性贫血，发展成溶血性尿毒综合征，出现溶血性贫血，血小板减少性紫癜和急性肾衰竭。血小板减少性紫癜和急性肾衰竭。（5）肠凝聚性大肠埃希菌）肠凝聚性大肠埃希菌(EAEC)：成人慢性腹泻，儿童急：成人慢性腹泻，儿童急性腹泻。性腹泻。肠杆菌科讲解26 三、微生物学检查法三、微生物学检查法（一）肠外感染的细菌学检验（一）肠外感染的细菌学检验主要指普通大肠埃希菌主要指普通大肠埃希菌1.标本的采集标本的采集 视疾病种类不同而异

19、视疾病种类不同而异呼吸系呼吸系痰痰烧伤及化脓感染烧伤及化脓感染脓汁及分泌物脓汁及分泌物尿路感染尿路感染尿液尿液菌血症（败血症）菌血症（败血症）血液血液N症状症状脑脊液脑脊液胆囊炎胆囊炎胆汁胆汁卫生细菌学卫生细菌学水等水等肠杆菌科讲解272.2.检验方法检验方法(1)(1)涂片染色检查法涂片染色检查法除血液标本外除血液标本外,均作均作。(2)(2)分离培养分离培养血平板血平板、SSA、MAC肠杆菌科讲解28(3)鉴定鉴定（1）初步鉴定）初步鉴定 形态染色特点形态染色特点菌落特征（菌落特征（EMB、中国蓝、麦康凯、中国蓝、麦康凯)KIA A.A+-生化反应生化反应初步鉴定为大肠埃希菌初步鉴定为大肠

20、埃希菌 硝酸盐还原+氧化触E+-E、IMVC+-MIU+-肠杆菌科讲解29（2）最后鉴定）最后鉴定触触E+氧化氧化E-葡葡或或/+乳乳/迟缓迟缓+肌醇肌醇-IMVC +-脲酶脲酶-H2S-苯丙脱氨苯丙脱氨E-硝酸盐还原硝酸盐还原+动力多动力多+肠杆菌科讲解30（二）肠道内感染的细菌学检验（二）肠道内感染的细菌学检验)EaggEC()EHEC()EIEC()EPEC()ETEC(5肠凝聚型大肠埃希菌肠出血性大肠埃希菌肠侵袭性大肠埃希菌肠致病性大肠埃希菌产肠毒素型大肠埃希菌组包括肠杆菌科讲解31 检验方法检验方法标本标本 接种选择培养基接种选择培养基 挑选可疑菌落挑选可疑菌落鉴定大肠埃希菌鉴定大肠

21、埃希菌ELISA核酸杂交核酸杂交PCR其其它它其他其他分子分子生物生物学技学技术术检测不同类型胃肠炎检测不同类型胃肠炎Ecoli的肠毒的肠毒素毒力因子和血清型等特征素毒力因子和血清型等特征肠杆菌科讲解32卫生细菌学检查卫生细菌学检查Ecoli随粪便排除随粪便排除污染环境、水源、饮污染环境、水源、饮料、食品等料、食品等检测样品中检测样品中Ecoli间接表明肠道致病菌间接表明肠道致病菌污染污染大肠菌群指数大肠菌群指数每每1000ml(g)样品中的样品中的大肠菌群数大肠菌群数。大肠菌群大肠菌群系指在系指在3724h内发酵乳糖产酸产气需氧和兼内发酵乳糖产酸产气需氧和兼性厌氧的肠道杆菌性厌氧的肠道杆菌。

22、包括埃希。包括埃希菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属及肠杆菌属。菌属及肠杆菌属。我国卫生标准规定我国卫生标准规定:饮水饮水 3个个/L 汽水果汁汽水果汁5个个/L肠杆菌科讲解33防治原则防治原则1.疫苗的免疫预防正在研究中。疫苗的免疫预防正在研究中。2.抗生素治疗要在药敏试验指导下进行抗生素治疗要在药敏试验指导下进行。3.尿道插管和膀胱镜检查应无菌操作。尿道插管和膀胱镜检查应无菌操作。4.腹泻病人应进行隔离治疗腹泻病人应进行隔离治疗,及时校正水和电解质平及时校正水和电解质平衡。衡。5.采取措施减少医院感染。采取措施减少医院感染。6.保持高卫生标准保持高卫生标准,减少接触引

