抗生素类药物分析医学课件.ppt

1、 在低微浓度下即可对某些生物（病原微生在低微浓度下即可对某些生物（病原微生物）的生命活动有特异抑制作用的化学物质物）的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称的总称内酰胺类内酰胺类(介绍）介绍）四环素类四环素类（介绍）（介绍）大环内酯类大环内酯类 多烯大环类多烯大环类 多肽类多肽类 氨基糖苷类氨基糖苷类1.1.抗生素（抗生素（antibioticsantibiotics）2.2.分分 类类中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室 化学纯度较低化学纯度较低活性组分易发生变异活性组分易发生变异稳定性差稳定性差 3.来来 源源4.抗生素的特点抗生素的特点化学合

2、成化学合成半合成半合成生物合成（发酵）生物合成（发酵）生产工艺复杂生产工艺复杂发酵过程不易控制，发酵过程不易控制，易受污染易受污染原因原因中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室1.1.青霉素青霉素 又被称为青霉素又被称为青霉素G G、peillinpeillin G G、盘尼西林、配尼盘尼西林、配尼西林、青霉素钠、苄青霉素钠、青霉素钾、苄青霉素西林、青霉素钠、苄青霉素钠、青霉素钾、苄青霉素钾一，以及头孢类、非典型类钾一，以及头孢类、非典型类-内酰胺类中一大类内酰胺类中一大类抗生素。青霉素是抗菌素的一种，是指从青霉菌培养抗生素。青霉素是抗菌素的一种，是

3、指从青霉菌培养液中提制的分子中含有青霉烷、能破坏细菌的细胞壁液中提制的分子中含有青霉烷、能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素，是并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素，是第一种能够治疗人类疾病的抗生素。青霉素类抗生素第一种能够治疗人类疾病的抗生素。青霉素类抗生素是是-内酰胺类中一大类抗生素的总称。内酰胺类中一大类抗生素的总称。2.2.红霉素、麦迪霉素、螺旋霉素、乙酰螺旋霉素、红霉素、麦迪霉素、螺旋霉素、乙酰螺旋霉素、交沙霉素、柱晶白霉素等大环内酯的一类抗生素。交沙霉素、柱晶白霉素等大环内酯的一类抗生素。3.3.金霉素（金霉素（chlotetracyclinechlo

4、tetracycline)、土霉素（、土霉素（oxytetracyclineoxytetracycline）、四环素（）、四环素（tetracyclinetetracycline）及半合成衍）及半合成衍生物甲烯土霉素、强力霉素、二甲胺基四环素等由放线菌生物甲烯土霉素、强力霉素、二甲胺基四环素等由放线菌产生的四环素类广谱抗生素产生的四环素类广谱抗生素4.4.链霉素，是一种从链霉菌链霉素，是一种从链霉菌(灰色链丝菌灰色链丝菌)培养液中提取出培养液中提取出来的抗生素。链霉素的硫酸盐是白色或微黄色的粉末或结来的抗生素。链霉素的硫酸盐是白色或微黄色的粉末或结晶，易溶于水，比较稳定，对某些杆菌，特别是结核

5、杆菌晶，易溶于水，比较稳定，对某些杆菌，特别是结核杆菌，具有显著的抑菌乃至杀菌作用。链霉素主要用于治疗结，具有显著的抑菌乃至杀菌作用。链霉素主要用于治疗结核病、鼠疫、百日咳、细菌性痢疾和泌尿道感染等。核病、鼠疫、百日咳、细菌性痢疾和泌尿道感染等。5.5.氯霉素，是从委内瑞拉链霉菌氯霉素，是从委内瑞拉链霉菌(StreptomycesStreptomyces venezuelavenezuela)中分离提取的广谱抗生素。中分离提取的广谱抗生素。18771877年，年，PasteurPasteur和和JoubertJoubert首先认识到微生物产品有可能成为首先认识到微生物产品有可能成为治疗药物，他

6、们发表了实验观察，即普通的微生物能抑制尿中治疗药物，他们发表了实验观察，即普通的微生物能抑制尿中炭疽杆菌的生长。炭疽杆菌的生长。19281928年，弗莱明爵士发现了能杀死致命细菌的青霉菌。青霉素年，弗莱明爵士发现了能杀死致命细菌的青霉菌。青霉素治愈了梅毒和淋病，而且在当时没有任何明显的副作用。治愈了梅毒和淋病，而且在当时没有任何明显的副作用。19361936年，磺胺的临床应用开创了现代抗微生物化疗的新纪元。年，磺胺的临床应用开创了现代抗微生物化疗的新纪元。19441944年在新泽西大学分离出来第二种抗生素链霉素，它有效治年在新泽西大学分离出来第二种抗生素链霉素，它有效治愈了另一种可怕的传染病：

