真菌检验主题医学知识课件.ppt

1、2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院讲课内容讲课内容真菌感染真菌感染检验程序检验程序123深部感染真菌检验深部感染真菌检验4标本的采集、运送和保存标本的采集、运送和保存浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验 2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。真菌感染真菌感染检验检验v按其侵犯人体组织和器官的不同，临床上将真按其侵犯人体组织和器官的不同，临床上将真菌分为引起皮肤和软组织感染的真菌和引起侵菌分为引起皮肤和软组织感染的真菌和引起侵袭性感染的真菌两大类。皮肤和软组织感染的袭性感染的真菌两大类。皮肤和软组织感染的真菌，又称为真菌，又称为

2、浅部真菌（浅部真菌（superficial fungisuperficial fungi），主要侵犯机体皮肤、毛发和指（趾）甲，寄主要侵犯机体皮肤、毛发和指（趾）甲，寄生和腐生于表皮、毛发和甲板的角质组织中。生和腐生于表皮、毛发和甲板的角质组织中。深部感染真菌深部感染真菌主要侵袭深部组织和内脏以及全主要侵袭深部组织和内脏以及全身身。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。临床标本真菌检验程序临床标本真菌检验程序上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。真菌鉴定程序真菌鉴定程序上海交通大学医学院上海

3、交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。标本的采集、运送和保存标本的采集、运送和保存v合适采集、运送与处理标本合适采集、运送与处理标本以及遵守真菌实验以及遵守真菌实验检测与鉴定程序是保证真菌感染的实验检测结检测与鉴定程序是保证真菌感染的实验检测结果正确的前提。果正确的前提。v所有标本均应在密封无菌容器运送和处理，运所有标本均应在密封无菌容器运送和处理，运送时间越短越好；不能用厌氧转运或厌氧容器送时间越短越好；不能用厌氧转运或厌氧容器。粪便不推荐作为真菌检验的标本。粪便不推荐作为真菌检验的标本。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之

4、处，请联系改正。标本标本v 毛发毛发、皮屑皮屑、指（趾）甲指（趾）甲v 脓液、伤口、创伤及软组织脓液、伤口、创伤及软组织v 血液、骨髓血液、骨髓v 导管头导管头v 结膜结膜、角膜刮片角膜刮片、玻璃体、前房穿刺液玻璃体、前房穿刺液v 前列腺液前列腺液、阴道分泌物阴道分泌物v 尿液尿液v 下呼吸道标本（痰、支气管肺泡灌洗液、支气管保护性下呼吸道标本（痰、支气管肺泡灌洗液、支气管保护性毛刷）毛刷）v 上呼吸道标本上呼吸道标本v 无菌体液（脑脊液、心包液，腹膜液和滑膜液）无菌体液（脑脊液、心包液，腹膜液和滑膜液）v 组织组织v v 上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不

5、当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院20

6、09年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验v浅部感染真菌包括浅部感染真菌包括表面感染真菌、皮肤癣真菌和皮表面感染真菌、皮肤癣真菌和皮下组织感染下组织感染真菌三类。真菌三类。v临床上最多见的为皮肤癣真菌，包括毛临床上最多见的为皮肤癣真菌，包括毛癣菌属、表癣菌属、表皮癣菌属和小孢子菌属。皮癣菌属和小孢子菌属。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染

7、真菌检验检验-皮肤癣菌皮肤癣菌v（一）分类和命名（一）分类和命名v 皮肤癣菌（皮肤癣菌（DermatophytesDermatophytes）是一类嗜角质的丝状真）是一类嗜角质的丝状真菌，具有无性期和有性期两种形态。大多数从环境和菌，具有无性期和有性期两种形态。大多数从环境和人体分离到的菌株处于无性期，属于丛梗孢科。按菌人体分离到的菌株处于无性期，属于丛梗孢科。按菌落特征及大分生孢子的形态将皮肤癣菌分为落特征及大分生孢子的形态将皮肤癣菌分为3 3个属，个属，即即毛癣菌属毛癣菌属(Trichophyton Trichophyton)、v 小孢子菌属小孢子菌属(MicrosporumMicrosp

8、orum)v 及表皮癣菌属及表皮癣菌属(Epidermophyton)Epidermophyton)。v 有性期属于裸囊菌科、节皮菌属有性期属于裸囊菌科、节皮菌属(Arthroderma)(Arthroderma)。皮皮肤癣菌种类见肤癣菌种类见下下表表2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验-皮肤癣菌皮肤癣菌v（二二）临床意义临床意义v 毛癣菌属易侵犯人体皮肤、指（趾）甲、毛发的角蛋毛癣菌属易侵犯人体皮肤、指（趾）甲、毛发的角蛋白组织并生长繁殖，可引起头癣、体癣、