23、起胃肠炎的大肠埃希减少接触引起胃肠炎的大肠埃希菌菌株的危险。菌菌株的危险。7.污染的水和食品是肠产毒素性大肠埃希菌污染的水和食品是肠产毒素性大肠埃希菌(ETEC)的重要传播媒介的重要传播媒介;肠出血性大肠埃希菌肠出血性大肠埃希菌(EHEC)常由常由污染的肉类和未消毒的牛奶引起。要充分烹饪。污染的肉类和未消毒的牛奶引起。要充分烹饪。肠杆菌科讲解34 第二节第二节 志贺菌属志贺菌属（Shigella）志贺菌属志贺菌属痢疾志贺菌痢疾志贺菌（S.dysentriae）福氏志贺菌福氏志贺菌(S.flexneri)鲍氏志贺菌鲍氏志贺菌(S.boydii)宋内志贺菌宋内志贺菌(S.sonnei)肠杆菌科讲解

24、35一、生物学性状一、生物学性状（一）形态与染色（一）形态与染色 从形态学上看，志贺从形态学上看，志贺菌属与一般肠杆菌科菌属与一般肠杆菌科细菌无明显的区别。细菌无明显的区别。突出点是无鞭毛不能突出点是无鞭毛不能运动。运动。1.G-短小杆菌短小杆菌2.无特殊构造无特殊构造3.有菌毛有菌毛肠杆菌科讲解36 （二）培养特点（二）培养特点 1.营养要求不高，可在普通培养基上生长营养要求不高，可在普通培养基上生长。2.普通琼脂平板普通琼脂平板 光滑、湿润、圆形凸起，无光滑、湿润、圆形凸起，无色半透明，边缘整齐，中等大小的菌落。色半透明，边缘整齐，中等大小的菌落。3.在肠道选择性培养基上，为不发酵乳糖菌落

25、在肠道选择性培养基上，为不发酵乳糖菌落值得提出的是，宋内志贺菌培养值得提出的是，宋内志贺菌培养48h后可转为后可转为乳糖发酵菌落。也常出现扁平粗糙型菌落乳糖发酵菌落。也常出现扁平粗糙型菌落 3724h肠杆菌科讲解37 SSA肠杆菌科讲解38（三）生化反应（三）生化反应 较为复杂较为复杂葡萄糖葡萄糖、MR 阳性阳性 尿乳蔗枸赖脱，尿乳蔗枸赖脱，V-P、H2S均阴性均阴性 SSA 无色半透明菌落无色半透明菌落 克氏双糖铁克氏双糖铁 斜面粉红斜面粉红,底层黄底层黄+肠杆菌科讲解39 I M V C肠杆菌科讲解40（四）（四）Ag构造及分类构造及分类 1.Ag构造构造 特点特点无无H-Ag（1）O-A

26、g是分类的依据是分类的依据型特异性型特异性Ag 可区别菌种的型别型特异性强变为粗糙型则消失仅光滑型有本质是多糖特点，亚型可将某些菌型分为多种不同根据群特异性在福氏菌株中特异性较低内出现常在某些相近似的菌体光滑型所有的次要特点，Ag，Ag群特异性群特异性Ag 肠杆菌科讲解41（2）K-Ag 在分类上无意义用与相应抗血清的凝集作有阻止菌体菌株所具有是某些自病人新分离的特点Ag肠杆菌科讲解422.分类分类根据根据O-Ag不同将不同将shigella分为分为4个群个群(P122，表，表7-12)-肠杆菌科讲解43我国福氏最多，宋内次之。南方鲍氏也不少。我国福氏最多，宋内次之。南方鲍氏也不少。A群群:即

27、痢疾志贺菌即痢疾志贺菌 有有12个血清型个血清型均不发酵甘露醇均不发酵甘露醇无鸟氨酸脱羧酶无鸟氨酸脱羧酶与其他各群无血清学关系与其他各群无血清学关系我国常见的为我国常见的为2型，又叫舒密志贺菌（西藏），型，又叫舒密志贺菌（西藏），I（靛基质）（靛基质）+，其他型，其他型-B群又叫福氏菌群群又叫福氏菌群有有6个血清型个血清型,2个变种个变种(X、Y)其特点：其特点：分解甘露醇分解甘露醇无鸟氨酸脱羧无鸟氨酸脱羧酶酶-Ag构造较复杂，各型间有交叉构造较复杂，各型间有交叉Ag肠杆菌科讲解44 C群又叫鲍氏菌群群又叫鲍氏菌群，有，有18个血清型个血清型其特点：其特点：分解甘露醇分解甘露醇鸟氨酸脱羧酶鸟氨

