实验五用大肠杆菌生长曲线的测定课件.ppt

1、林亲雄林亲雄 阎春兰阎春兰 李晓华李晓华一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理一个典型的生长曲线分为延缓期、对数期、一个典型的生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期稳定期和衰亡期四个时期微生物数量的测定方法微生物数量的测定方法稀释平板计数法稀释平板计数法显微镜直接计数法显微镜直接计数法最大概率法最大概率法光电比浊法光电比浊法稀释平板计数法稀释平板计数法对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。优点：优点：活菌计数方法，对设备要求不高。活菌计数方法，对设备要求不高。缺点：缺点：操作复杂。操作复杂。显微镜直接计数法显微镜直接计数法使用血球计数板在

2、显微镜下直接计数。使用血球计数板在显微镜下直接计数。优点：优点：操作简便，计数直观。操作简便，计数直观。缺点：缺点：计数结果为活细菌和死菌体的总和。计数结果为活细菌和死菌体的总和。最大概率法最大概率法 待测菌液经十倍系列稀释，每稀释度做待测菌液经十倍系列稀释，每稀释度做3-53-5个重复，经培养后，检查细菌的生长，以有细个重复，经培养后，检查细菌的生长，以有细菌生长的最后三个稀释度的管数作数量指标，菌生长的最后三个稀释度的管数作数量指标，由数理统计表查出近似值，再乘以数量指标第由数理统计表查出近似值，再乘以数量指标第一位的稀释倍数，即为原菌液中的菌数。一位的稀释倍数，即为原菌液中的菌数。最大概

3、率法最大概率法例如：某细菌在稀释培养法中生长情况如下：例如：某细菌在稀释培养法中生长情况如下：稀释度：稀释度：10 10-3-3 10 10-4-4 10 10-5-5 10 10-6-6 10 10-7-7 10 10-8-8重复数：重复数：5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5有菌生长管数：有菌生长管数：5 5 5 4 1 0 5 5 5 4 1 0根据上述结果，数量指标为根据上述结果，数量指标为“541541”，查表得近似值为，查表得近似值为1717，乘，乘以第一位数的稀释倍数，得出原始培养物的活菌数以第一位数的稀释倍数，得出原始培养物的活菌数=171710105 5个个优点：优

4、点：活菌计数，适用于特殊细菌。活菌计数，适用于特殊细菌。缺点：缺点：计数结果为概值。计数结果为概值。光电比浊法是利用在一定的范围内，微生物细光电比浊法是利用在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比的原理。当细菌细胞在胞浓度与透光度成反比的原理。当细菌细胞在溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中测定时所吸收的光线越多。测定时所吸收的光线越多。优点：优点：简便快速，适合于自动控制。简便快速，适合于自动控制。缺点：缺点：测定结果受培养液成分影响；某些样品测定结果受培养液成分影响；某些样品 样品不适合用此法。样品不适合用此法。三、实验器材三、实验器材四、实

5、验步骤四、实验步骤1.1.样品测试前的调试样品测试前的调试 比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样品润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光品润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光面只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。面只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。比色皿之间吸光度进行比较。比色皿之间吸光度进行比较。四、实验结果四、实验结果 记录不同记录不同的的ODOD600600值，值，并绘制大肠杆菌的生长曲线。并绘制大肠杆菌的生长曲线。五、思考题五、思考题光电比浊计数的原理是什么？这种计数法有何光电比浊计数的原理是什么？这种计数法有何优缺点？优缺点？如果用活菌计数法制作生长曲线，

6、你认为会有如果用活菌计数法制作生长曲线，你认为会有什么不同？两者各有什么优缺点？什么不同？两者各有什么优缺点？一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、实验器材三、实验器材N-乙酰葡糖胺四、实验步骤四、实验步骤1.1.南湖水中微生物的测定南湖水中微生物的测定每个培养皿每个培养皿加加0.1ml 0.1ml 稀稀释液释液(LTA)2.2.微生物的测定微生物的测定 用棉签分别从牙周、人民币纸币和门把手表用棉签分别从牙周、人民币纸币和门把手表面挑取微生物，然后放入装有面挑取微生物，然后放入装有0.5 ml0.5 ml无菌水的无菌水的EPEP管中，颠倒均匀后，用移液器全部吸入牛肉膏蛋管中，颠倒均匀后，用移液器全部吸入牛肉膏蛋白胨平板中，涂布均匀。白胨平板中，涂布均匀。3.3.微生物的测定微生物的测定 将牛肉膏蛋白胨平板盖揭开，分别置实验台将牛肉膏蛋白胨平板盖揭开，分别置实验台1010，2020，3030，4040，5050，60 min60 min后，盖上皿盖，倒置培养。后，盖上皿盖，倒置培养。4.4.微生物的测定微生物的测定 取取1 ml1 ml涂布牛肉膏蛋白胨平板。涂布牛肉膏蛋白胨平板。用无菌用无菌三角瓶收集。三角瓶收集。观测实验结果时间？观测实验结果时间？五、思考题五、思考题