9、股癣、叠瓦白组织并生长繁殖，可引起头癣、体癣、股癣、叠瓦癣、手癣、足癣及甲癣等。癣、手癣、足癣及甲癣等。v 皮肤癣菌是接触传染，不论男女老少，只要反复接触皮肤癣菌是接触传染，不论男女老少，只要反复接触患者均有可能被感染。患者均有可能被感染。v 引起皮肤和软组织感染的真菌痊愈，但痊愈后仍可再引起皮肤和软组织感染的真菌痊愈，但痊愈后仍可再感染皮肤癣菌。少数过敏体质的皮肤癣病患者可出现感染皮肤癣菌。少数过敏体质的皮肤癣病患者可出现过敏反应，表现为癣菌疹。过敏反应，表现为癣菌疹。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验-皮肤癣菌皮肤癣菌v（三）真菌（三）真

10、菌检验检验v 1.1.标本的采集、运送和保存标本的采集、运送和保存v 1 1）甲标本甲标本 采集标本前用采集标本前用75%75%乙醇彻底乙醇彻底清洁病甲清洁病甲，以，以减少培养时的细菌污染，提高镜检的阳性率。钝刀用减少培养时的细菌污染，提高镜检的阳性率。钝刀用高压或者火焰灭菌，从甲的变色、萎缩或变脆部位、高压或者火焰灭菌，从甲的变色、萎缩或变脆部位、健甲与病甲的健甲与病甲的交界处取材交界处取材，保证一定量与一定深度标，保证一定量与一定深度标本。甲标本建议取材后立刻进行真菌镜检及培养，甲本。甲标本建议取材后立刻进行真菌镜检及培养，甲标本应尽量剪碎后接种。对于伴有甲沟炎患者的取材标本应尽量剪碎后接

11、种。对于伴有甲沟炎患者的取材，应采用棉拭子，应采用棉拭子，75%75%乙醇清洁局部后沾取损害分泌乙醇清洁局部后沾取损害分泌物，每位患者至少应取两个拭子，放入无菌试管中以物，每位患者至少应取两个拭子，放入无菌试管中以备镜检和培养。备镜检和培养。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验-皮肤癣菌皮肤癣菌v（三）真菌三）真菌检验检验v 1.1.标本的采集、运送和保存标本的采集、运送和保存v 2 2）皮屑标本皮屑标本 采集标本前用采集标本前用75%75%乙醇清洁取材区域。乙醇清洁取材区域。用高压或者火焰灭菌钝刀，从损害的边缘向外刮取或用高压或者火焰灭菌钝刀

12、，从损害的边缘向外刮取或用剪刀剪去疱顶。如果鳞屑量较少或婴幼儿患者，用剪刀剪去疱顶。如果鳞屑量较少或婴幼儿患者，可可采用粘着透明胶带或粘着皮肤采样送检采用粘着透明胶带或粘着皮肤采样送检，将透明胶带，将透明胶带粘着面紧压于损害之上，然后剥下，将粘着面向下贴粘着面紧压于损害之上，然后剥下，将粘着面向下贴在透明载玻片上送检。皮屑标本建议在透明载玻片上送检。皮屑标本建议取材后立刻进行取材后立刻进行真菌镜检及培养。真菌镜检及培养。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验-皮肤癣菌皮肤癣菌v（三）真菌（三）真菌检验检验v 1.1.标本的采集、运送和保存标本的采

13、集、运送和保存v 3 3）毛发标本毛发标本 选择适当的毛发，应检测那些选择适当的毛发，应检测那些无光泽无光泽毛发或断发以及在毛囊口折断的毛发毛发或断发以及在毛囊口折断的毛发。先将镊子高压。先将镊子高压灭菌，用镊子将毛发从头皮拔除。灭菌，用镊子将毛发从头皮拔除。不应去掉毛根部不应去掉毛根部。如果怀疑头皮隐性感染，可用塑料梳子刷头皮后将其如果怀疑头皮隐性感染，可用塑料梳子刷头皮后将其压在琼脂表面进行培养。压在琼脂表面进行培养。毛发标本建议取材后立刻进毛发标本建议取材后立刻进行真菌镜检及培养。行真菌镜检及培养。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验-皮

14、肤癣菌皮肤癣菌v（三）真菌三）真菌检验检验v 2.常用检验方法v 1 1）直接显微镜检查直接显微镜检查v【操作】皮屑标本用【操作】皮屑标本用 10 10 KOH液；甲屑用；甲屑用 25 25 KOH KOH液液或或2525NaOHNaOH液含液含5 5甘油处理后甘油处理后制成涂片制成涂片；病发置载玻片；病发置载玻片上，加上，加10%KOH10%KOH微加温使角质溶解。直接镜检或棉蓝染色微加温使角质溶解。直接镜检或棉蓝染色后镜检。后镜检。检查时应遮去强光，先在低倍镜下检查有无菌检查时应遮去强光，先在低倍镜下检查有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特征丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和