28、酸脱羧酶-各型间无交叉各型间无交叉Ag D群又叫宋内菌群群又叫宋内菌群，只有一个血清型，只有一个血清型其特点：其特点：分解甘露醇分解甘露醇鸟氨酸脱羧酶鸟氨酸脱羧酶+迟缓分解乳糖迟缓分解乳糖本群菌有光滑型（本群菌有光滑型（S）和粗糙型（）和粗糙型（R）两种）两种肠杆菌科讲解45较其他肠杆菌科细菌弱较其他肠杆菌科细菌弱。（五）抵抗力（五）抵抗力1.不耐热不耐热6010min即可杀即可杀死死2.对一般消毒剂敏感对一般消毒剂敏感3.耐耐48种药物种药物肠杆菌科讲解46 二、致病性与免疫性二、致病性与免疫性（一）致病物质（一）致病物质 1.侵袭力侵袭力 2.内毒素内毒素 3.3.外毒素外毒素 肠杆菌科讲

29、解47派伊尔淋巴派伊尔淋巴结的结的M细胞细胞通过通过型分泌系统向上皮细型分泌系统向上皮细胞和巨噬细胞分泌胞和巨噬细胞分泌4种蛋白种蛋白志贺菌志贺菌IpaA IpaB黏附并侵入IpaC IpaD诱导细胞膜凹陷诱导细胞膜凹陷 导致细菌内吞导致细菌内吞志贺菌溶解吞噬小泡志贺菌溶解吞噬小泡 进入细胞质内繁殖进入细胞质内繁殖宿主细胞内肌动纤维宿主细胞内肌动纤维的重排的重排,推动细菌进入推动细菌进入毗邻细胞毗邻细胞细胞到细胞传播细胞到细胞传播细菌逃避了免疫的清除细菌逃避了免疫的清除作用而得到了自身保护作用而得到了自身保护通过诱导细胞程序性死亡通过诱导细胞程序性死亡从吞噬中得到了存活从吞噬中得到了存活引起白

30、细胞介素引起白细胞介素-1的释放的释放 吸引多形核白细胞到吸引多形核白细胞到感染组织肠壁完整性破坏感染组织肠壁完整性破坏细菌到达较深层的上皮细胞细菌到达较深层的上皮细胞,加速了细菌的扩散加速了细菌的扩散1.1.侵袭力侵袭力 作用作用肠杆菌科讲解482.2.内毒素内毒素内毒素内毒素肠黏膜肠黏膜通透性通透性内毒素内毒素的吸收的吸收促进促进发发 热热神志障碍神志障碍中毒性休中毒性休克克作用作用内毒素内毒素肠黏膜肠黏膜破坏破坏炎症炎症溃疡溃疡形成形成典型的脓血典型的脓血黏液便黏液便内毒素内毒素肠壁自主肠壁自主神经系统神经系统作用于作用于肠功能肠功能紊乱紊乱肠蠕肠蠕动失动失调和调和痉挛痉挛肤痛肤痛里急里

31、急后重后重肠杆菌科讲解493.3.外毒素外毒素其功其功 能同肠出血性大肠埃希菌能同肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagic E.coli,EHEC),引起上皮引起上皮细胞微绒毛的破坏。细胞微绒毛的破坏。产生菌株及功能产生菌株及功能A群志贺菌群志贺菌(痢疾志贺菌痢疾志贺菌)型和型和型可产生志贺型可产生志贺外毒素外毒素。肠杆菌科讲解50结构及作用结构及作用A亚单位亚单位可裂解可裂解60S核糖体亚单核糖体亚单位的位的28SrRNA阻止与氨酰阻止与氨酰tRNA的结合的结合,终止蛋白质合成。终止蛋白质合成。Stx由由1个个A亚单位和亚单位和5个个B亚单位成。亚单位成。B亚单位亚单位与宿主细

