一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨培训课课件.ppt
- 【下载声明】
1. 本站全部试题类文档,若标题没写含答案,则无答案;标题注明含答案的文档,主观题也可能无答案。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
2. 本站全部PPT文档均不含视频和音频,PPT中出现的音频或视频标识(或文字)仅表示流程,实际无音频或视频文件。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
3. 本页资料《一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨培训课课件.ppt》由用户(晟晟文业)主动上传,其收益全归该用户。163文库仅提供信息存储空间,仅对该用户上传内容的表现方式做保护处理,对上传内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(点击联系客服),我们立即给予删除!
4. 请根据预览情况,自愿下载本文。本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
5. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007及以上版本和PDF阅读器,压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 一种 新型 呋喃 萘二酮 衍生物 体内 体外 人类 结肠癌 细胞 增殖 活性 及其 相关 分子 机理 探讨 培训 课件
- 资源描述:
-
1、L/O/G/O一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨论文信息论文信息1.文章所刊登的学术杂志:Chemico-Biological Interactions(化学与生物相互作用)发表时间:2011年5月3日2.文章作者:韩国首尔国立大学药学院 Hwa-Jin Chung,Sang Kook Lee韩国首尔梨花女子大学药学院 Hee-Kyung Rhee,Hea-Young Park Choo3.关键词:苯并呋喃并萘二酮衍生物(Benzonaphthofurandione derivative)癌细胞 HCL116抗癌活性(Antitumo
2、r activity)G0/G1期的细胞周期停滞(G0/G1 cell cycle arrest)表皮生长因子受体/雷帕霉素靶蛋白信号发送(EGFR/mTOR signaling)2一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨ppt结构结构1.Introduction2.Methods and results3.Discussions3一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨主要实验流程主要实验流程1.测定对比8e和阿霉素对癌细胞的增殖抑制效力(以半抑制浓度表示),并用倒置相差显微镜观察癌细
3、胞前后形态2.用不同浓度的8e处理癌细胞24h和48h,并用流式细胞术分析癌细胞的细胞周期分布4.提取第2步得到的癌细胞中与细胞周期和信号转导相关的蛋白,并用Western blot技术分析这些蛋白质的表达水平,以推测8e的抑癌机理3.将癌细胞移植到无胸腺小鼠身上使其长成肿瘤,分析8e和阿霉素对肿瘤生长的抑制效果,并对肿瘤组织进行免疫组化分析4一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨1.Introduction背景:结肠癌是世界范围内的头号癌症杀手之一,每年有大约一百万的新增病例。尽管全球结肠癌的发病率在逐步下降,但近年来由于饮食习惯的西化
4、,亚洲国家结肠癌患者数目显着上升。因此仍有必要开发新型的抗结肠癌药物。阿霉素(Doxorubicin),一种蒽环类化合物,是临床上用来作为治疗癌症的药物。下面我们来看看8e和阿霉素(Doxorubicin)的化学结构式。5一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨8e8e的结构式的结构式6一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨阿霉素阿霉素(Doxorubicin)(Doxorubicin)【作用与用途】阿霉素是一种广谱抗肿瘤抗生素,可抑制RNA 和DNA的合成,对RNA的抑制作用最强,对
5、多种肿瘤均有作用,属非周期特异性药物,对各种生长周期的肿瘤细胞都有杀灭作用。但有一定的毒副作用。【毒性反应】白细胞和血小板减少,约60%80%的病人可发生;100%的病人有不同程度的毛发脱落,停药后可以恢复生长;心脏毒性,表现为心律失常,ST-T改变(ST和T 分别指两种心电波)、恶心、食欲减退;药物溢出血管外可引起组织溃疡及坏死。另外,用药后尿液可出现红色。7一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨2.Methods and results 2.1化学试剂(Chemicals)(略)2.2合成8e(Synthesis of compoun
6、d 8e):按已发表的文献提供的化学合成方法人工合成。2.3癌细胞的培养(Cell culture):人结肠癌细胞HCL116由美国模式培养物保藏所(ATCC)提供,用加富的RPMI1640培养基培养,该培养基另外加入了10%热灭活的胎牛血清(FBS),100单位/mL青霉素(盘尼西林),100ug/mL链霉素,250ng/mL两性霉素B。置于含5%CO2的控湿氛围中培养。8一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨2.4 8e8e和阿霉素对癌细胞和阿霉素对癌细胞抑制抑制效效力的测力的测定定:癌细胞HCL116(以1104 个/mL的密度植于