15、菌丝的形态、特征、位置、大小和排列等。、位置、大小和排列等。v【结果判定】皮肤癣菌感染在皮屑、甲屑镜检时可见【结果判定】皮肤癣菌感染在皮屑、甲屑镜检时可见有有隔菌丝或成串孢子隔菌丝或成串孢子,病发可见发内孢子或发外孢子；病发可见发内孢子或发外孢子；v【注意事项】掌握真菌菌丝或孢子判定标准，即具有一【注意事项】掌握真菌菌丝或孢子判定标准，即具有一定折光性的为菌丝或孢子，勿将纤维、细胞等误认为真定折光性的为菌丝或孢子，勿将纤维、细胞等误认为真菌。菌。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验-皮肤癣菌皮肤癣菌v（三）真菌（三）真菌检验检验v 2.2.分离

16、培养分离培养 分离培养的目的在于鉴定真菌的菌种。分离培养的目的在于鉴定真菌的菌种。v【操作】真菌小培养法参见深部真菌标本【操作】真菌小培养法参见深部真菌标本v【结果判定】【结果判定】v 1 1.真菌生长后观察菌落真菌生长后观察菌落的以下方面的以下方面 生长速度；生长速度；菌落大小：以菌落大小：以mmmm或或cmcm记录菌落直径；表面形态：记录菌落直径；表面形态：菌落性质；菌落颜色；菌落边缘；菌落底部菌落性质；菌落颜色；菌落边缘；菌落底部v 2.2.显微镜下观察显微镜下观察 高倍镜观察孢子和菌丝的形态、高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列依据菌落特征，镜检特点，特征、位置、大小和排

17、列依据菌落特征，镜检特点，尤其是大分生孢子形状及特殊形状菌丝，必要时辅以尤其是大分生孢子形状及特殊形状菌丝，必要时辅以鉴别试验鉴定皮肤癣菌。鉴别试验鉴定皮肤癣菌。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验-皮肤癣菌皮肤癣菌鉴定鉴定v 皮肤癣菌菌种鉴定主要依靠培养的皮肤癣菌菌种鉴定主要依靠培养的菌落特征、显微镜下菌落特征、显微镜下孢子和菌丝的形态以及生理生化试验。孢子和菌丝的形态以及生理生化试验。v 其中关键在于促进皮肤癣菌产生孢子，对于难于产孢的其中关键在于促进皮肤癣菌产生孢子，对于难于产孢的菌种需要采用特殊培养基诱导产孢，例如：对于怀疑毛菌种需要采

18、用特殊培养基诱导产孢，例如：对于怀疑毛癣菌属可以采用癣菌属可以采用燕麦培养基燕麦培养基，对于怀疑小孢子菌属可以，对于怀疑小孢子菌属可以采用采用米饭培养基米饭培养基。v 个别上述方法均难以鉴定菌种需要借助分子生物学方法个别上述方法均难以鉴定菌种需要借助分子生物学方法鉴定。鉴定。v 皮肤癣菌试验培养基（皮肤癣菌试验培养基（dermatophyte test medium,DTMdermatophyte test medium,DTM）用于皮）用于皮肤癣菌筛选。皮（甲）屑与毛发标本接种该培养基，随着皮肤癣菌肤癣菌筛选。皮（甲）屑与毛发标本接种该培养基，随着皮肤癣菌生长，生长，1 1周内培养基由黄色转

19、变为红色。培养基中大豆蛋白胨提供周内培养基由黄色转变为红色。培养基中大豆蛋白胨提供营养，放线菌酮抑制腐生霉菌，氯霉素抑制革兰阳性菌和庆大霉素营养，放线菌酮抑制腐生霉菌，氯霉素抑制革兰阳性菌和庆大霉素抑制革兰阴性菌。镜下很容易识别皮肤癣菌的形态特征。抑制革兰阴性菌。镜下很容易识别皮肤癣菌的形态特征。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验-皮肤癣菌皮肤癣菌鉴定鉴定v 1.1.毛癣菌属毛癣菌属 在SDA（加CCG）上27+1培养，毛癣菌属菌落生长速度慢到中等；质地光滑到毛状；表面呈白色、黄色、米黄色或红紫色，背面呈苍