32、胞特异性糖脂受与宿主细胞特异性糖脂受体结合体结合(肠绒毛和肾上皮细胞均有肠绒毛和肾上皮细胞均有高浓度的糖脂受体高浓度的糖脂受体)毒素作用毒素作用:损伤上皮细胞。个别病人志贺毒素可介导肾小球内损伤上皮细胞。个别病人志贺毒素可介导肾小球内皮细胞的损伤皮细胞的损伤,导致溶血性尿毒综合征导致溶血性尿毒综合征(HUS)肠杆菌科讲解51急性、亚急性、慢性菌痢，急性急性、亚急性、慢性菌痢，急性最常见，中毒性痢疾。最常见，中毒性痢疾。（二）所致疾病（二）所致疾病肠杆菌科讲解52(三三)免疫性免疫性 病后病后,在血液中可产生循环抗体在血液中可产生循环抗体,此抗体无保此抗体无保护作用。护作用。其抗感染免疫主要是消

33、化道黏膜表面的分其抗感染免疫主要是消化道黏膜表面的分泌型泌型IgA(SIgA)。病后免疫期短病后免疫期短,不巩固。其原因不巩固。其原因:1.感染只停留在肠壁局部感染只停留在肠壁局部。2.型别多型别多。肠杆菌科讲解53 三、微生物学检查法三、微生物学检查法（一）标本的采集（一）标本的采集1.用无菌棉拭取病人新排出的粪便的粘用无菌棉拭取病人新排出的粪便的粘液或脓血便。液或脓血便。2.无便者，用无菌棉拭从肛门或直肠直无便者，用无菌棉拭从肛门或直肠直接取。接取。3.对昏迷病人、不排便者对昏迷病人、不排便者灌肠。灌肠。4.慢性患者慢性患者用直肠镜。用直肠镜。肠杆菌科讲解54注意事项：注意事项：1.用药前

34、采集标本用药前采集标本2.要快（要立即送检）最好要快（要立即送检）最好1h内或床边内或床边接种接种3.取材不要粪尿相混（本菌怕酸）取材不要粪尿相混（本菌怕酸）4.如不能立即送检者，立即用如不能立即送检者，立即用3%甘油甘油盐水保存液，远道可放在冰壶中盐水保存液，远道可放在冰壶中 肠杆菌科讲解55（二）检验程序（二）检验程序 粪便或肛拭增菌培养（肉汤）GN分离培养：选择鉴别培养基（、）SSMAC3746h，371824h，挑取可疑菌落药物敏感试验初步鉴定：TSIA,KIA/MIU最后鉴定全套生化反应血清学鉴定图7-4 志贺菌检验程序肠杆菌科讲解56（三）检验方法（三）检验方法 1.1.分离培养分

35、离培养SSASSA及及MacConkeyMacConkey无色透明中等大菌落无色透明中等大菌落2.2.初步鉴定初步鉴定 （1 1）试探性玻片凝集）试探性玻片凝集 先用志贺菌属多价诊断血清先用志贺菌属多价诊断血清再用单价血清再用单价血清（2 2）初步生化反应）初步生化反应 KIA KIA、MIU MIU KIA MIU 抗血清抗血清斜面斜面底层底层气体气体H2S 动力动力 吲哚吲哚脲酶脲酶 多价多价 单价单价-+-/+-+/-+肠杆菌科讲解57 3.最后鉴定最后鉴定（1）生化反应）生化反应,除除KIA、MIU外，甘露醇外，甘露醇（+/-）、蔗糖（）、蔗糖（-/+）、）、C（-）、苯丙氨酸）、苯丙

36、氨酸脱氨酶（脱氨酶（-）、）、ONPG（-半乳糖苷酶）（半乳糖苷酶）（-）、）、鸟氨酸脱羧酶（鸟氨酸脱羧酶（-）（宋内）（宋内+）(2)血清学鉴定：生化特点符合血清学鉴定：生化特点符合,且多价、且多价、单价血清均呈阳性者，应单价血清均呈阳性者，应转入分型鉴定。转入分型鉴定。肠杆菌科讲解58测定志贺菌的侵袭力可用测定志贺菌的侵袭力可用Sereny试验试验豚鼠眼结膜试验豚鼠眼结膜试验非典型菌株培养物1920h用盐水制成 亿菌悬液9/ml用灭菌针豚鼠一只眼角膜上轻轻划伤次78接种一环菌液直径(5ml)接种后次日急性期恢复初期恢复末期自结膜分离细菌另一只眼用大肠埃希菌作对照另一只眼用大肠埃希菌作对照