7、结核病。愈了另一种可怕的传染病：结核病。19471947年出现氯霉素，它主要针对痢疾、炭疽病菌，治疗轻度感年出现氯霉素，它主要针对痢疾、炭疽病菌，治疗轻度感染。染。19481948年四环素出现，这是最早的广谱抗生素。在当时年四环素出现，这是最早的广谱抗生素。在当时看来，它能够在还未确诊的情况下有效地使用。今天看来，它能够在还未确诊的情况下有效地使用。今天四环素基本上只被用于家畜饲养。四环素基本上只被用于家畜饲养。19561956年礼来公司发明了万古霉素被称为抗生素的最后年礼来公司发明了万古霉素被称为抗生素的最后武器。因为它对武器。因为它对G+G+细菌细胞壁、细胞膜和细菌细胞壁、细胞膜和RNAR

8、NA有三重有三重杀菌机制，不易诱导细菌对其产生耐药。杀菌机制，不易诱导细菌对其产生耐药。19801980年代喹诺酮类药物出现。和其他抗菌药不同，它年代喹诺酮类药物出现。和其他抗菌药不同，它们破坏细菌染色体，不受基因交换耐药性的影响。们破坏细菌染色体，不受基因交换耐药性的影响。19921992年，这类药物中的一个变体因为造成肝肾功能紊年，这类药物中的一个变体因为造成肝肾功能紊乱被美国取缔，但在发展中国家仍有使用。乱被美国取缔，但在发展中国家仍有使用。中国是抗生素使用大国，也是抗生素生产中国是抗生素使用大国，也是抗生素生产大国：年产抗生素原料大约大国：年产抗生素原料大约2121万吨，出口万吨，出口

9、3 3万吨万吨，其余自用（包括医疗与农业使用，其余自用（包括医疗与农业使用)，人均年消，人均年消费量费量138138克左右克左右(美国仅美国仅1313克克)。据据2006200620072007年度卫生部全国细菌耐药监测年度卫生部全国细菌耐药监测结果显示，全国医院抗菌药物年使用率高达结果显示，全国医院抗菌药物年使用率高达74%74%。而世界上没有哪个国家如此大规模地使用抗。而世界上没有哪个国家如此大规模地使用抗生素，在美英等发达国家，医院的抗生素使用生素，在美英等发达国家，医院的抗生素使用率仅为率仅为22%22%25%25%。中国是世界上滥用抗生素问题最严重的国家之一中国是世界上滥用抗生素问题

10、最严重的国家之一 中国的妇产科长期以来都是抗生素滥用的重灾中国的妇产科长期以来都是抗生素滥用的重灾区，上海市长宁区中心医院妇产科多年的统计显示区，上海市长宁区中心医院妇产科多年的统计显示，目前青霉素的耐药性几乎达到，目前青霉素的耐药性几乎达到100%100%。中国的住院患者中，抗生素的使用率则高达中国的住院患者中，抗生素的使用率则高达70%70%，其中外科患者几乎人人都用抗生素，比例高，其中外科患者几乎人人都用抗生素，比例高达达97%97%。另据另据1995199520072007年疾病分类调查，中国感染性年疾病分类调查，中国感染性疾病占全部疾病总发病数的疾病占全部疾病总发病数的49%49%，

11、其中细菌感染性，其中细菌感染性占全部疾病的占全部疾病的18%18%21%21%，也就是说，也就是说80%80%以上属于滥用以上属于滥用抗生素，每年有抗生素，每年有8 8万人因此死亡。万人因此死亡。阿齐红霉素阿齐红霉素头孢呋辛头孢呋辛氧氟沙星氧氟沙星红霉素红霉素青霉素青霉素Penicillin采用生物学法与物理化学法采用生物学法与物理化学法鉴别：理化方法、微生物法鉴别：理化方法、微生物法检查：水分、异常毒性、热原、细菌内毒素、降压物质等检查：水分、异常毒性、热原、细菌内毒素、降压物质等含量含量/效价测定：效价测定：微生物法微生物法 ：与临床疗效吻合，灵敏度高，但操作复杂费时；与临床疗效吻合，灵敏