20、白色、黄色、褐色或红褐色。显微镜下大分生孢子呈多细胞、圆柱状、棒状或香烟形，壁光滑，常缺乏。小分生孢子呈单细胞、圆形、梨形或棒形，孤立或像葡萄状群生。有时存在关节型孢子和厚膜孢子。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。毛癣菌：菌落灰白、红、毛癣菌：菌落灰白、红、橙或棕色橙或棕色,表面呈绒毛状、表面呈绒毛状、粉粒状或蜡样。大分生孢粉粒状或蜡样。大分生孢子细长棒状薄壁。菌丝有子细长棒状薄壁。菌丝有螺旋状、球拍状、鹿角状螺旋状、球拍状、鹿角状和结节状和结节状2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。毛癣菌属毛癣菌属(Trichophyton Trichophyton)上海

21、交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验鉴定鉴定v2.2.小孢子菌属小孢子菌属(MicrosporumMicrosporum)菌落生长慢到快；菌落生长慢到快；质地光滑、毛状或羊毛状；表面颜色呈白色、米黄质地光滑、毛状或羊毛状；表面颜色呈白色、米黄色、黄棕色、黄色或锈色，背面呈苍白色、黄色、色、黄棕色、黄色或锈色，背面呈苍白色、黄色、红色、褐色或红褐色。显微镜下大分生孢子呈梭形红色、褐色或红褐色。显微镜下大分生孢子呈梭形，壁薄或厚，有棘状突起，孤立，含，壁薄或厚，有棘状突起，孤立，含225225个细胞。个细胞。小分生孢

22、子单细胞，卵圆形到棒形，孤立。小分生孢子单细胞，卵圆形到棒形，孤立。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。小孢子癣菌：菌落为小孢子癣菌：菌落为灰色、橘红色或棕黄灰色、橘红色或棕黄色，厚壁大分生孢子，色，厚壁大分生孢子，菌丝有结节状、梳状菌丝有结节状、梳状和球拍状和球拍状(MicrosporumMicrosporum)2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验鉴定鉴定v3.表皮癣菌属表皮癣菌属(Epidermophyton)Epidermophyton)菌落生长缓慢；质菌落生长缓慢；质地膜状变成毡状到粉状；表面呈黄色到土黄色，背面呈羚地

23、膜状变成毡状到粉状；表面呈黄色到土黄色，背面呈羚羊皮色到褐色，中心有不规则皱襞或脑回状沟。显微镜下羊皮色到褐色，中心有不规则皱襞或脑回状沟。显微镜下大分生孢子丰富，棒形、顶端钝圆、壁薄、光滑、孤立或大分生孢子丰富，棒形、顶端钝圆、壁薄、光滑、孤立或成群，形成在菌丝侧壁或顶端，成群，形成在菌丝侧壁或顶端，2323个一组。无小分生孢子个一组。无小分生孢子，在成熟菌落中形成，在成熟菌落中形成大量厚壁孢子大量厚壁孢子。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。表皮癣菌：菌落初为表皮癣菌：菌落初为白色鹅毛状白色鹅毛状,以后变为以后变为黄绿色粉末状。粗棒黄绿色粉末状。粗棒状薄壁大分生孢子。状薄

24、壁大分生孢子。菌丝球拍状菌丝球拍状(Epidermophyton)Epidermophyton)2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验v角层癣菌角层癣菌v角层癣菌主要寄居于人体皮肤和毛干的最表层，因不接触组织细胞，很少引起宿主组织细胞的炎症反应，即使有也极轻微。临床主要有糠秕马拉癣菌（Malassezia furfur）、何德毛结节菌（Piedraia hortae）和白吉尔丝孢酵母（Trichosporon beigelii）。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。糠秕马拉癣菌（糠秕马拉癣菌（Malassezia furfurM

25、alassezia furfur）v 糠秕马拉癣菌主要寄居在人体皮肤和毛干的最表层，可糠秕马拉癣菌主要寄居在人体皮肤和毛干的最表层，可在健康人皮肤上分离到，为条件致病菌。在健康人皮肤上分离到，为条件致病菌。v 侵入表皮后，在皮肤角质层外侵入表皮后，在皮肤角质层外2/32/3处生长、繁殖，引起一处生长、繁殖，引起一种种慢性、无症状或轻微症状的皮肤斑疹，慢性、无症状或轻微症状的皮肤斑疹，呈灰白色、褐呈灰白色、褐色或淡黄色，上面附着细小糠皮样鳞屑，有时可融合成色或淡黄色，上面附着细小糠皮样鳞屑，有时可融合成片，似汗渍斑点，俗称片，似汗渍斑点，俗称汗斑即花斑癣（汗斑即花斑癣（tinea tinea v