37、4.毒力试验毒力试验受试受试1824h 培养物培养物接种接种结结囊内囊内发生结发生结膜炎膜炎Sereny试验阳试验阳性性表明受表明受试菌有试菌有侵袭力侵袭力志贺毒素志贺毒素的测定的测定HeLa细胞细胞Vero细胞细胞PCR直接检测其毒素基直接检测其毒素基因因stxA和和stxB肠杆菌科讲解59（1）免疫荧光菌球法）免疫荧光菌球法特异性较强特异性较强（2）免疫染色法）免疫染色法 (3)协同凝集试验协同凝集试验 (4)胶乳凝集试验胶乳凝集试验 (5)分子生物学方法分子生物学方法5.快速检验法快速检验法肠杆菌科讲解60 第三节第三节 沙门菌属沙门菌属（SalmonellaSalmonella）动物致

38、病的沙门菌动物致病的沙门菌从对人引起疾病的角度从对人引起疾病的角度 沙门菌食物中毒副伤寒伤寒、本属的代表菌本属的代表菌伤寒沙门菌伤寒沙门菌（S.typhi）。引起肠热症副伤寒沙门菌伤寒沙门菌人的致病菌Bparatyphi.S(A)typhi.S(毒污染乳肉蛋引起食物中肠炎沙门菌猪霍乱沙门菌鼠伤寒沙门菌人畜共患-)senteritidi.S()suischolera.S()mtyphimuriu.S(c肠杆菌科讲解61 一、生物学性状一、生物学性状（一）形态与染色（一）形态与染色 基本同基本同E.coli1.G-细长的中杆菌细长的中杆菌2.无芽胞、无荚膜，除雏白痢沙门菌和无芽胞、无荚膜，除雏白痢

39、沙门菌和鸡沙门菌外均具有周身鞭毛鸡沙门菌外均具有周身鞭毛3.多数菌株有菌毛多数菌株有菌毛 肠杆菌科讲解62 （二）培养特点（二）培养特点 基本同通性最适最适温度均能生长或兼性厌需普通培养基即可生长营养要求不高8.78.6373542102122pH，OO、，、3.生长现象生长现象（1 1）普通琼脂平板）普通琼脂平板 圆形，无色半透明，光滑湿润，圆形，无色半透明，光滑湿润，边缘整，粗糙型表面干燥边缘不整（呈锯齿状）。边缘整，粗糙型表面干燥边缘不整（呈锯齿状）。371824h无色透明较小菌落不分解乳糖菌落等选择培养基上中国蓝、EMBSSA(2)产生产生H2S的细菌在的细菌在SSA上形成带黑心的菌落

40、。上形成带黑心的菌落。肠杆菌科讲解63肠杆菌科讲解64肠杆菌科讲解65 （三）生化反应（三）生化反应 1.沙门菌与大肠埃希菌的区别沙门菌与大肠埃希菌的区别 乳乳 蔗蔗 I I E.coliE.coli +Salmonella -尿素尿素 Proteus +Salmonella -葡葡 麦麦 甘甘 鼠鼠 鸟鸟 C（柠）（柠）其他沙门菌其他沙门菌 /-+/-/-+/-伤寒沙门菌伤寒沙门菌 +-/+3.伤寒沙门菌与其他沙门菌的主要区别伤寒沙门菌与其他沙门菌的主要区别 2.沙门菌与变形杆菌的区别沙门菌与变形杆菌的区别 4.4.根据生化反应，沙门菌属分为根据生化反应，沙门菌属分为6 6个亚属个亚属肠杆菌

41、科讲解66肠杆菌科讲解67 I M V C肠杆菌科讲解68 （四）（四）Ag构造及分类构造及分类 1.菌体（菌体（O）Ag（1）组成）组成 就是细胞壁的脂多糖就是细胞壁的脂多糖（2）性质较稳定）性质较稳定（3 3）成分）成分 根据根据O-AgO-Ag的组成成分不同，共有的组成成分不同，共有5858种，用阿拉种，用阿拉伯字母伯字母1 1、2 2、33表示，目前已排至表示，目前已排至6767，其中有，其中有9 9个数码被个数码被删去，故数字不是连续的。并且将具有相同成分的沙门菌都删去，故数字不是连续的。并且将具有相同成分的沙门菌都归为一群（即每群都有它共同的归为一群（即每群都有它共同的AgAg），