7、96孔盘)分别加入不同浓度的8e或阿霉素(Doxorubicin)后置于37含5%CO2的控湿氛围中培养72h。经其他步骤处理后用570nm波长测量吸光度以求得存活细胞的数量,并用非线性回归分析的方法计算8e和阿霉素对癌细胞的半抑制浓度(IC50)。9一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨8e8e和阿霉素对癌细胞的半抑制浓度和阿霉素对癌细胞的半抑制浓度,10一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨结果结果计算结果表明阿霉素对癌细胞的半抑制浓度为46.2 nm/L,而8e对癌细胞的半抑制
8、浓度为52.9nm/L,8e的抑癌效力稍逊于阿霉素。用8e处理癌细胞24h和48h后用倒置相差显微镜观察癌细胞的形态。虽然癌细胞存活的数量随8e浓度增大而递减,但实验组的癌细胞与对照组相比并没有明显的形态学变化。11一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨倒置相差显微镜对倒置相差显微镜对8e处理后癌细胞的观察结果处理后癌细胞的观察结果8e处理后癌细胞变得稀疏,但没有明显的形态学变化。12一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨2.5 8e 8e对癌细胞细胞周期分布的影响对癌细胞细胞周期分
9、布的影响 用磷酸盐缓冲液配制25、50、75nm/L的8e溶液为实验组,并以磷酸缓冲液为空白对照,分别处理癌细胞,在24h和48h后用流式细胞仪分析癌细胞的细胞周期分布。13一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨流式细胞术分析细胞周期流式细胞术分析细胞周期分布的结果分布的结果14一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨结果表明细胞周期停滞在G0/G1时期与8e的浓度有关15一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨 2.6蛋白质印迹分
10、析蛋白质印迹分析将经过25、50、75nm/L的8e处理24和48小时后的癌细胞的总蛋白质提取出来后,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分离并电转移到聚偏二氟乙烯薄膜上,薄膜用特制的缓冲液在室温下处理1h,接着用以磷酸盐缓冲液稀释的特异性抗体进一步在4下过夜处理。然后用特制的缓冲液洗涤后,薄膜在室温下用二抗标记的辣根过氧化物酶继续处理2h,然后用荧光影像分析仪配合辣根过氧化物酶荧光检测试剂盒来显像。16一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨 蛋白质免疫印迹分析蛋白质免疫印迹分析图谱图谱17一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对
11、人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨蛋白质免疫印迹分析蛋白质免疫印迹分析图谱图谱18一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨 2.7小鼠小鼠体内体内肿瘤生长抑制实验肿瘤生长抑制实验实验采用6星期大的雄性无胸腺小鼠(athymic mice)。在第0天将HCL116癌细胞悬液皮下注射到每只小鼠的右侧腹部,当肿瘤体积长到9095mm3时(约在接种后第7天)开始用8e或阿霉素对小鼠进行治疗。实验之前小鼠被随机分为6组(5个实验组和1个对照组),每组6只。5个实验组:阿霉素3mg/kg/day,8e 2mg/kg/day,8e 5mg/
12、kg/day,8e 10mg/kg/day,8e(5mg/kg/day)阿霉素(3mg/kg/day)8e和阿霉素分别溶于磷酸盐缓冲液并设置1个只有溶剂的空白对照。5组药物都是以腹膜内注射的方式给药,每周3次,持续3周,每组共给药9次。19一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨小鼠体重和肿瘤体积的变化小鼠体重和肿瘤体积的变化自接种癌细胞当天起,于第0、9、18、24、28天对小鼠进行体重称量和肿瘤体积的测量。(在第28天实验结束可以将小鼠身上的肿瘤摘取下来通过液体推排法测量肿瘤的体积,但由于实验过程中在不能摘取肿瘤的情况下也要测量肿瘤的体
13、积,因此本实验中肿瘤体积的测量是通过较为精准地测量肿瘤的长宽高,然后用公式(体积=长 宽高/6)计算出来的。不同时期的小鼠体重以柱状图表示,肿瘤体积以折线图表示。20一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨小鼠与摘取下来的肿瘤小鼠与摘取下来的肿瘤21一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨小鼠体重的变化小鼠体重的变化22一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨肿瘤体积的变化肿瘤体积的变化与对照相比的肿瘤抑制率23一种新型的苯并呋喃并萘
14、二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨对肿瘤组织进行免疫组化分析对肿瘤组织进行免疫组化分析用抗Ki-67抗体对肿瘤组织进行免疫组化分析以检测癌细胞的增殖情况。Ki-67是一种与细胞周期相关的增殖细胞核抗原(PCNA)。Ki-67是目前多种恶性肿瘤尤其是乳腺癌研究中的热门生物标志物,可以通过对Ki-67的检测了解恶性肿瘤的细胞增殖活性。24一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生物在体内和体外对人类结肠癌细胞的抗增殖活性及其相关分子机理的探讨肿瘤的免疫组化分析结果肿瘤的免疫组化分析结果分析结果表明8e抑制了增殖细胞核抗原Ki-67的表达。25一种新型的苯并呋喃并萘二酮衍生
展开阅读全文
链接地址:https://www.163wenku.com/p-3783437.html