26、ersicolorversicolor）。皮损最常见于胸、背、臂的上半部皮脂。皮损最常见于胸、背、臂的上半部皮脂腺丰富部位。病程缓慢，多年不愈，对健康无碍，但影腺丰富部位。病程缓慢，多年不愈，对健康无碍，但影响美观。油性皮肤易感，而且与遗传、免疫缺陷等因素响美观。油性皮肤易感，而且与遗传、免疫缺陷等因素有关，诱发因素为高温多汗。近年大量研究显示，糠秕有关，诱发因素为高温多汗。近年大量研究显示，糠秕马拉癣菌还可引起毛囊炎，可能为脂溢性皮炎的重要发马拉癣菌还可引起毛囊炎，可能为脂溢性皮炎的重要发病原因之一。病原因之一。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请

27、联系改正。糠秕马拉癣菌（糠秕马拉癣菌（Malassezia furfurMalassezia furfur）v真菌真菌检验检验v1.1.标本采集标本采集 疑似汗斑癣：病损极为表浅，以钝疑似汗斑癣：病损极为表浅，以钝手术刀取材时应尽可能刮取表面皮屑，或用双面手术刀取材时应尽可能刮取表面皮屑，或用双面胶粘贴于皮肤表面，数分钟后揭下，直接移至载胶粘贴于皮肤表面，数分钟后揭下，直接移至载玻片上。有时可借助玻片上。有时可借助WoodsWoods灯照射呈金黄色荧灯照射呈金黄色荧光处取材。疑似毛结节癣：取带有结节的病发、光处取材。疑似毛结节癣：取带有结节的病发、胡须。胡须。上海交通大学医学院上海交通大学医学

28、院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。糠秕马拉癣菌（糠秕马拉癣菌（Malassezia furfurMalassezia furfur）v 真菌真菌检验检验v 2.2.直接显微镜检查直接显微镜检查 将取材的胶带直接贴于载玻片上镜将取材的胶带直接贴于载玻片上镜检或经棉蓝染色或革兰染色后检查，皮屑加检或经棉蓝染色或革兰染色后检查，皮屑加10%KOH10%KOH制片制片、观察。如果是糠秕马拉癣菌感染，可找到、观察。如果是糠秕马拉癣菌感染，可找到弯曲或弧形弯曲或弧形的菌丝及圆形或卵圆形孢的菌丝及圆形或卵圆形孢 子。子。v 病发置载玻片上，加病发置载玻片上，加10%KOH10%KOH微

29、加温使角质溶解，直接镜微加温使角质溶解，直接镜检或棉蓝染色后镜检。何德毛结节菌引起的感染可见：检或棉蓝染色后镜检。何德毛结节菌引起的感染可见：菌丝分枝、棕色，菌丝分隔形成关节孢子，并可见子囊菌丝分枝、棕色，菌丝分隔形成关节孢子，并可见子囊，每个子囊内含，每个子囊内含2 24 4个新月形子囊孢子。白吉尔丝孢酵个新月形子囊孢子。白吉尔丝孢酵母菌引起的感染可见：菌丝淡绿色，与毛干垂直，分裂母菌引起的感染可见：菌丝淡绿色，与毛干垂直，分裂为圆形、卵圆形或长方形的孢子，无子囊及子囊孢子。为圆形、卵圆形或长方形的孢子，无子囊及子囊孢子。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不

30、当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。糠秕马拉癣菌（糠秕马拉癣菌（Malassezia furfurMalassezia furfur）v 3.3.分离培养分离培养 疑似花斑癣的鳞屑标本接种于含氯霉素、疑似花斑癣的鳞屑标本接种于含氯霉素、放线菌酮及植物油的沙氏培养基上，放线菌酮及植物油的沙氏培养基上，3535培养，观察菌培养，观察菌落。疑似毛结节癣的病发接种于含放线菌酮的沙氏培养落。疑似毛结节癣的病发接种于含放线菌酮的沙氏培养基上，基上，2929培养，观察菌落。培养，观察菌落。v 4.4.鉴定鉴定 糠秕马拉癣菌的主要特征是

31、：病损皮屑糠秕马拉癣菌的主要特征是：病损皮屑WoodsWoods灯照射呈金黄色荧光，嗜脂性生长，灯照射呈金黄色荧光，嗜脂性生长，酵母型菌酵母型菌落，腊肠样菌丝，厚壁孢子落，腊肠样菌丝，厚壁孢子。根据病发上。根据病发上结节结节的颜色、的颜色、硬度、大小，即可对何德毛结节菌和白吉尔丝孢酵母菌硬度、大小，即可对何德毛结节菌和白吉尔丝孢酵母菌初步诊断，初步诊断，直接镜检看到子囊或子囊孢子直接镜检看到子囊或子囊孢子，可确定为何，可确定为何德毛结节菌。德毛结节菌。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月