42、这样使），这样使20002000种沙门菌种沙门菌归为归为A A、B B、C C、D D、E E、F F、II一直至一直至Z Z，在以，在以O O5151O O6767群表示群表示 (4）O-Ag机体机体产生产生IgM型型Ab O-Ag与与O-Ab呈颗粒状凝集呈颗粒状凝集石炭酸破坏不被酒精可达耐热、h5.2，100肠杆菌科讲解692.鞭毛（鞭毛（H）Ag（1）组成）组成Pr（2）性质不稳定）性质不稳定（3）具有鞭毛的细菌经甲醛固定后即制成）具有鞭毛的细菌经甲醛固定后即制成H-Ag，由于，由于H-Ag将将O-Ag遮盖，故遮盖，故O-Ag不能再不能再与与O-Ab发生凝集发生凝集（4）H-Ag机体机体

43、产生产生IgG型型Ab H-Ag与与H-Ab呈絮状凝集呈絮状凝集 酒精处理容易破坏破坏不耐热min157060肠杆菌科讲解70（5）H-Ag分两相分两相 同时具有两相的同时具有两相的H-Ag叫双相菌叫双相菌 仅有一相的仅有一相的H-Ag，叫单相菌，叫单相菌 3.表面表面Ag 目前已证实，本属细菌中的个别血清型具目前已证实，本属细菌中的个别血清型具有有Vi-Ag、M-Ag和和5Ag三种表面三种表面Ag。-)7(4,3,1 2,，70)117117P,117(zz,z,z，z)(zd,c,b,a，65321种以上目前有表示伯字母几种沙门菌共有。用阿拉第二相又叫非特异相第二相又叫非特异相多种目前有表

44、见表示以后则用小写直至表示用小写特异性高第一相又叫特异相第一相又叫特异相,肠杆菌科讲解71（五）抵抗力（五）抵抗力 本属细菌在自然界中生活能力较强，仅本属细菌在自然界中生活能力较强，仅次于大肠埃希菌，在土壤、水中可活几次于大肠埃希菌，在土壤、水中可活几周周几个月，在粪便中可活较长时间。几个月，在粪便中可活较长时间。1.耐冷不耐热耐冷不耐热 2.易被一般消毒剂杀死易被一般消毒剂杀死 3.胆盐、煌绿及其他染料对沙门菌的抑胆盐、煌绿及其他染料对沙门菌的抑制作用较其他肠道菌为小。制作用较其他肠道菌为小。肠杆菌科讲解72 二、致病性和免疫性二、致病性和免疫性 1.侵袭力侵袭力 有有Vi-Ag的伤寒沙门菌

45、比无的伤寒沙门菌比无Vi-Ag者要强得多者要强得多。2.内毒素内毒素3.有些菌型尚能产生肠毒素（如鼠伤寒有些菌型尚能产生肠毒素（如鼠伤寒沙门菌），其性质类似产毒素大肠埃希沙门菌），其性质类似产毒素大肠埃希菌。菌。（一）致病物质（一）致病物质肠杆菌科讲解73派伊尔淋巴派伊尔淋巴结的结的M细胞细胞通过两个通过两个型分泌系统型分泌系统沙门菌沙门菌黏附并侵入诱导细胞膜凹陷诱导细胞膜凹陷 导致细菌内吞导致细菌内吞沙门菌溶解吞噬小泡沙门菌溶解吞噬小泡 进入细胞质内繁殖进入细胞质内繁殖细胞到细胞传播导细胞到细胞传播导致宿主细胞死亡致宿主细胞死亡1.1.侵袭力侵袭力 繁殖繁殖输送外源性输送外源性Ag到其到其下