32、资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验v皮下组织感染真菌皮下组织感染真菌v引起皮下组织感染的真菌主要有着色真菌和孢子丝引起皮下组织感染的真菌主要有着色真菌和孢子丝菌。这些菌广泛存在于土壤、腐木、农作物、柴草菌。这些菌广泛存在于土壤、腐木、农作物、柴草、花卉等，常因外伤时乘机植入引起感染。侵入人、花卉等，常因外伤时乘机植入引起感染。侵入人体后，在真皮深层、皮下组织生长繁殖，感染一般体后，在真皮深层、皮下组织生长繁殖，感染一般仅限于局部，亦可缓慢向周围组织扩散。仅限于局部，亦可缓慢向周围组织扩散。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感

33、染真菌检验检验v皮下组织感染真菌皮下组织感染真菌v主要病原菌有裴氏着色真菌着色真菌(Fonseceea pedrosoi)、紧密着色真菌(Fonseceea compacta)、卡氏枝孢枝孢霉霉（Cladosporium carrianii）和疣状瓶霉瓶霉(Phialophora verrucosa)等，孢子丝菌属半知菌亚门、丝孢菌纲、丝孢菌目、丛梗孢科。主要病原菌为申克孢子丝菌申克孢子丝菌（Sporotrichum schenckii）。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验检验检验申克孢子丝菌（申克孢子丝菌（Sporotrichum sche

34、nckii）v 一直以来人们认为孢子丝菌病仅由申克孢子丝菌（S.schenckii）这一菌种感染所致。近年来，随着分子生物学鉴定方法的发展，发现申克孢子丝菌其实为由一组不同种系构成的复合体，即申克孢子丝菌复合体（S.schenckii complex），包括S.schenckii，S.brasiliensis，S.globosa和S.Luriei等。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验申克孢子丝菌（申克孢子丝菌（S.schenckii）v鉴定鉴定 标本革兰或标本革兰或PASPAS染色制片在油镜下直接镜染色制片

35、在油镜下直接镜检可见到检可见到革兰阳性的长圆形雪茄烟样或梭形小革兰阳性的长圆形雪茄烟样或梭形小体体，一般，一般4 4m m6 6m m大小，有时为大小，有时为4 4m m8 8m m，但，但阳性率很低。申克孢子丝菌复合体其中包含的阳性率很低。申克孢子丝菌复合体其中包含的不同菌种可以通过形态学及生理学特点结合分不同菌种可以通过形态学及生理学特点结合分子生物学分型手段进行鉴定。子生物学分型手段进行鉴定。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。浅部感染真菌浅部感染真菌检验检验申克孢子丝菌（申克孢子丝菌（S.schenckii）上海交通大学医学院上海交

36、通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。深深部感染真菌部感染真菌检验检验v 深部感染真菌因常引起全身性感染又称为深部感染真菌因常引起全身性感染又称为系统性系统性感染真菌感染真菌，包括，包括致病性真菌和条件致病性真菌致病性真菌和条件致病性真菌两两类。类。v 致病性真菌主要有致病性真菌主要有荚膜组织胞浆菌（荚膜组织胞浆菌（HistoplasmaHistoplasma）、球孢子菌）、球孢子菌(CoccidioidesCoccidioides)、副球孢子菌、副球孢子菌(ParacoccidioidesParacoccidioides)和芽生菌和芽生菌(BlastomycesB

37、lastomyces)。此此类真菌在正常人体内不存在，一旦侵入机体即可类真菌在正常人体内不存在，一旦侵入机体即可致病。在临床上比较少见，一般呈地方性流行。致病。在临床上比较少见，一般呈地方性流行。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。深深部感染真菌部感染真菌检验检验v 条件致病性真菌条件致病性真菌主要有主要有念珠菌属（念珠菌属（CandidaCandida）、）、v 隐球菌隐球菌(CryptococcusCryptococcus)、v 曲霉曲霉(AspergillusAspergillus)、v 毛霉毛霉(MucorMucor)、卡氏肺孢菌、卡氏肺孢菌(Pneumocystis

38、 Pneumocystis carinii,PCcarinii,PC)和和v 马内菲青霉（马内菲青霉（Penicillium marneffeiPenicillium marneffei）等，此类等，此类真菌属于人体正常菌群，通常情况下不致病，只真菌属于人体正常菌群，通常情况下不致病，只有在菌群失调、免疫力低下等一定条件下才会致有在菌群失调、免疫力低下等一定条件下才会致病。是目前临床上深部真菌感染最常见的病原菌病。是目前临床上深部真菌感染最常见的病原菌，且呈增长趋势。，且呈增长趋势。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。深深部感染真菌部感染真菌检验检验念珠菌属念珠菌属（Cand

39、ida）上海交通大学医学院上海交通大学医学院v（一）分类和命名分类和命名v 属于出芽酵母科，目前已发现属于出芽酵母科，目前已发现270270余种，是一种余种，是一种条件致条件致病菌病菌。可引起人类感染的念珠菌属菌种有。可引起人类感染的念珠菌属菌种有白念珠菌（白念珠菌（C.albicansC.albicans）、光滑念珠菌（）、光滑念珠菌（C.glabrataC.glabrata）、季也蒙念）、季也蒙念珠菌（珠菌（C.guilliermondiC.guilliermondi）、克柔念珠菌（）、克柔念珠菌（C.kruseiC.krusei）、葡萄牙念珠菌（、葡萄牙念珠菌（C.lusitaniaeC

40、.lusitaniae)、近平滑念珠菌（、近平滑念珠菌（C.parapsilosisC.parapsilosis)、热带念珠菌（、热带念珠菌（C.tropicalisC.tropicalis)。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。深深部感染真菌部感染真菌检验检验念珠菌属念珠菌属（Candida）上海交通大学医学院上海交通大学医学院v（二）临床意义临床意义v 念珠菌属菌广泛存在于自然界，通常作为正常菌群存在念珠菌属菌广泛存在于自然界，通常作为正常菌群存在于人体表和与外界相通的腔道中，当机体抵抗力低下或于人体表和与外界相通的腔道中，当机体抵抗力低下或菌群失调时可导致感染。菌群失调

41、时可导致感染。v 近年来由于抗菌药物、激素和免疫抑制剂在临床上的大近年来由于抗菌药物、激素和免疫抑制剂在临床上的大量使用，其引起的感染日益增多量使用，其引起的感染日益增多。v 可侵犯人体许多部位如皮肤、黏膜、肠道、肺、肾、脑可侵犯人体许多部位如皮肤、黏膜、肠道、肺、肾、脑等，严重时可引起全身感染，等，严重时可引起全身感染，2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。深深部感染真菌部感染真菌检验检验念珠菌属念珠菌属（Candida）上海交通大学医学院上海交通大学医学院v（二）临床意义临床意义v 常见白假丝酵母菌感染有：常见白假丝酵母菌感染有：v 皮肤假丝酵母菌病：好发于皮肤潮湿、皱褶处

42、（腋窝皮肤假丝酵母菌病：好发于皮肤潮湿、皱褶处（腋窝、腹股沟、乳房下、肛门周围及甲沟和指间）；、腹股沟、乳房下、肛门周围及甲沟和指间）；v 黏膜假丝酵母菌病：以鹅口疮、口角炎、外阴及阴道黏膜假丝酵母菌病：以鹅口疮、口角炎、外阴及阴道炎最多见；炎最多见；v 内脏假丝酵母菌病：可由黏膜皮肤等处病菌播散引起内脏假丝酵母菌病：可由黏膜皮肤等处病菌播散引起，如肺炎、肠胃炎、肾孟肾炎、心内膜炎、脑膜炎、脑，如肺炎、肠胃炎、肾孟肾炎、心内膜炎、脑膜炎、脑炎等，偶尔也可发生败血症。炎等，偶尔也可发生败血症。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。（CandidaCandida）2009年年3月月

43、资料仅供参考,不当之处，请联系改正。深深部感染真菌部感染真菌检验检验念珠菌属念珠菌属（Candida）上海交通大学医学院上海交通大学医学院v（三）真菌三）真菌检验检验v 1.1.标本的采集、运送和保存标本的采集、运送和保存 采集分泌物、痰、粪、尿采集分泌物、痰、粪、尿、血或脑脊液等标本。、血或脑脊液等标本。v 2.2.常用检验方法常用检验方法v 1)1)直接显微镜检查直接显微镜检查 取标本直接涂片、革兰染色，镜下取标本直接涂片、革兰染色，镜下可见革兰染色阳性、着色不均匀的可见革兰染色阳性、着色不均匀的圆形或卵圆形菌体以圆形或卵圆形菌体以及芽生孢子和假菌丝及芽生孢子和假菌丝，这是念珠菌感染诊断的

44、重要依据，这是念珠菌感染诊断的重要依据。v 2)2)分离培养分离培养 将标本接种在沙氏培养基上，将标本接种在沙氏培养基上，2929或或3535培养培养l l4d4d后，培养基表面可出现后，培养基表面可出现酵母样型菌落酵母样型菌落。v 菌落特征与镜下形态菌落特征与镜下形态2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。深深部感染真菌部感染真菌检验检验念珠菌属念珠菌属（Candida）上海交通大学医学院上海交通大学医学院v（三）真菌（三）真菌检验检验v 2.2.常用检验方法常用检验方法v 2 2)分离培养分离培养 将标本接种在沙氏培养基上，将标本接种在沙氏培养基上，2929或或3535培养培