46、方的巨噬细胞下方的巨噬细胞沙门菌致病岛(SPI)沙门菌致病岛(SPI)沙门菌侵袭蛋白沙门菌侵袭蛋白向M细胞宿主细胞内肌宿主细胞内肌动纤维的重排动纤维的重排细菌扩散并进入毗细菌扩散并进入毗邻细胞淋巴组织邻细胞淋巴组织具有耐酸应具有耐酸应答基因答基因使细菌在胃和使细菌在胃和吞噬体的酸性吞噬体的酸性环境得到保护环境得到保护氧化酶氧化酶、超超氧化物歧化氧化物歧化酶酶保护细菌不被保护细菌不被胞内杀菌因素胞内杀菌因素杀伤杀伤伤寒沙门菌伤寒沙门菌希氏沙门菌希氏沙门菌Vi抗原抗原抗吞噬抗吞噬,阻挡抗阻挡抗体体、补体补体肠杆菌科讲解742.2.内毒素内毒素沙门菌死亡后沙门菌死亡后释放内毒素释放内毒素引起引起宿主

47、宿主KT ,WBC大剂量导致中毒大剂量导致中毒症状和休克症状和休克激活补体激活补体替代途径替代途径产生产生C3a、C5a等等诱发免疫细胞诱发免疫细胞、分泌分泌TNF-、IL-1、IFN-等细胞因子等细胞因子肠杆菌科讲解75（二）所致疾病（二）所致疾病1.伤寒、副伤寒沙门菌伤寒、副伤寒沙门菌肠热症肠热症2.食物中毒（急性胃肠炎）食物中毒（急性胃肠炎）3.败血症败血症 伤寒沙门菌食道口胃一 部 分 被 胃 酸 杀 死一 部 分至 小 肠粘 膜L管 L结 繁 殖局 部 结 增 生-L入 血（菌 血 症 期）（）12W扩 散 各 器官 和 皮 肤肝、胆 囊 肠 腔 粪 便 肾 尿（）体 外3W小 肠结

48、 炎 症 出 血 坏 死L第 二 次 胆 汁（）2W炎症出血性坏死炎症出血性坏死4.无症状带菌者无症状带菌者肠杆菌科讲解76 三、微生物学检查法（一）细菌学检查（一）细菌学检查 1.标本的采集标本的采集（1）肠热症：）肠热症：1 1血血2 2便便3 3检尿，要检骨髓全知道检尿，要检骨髓全知道（2）食物中毒）食物中毒：呕吐物、可疑食物、粪便：呕吐物、可疑食物、粪便（3）其他标本）其他标本：胆汁、脑脊液、胸腹水，应：胆汁、脑脊液、胸腹水，应离心后沉淀，供培养用；中耳分泌物、渗出液、离心后沉淀，供培养用；中耳分泌物、渗出液、脓液、咽喉、阴道等可用拭子采集。脓液、咽喉、阴道等可用拭子采集。注意事项：病

49、的晚期或用药，阳性率注意事项：病的晚期或用药，阳性率 病的初期阳性率不高病的初期阳性率不高肠杆菌科讲解77采集时机采集时机用药前用药前新鲜标本，立即送检（如不能立即送新鲜标本，立即送检（如不能立即送检应保存在冰箱、冰壶内，但不得超过检应保存在冰箱、冰壶内，但不得超过2h）血液标本应在出现症状后尽早静脉采血液标本应在出现症状后尽早静脉采血血5ml。肠杆菌科讲解782.检验方法检验方法（1）分离培养与增菌培养）分离培养与增菌培养增菌培养增菌培养孔雀绿氯化镁四硫磺酸盐一般沙门菌亚硒酸盐甲副伤寒增菌液不同沙门菌应选择不同、：、温度的选择温度的选择伤寒伤寒37其他沙门菌其他沙门菌4043 为好为好-麦康

50、凯中国蓝产选择亚硫酸铋琼脂琼脂强选择种各选培养基一次一次次进行分离培养、EMB、HE.SSA)1(h48h24162肠杆菌科讲解79（2）初步鉴定）初步鉴定-主要依据是生化和血清学两个主要依据是生化和血清学两个方面方面菌落特点：从选择性培养基上挑选菌落是一菌落特点：从选择性培养基上挑选菌落是一个重要环节，稍一疏忽则易遗漏个重要环节，稍一疏忽则易遗漏a.菌落以无色、光滑、较透明、扁平为主要特菌落以无色、光滑、较透明、扁平为主要特征，大小则往往不一。征，大小则往往不一。b.EMB-靠近大肠埃希菌者可呈深蓝色靠近大肠埃希菌者可呈深蓝色c.SSA-产生产生H2S者带黑心者带黑心d.对可疑菌落用笔圈出（