45、养l l4d4d后，培养基表面可出现酵母样型菌落。后，培养基表面可出现酵母样型菌落。v 菌落特征与镜下形态菌落特征与镜下形态v(1)(1)SDA(SDA(含氯霉素和庆大霉素含氯霉素和庆大霉素)培养基培养基：25 25C C3030C C培养培养1 12d2d开始生长，菌落为奶油色、隆起、柔软、光开始生长，菌落为奶油色、隆起、柔软、光滑。有些菌在进行芽殖时，形成假菌丝。有些酵母菌还滑。有些菌在进行芽殖时，形成假菌丝。有些酵母菌还可形成具分隔的真菌丝。分离培养基无法辨别念珠菌属可形成具分隔的真菌丝。分离培养基无法辨别念珠菌属种间差异。种间差异。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。

46、上海交通大学医学院上海交通大学医学院（CandidaCandida）2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。深深部感染真菌部感染真菌检验检验念珠菌属念珠菌属（Candida）上海交通大学医学院上海交通大学医学院v（三）真菌（三）真菌检验检验v 2.2.常用检验方法常用检验方法v 2)2)分离培养分离培养 菌落特征与镜下形态菌落特征与镜下形态v（2 2）科玛嘉念珠菌显色培养基科玛嘉念珠菌显色培养基(CHROMagar Candida)(CHROMagar Candida)经过经过3737C 24hC 24h48h48h的培养，有的培养，有4 4种念珠菌可以得到鉴种念珠菌可以得到鉴定

47、，定，翠绿色菌落为白念珠菌翠绿色菌落为白念珠菌，铁蓝色菌落为热带念珠菌铁蓝色菌落为热带念珠菌，淡粉红色菌落为克柔念珠菌淡粉红色菌落为克柔念珠菌，紫色菌落为光滑念珠菌紫色菌落为光滑念珠菌。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。深深部感染真菌部感染真菌检验检验念珠菌属念珠菌属（Candida）上海交通大学医学院上海交通大学医学院v（三）真菌（三）真菌检验检验v3)3)厚壁孢子形成试验厚壁孢子形成试验 在玉米吐温培养基在玉米吐温培养基25302530C C培养，培养，48h48h内可形成厚壁孢子

48、。内可形成厚壁孢子。v 4)4)芽管形成试验芽管形成试验 以人、动物血清作为培养以人、动物血清作为培养材料，材料，3737C C 培养培养23h23h白念珠菌可产生芽管，白念珠菌可产生芽管，可以用来鉴别该菌。可以用来鉴别该菌。v5)5)生理生化特征生理生化特征 不同菌种糖发酵和糖同化作不同菌种糖发酵和糖同化作用不同，这一特征可以用来区分不同念珠菌菌用不同，这一特征可以用来区分不同念珠菌菌种。种。2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。上海交通大学医学院上海交通大学医学院（CandidaCandida）2009年年3月月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。深深部感染真菌部感染真菌检

49、验检验念珠菌属念珠菌属（Candida）上海交通大学医学院上海交通大学医学院糖（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、海藻糖）发酵指对某种糖发酵糖（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、海藻糖）发酵指对某种糖发酵产生二氧化碳和乙醇，有气体产生的指示发酵，培养基的产生二氧化碳和乙醇，有气体产生的指示发酵，培养基的pHpH值可能不会改变；值可能不会改变；糖糖(蜜二糖、纤维二糖、肌糖、木糖、棉籽糖、半乳糖醇蜜二糖、纤维二糖、肌糖、木糖、棉籽糖、半乳糖醇)同化指在有氧环同化指在有氧环境中对作为唯一碳源的特定一种糖的碳水化合物的利用能力。境中对作为唯一碳源的特定一种糖的碳水化合物的利用能力。2009年年3月

50、月资料仅供参考,不当之处，请联系改正。深深部感染真菌部感染真菌检验检验念珠菌属念珠菌属（Candida）上海交通大学医学院上海交通大学医学院v（三）真菌（三）真菌检验检验v 6)6)血清学试验血清学试验 念珠菌属细胞壁念珠菌属细胞壁(1-3)-D-(1-3)-D-葡聚糖葡聚糖含含量高，量高，G G试验检测血液标本中葡聚糖含量来判断有无念试验检测血液标本中葡聚糖含量来判断有无念珠菌血症，不同念珠菌感染对葡聚糖检测无明显影响。珠菌血症，不同念珠菌感染对葡聚糖检测无明显影响。v 1 1，3-D3-D葡聚糖是酵母和丝状真菌细胞壁的多聚糖成葡聚糖是酵母和丝状真菌细胞壁的多聚糖成分，不存在于原核生物和人体