12、度高，但操作复杂费时；理化方法：理化方法：准确度与专属性较高，且操作简便，但与临床疗效准确度与专属性较高，且操作简便，但与临床疗效有偏差有偏差5.抗生素质量分析抗生素质量分析中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室1.化学结构化学结构包括青霉素类和头孢菌素类包括青霉素类和头孢菌素类青霉素类：青霉素类：6-6-APAAPA为母核为母核 头孢菌素类：头孢菌素类：7-7-ACAACA为母核为母核中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室酸性较强（酸性较强（pKapKa 2.5-2.8 2.5-2.8）临床常用其碱金属盐

13、临床常用其碱金属盐（水溶性好）（水溶性好）酸性酸性(羧基羧基)有多个手性碳有多个手性碳旋光性旋光性青霉素类：苯环取代基青霉素类：苯环取代基头孢菌素类：母核有共轭结构头孢菌素类：母核有共轭结构UVUV（共轭）共轭）干燥条件较稳定，溶液不稳定干燥条件较稳定，溶液不稳定稳定性稳定性(内酰胺内酰胺)2 2、主要、主要理化性质理化性质降解降解失效失效氧化剂、酸、碱氧化剂、酸、碱酶、金属离子、酶、金属离子、青霉素青霉素中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室 2 2、主要理化性质、主要理化性质中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教

14、研研 室室NH2OHHClNaOHFe3+H+茚三酮茚三酮 碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜呈色反应3、鉴、鉴 别别中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室别名，先锋瑞丁、头孢拉丁、头孢握定、头孢雷定、己环胺菌素、头孢环己烯、环己烯胺头孢菌素、环烯头孢菌素，该品为白色或类白色结晶性粉末；微臭。该品在水中略溶，在乙醇、氯仿、乙醚中几乎不溶。3 3、鉴、鉴 别别-NMR鉴别法鉴别法单峰信号单峰信号取本品取本品50mg溶于溶于0.5ml重水中，测定重水中，测定NMR光谱时，应显示光谱时，应显示多重峰信号多重峰信号多重峰信号多重峰信号=3.8 附近附近=6.97.5=

15、7.99.0235强度比强度比中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室 该品为白色或乳黄色结晶性粉末；微臭。该品在水中微溶，在乙醇、氯仿或乙醚中不溶。（6R，7R）-3-甲基-7-（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环4.2.0辛-2-烯-2-甲酸水合物3 3、头孢氨苄鉴别的、头孢氨苄鉴别的TLCTLC条件条件 CHP（2000）5 5mg/ml 2mg/ml 2l l 硅胶硅胶G G 0.1mol/L0.1mol/L枸橼酸液枸橼酸液-0.2-0.2mol/LNamol/LNa2 2HPOHPO4 4-丙酮丙酮(120:80

16、:3)(120:80:3)0.1%0.1%茚三酮溶液显色茚三酮溶液显色USP（24）2525mg/ml 5mg/ml 5l l 硅胶硅胶 醋酸乙酯醋酸乙酯-水水-乙腈乙腈-冰冰HAcHAc(48:18:14:14)(48:18:14:14)短波长短波长UVUV光检出光检出BP（1999）0.4%(0.4%(W/V)1W/V)1l l 硅烷化硅胶硅烷化硅胶HF254HF25415.4%NH15.4%NH4 4Ac(pH6.2)-Ac(pH6.2)-丙酮丙酮(85:15)(85:15)254254nm nm 检出检出中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室

17、英国药典英国药典美国药典美国药典中国药典中国药典4、特殊杂质检查、特殊杂质检查-聚合物、有关物质、异构体等聚合物、有关物质、异构体等色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验测定法测定法头孢他啶中聚合物测定头孢他啶中聚合物测定头孢呋辛酯中头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查有关物质和异构体的检查色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验异构体和有关物质异构体和有关物质举举 例：例：中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室 头孢他啶中聚合物测定头孢他啶中聚合物测定-色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶G-10理论

18、板数应不低于理论板数应不低于900，拖尾因子在拖尾因子在0.751.5254nm 检检 测测流动相流动相A：含含3.5%硫酸铵硫酸铵的的0.01mol/L磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液蓝色葡聚糖蓝色葡聚糖2000中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室 头孢他啶中聚合物测定头孢他啶中聚合物测定-色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶G-10峰面积的峰面积的RSD应小于应小于5.0%254nm 检检 测测流动相流动相B：0.01%十二烷基十二烷基硫酸钠溶液硫酸钠溶液头孢他啶头孢他啶对照品溶液对照品溶液中中 国国 药药 科科 大大

19、学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室 头孢他啶中聚合物测定头孢他啶中聚合物测定-测定法测定法葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶G-10G-10254254nm nm 检检 测测流动相流动相A A：含含3.5%3.5%硫酸铵硫酸铵的的0.010.01mol/Lmol/L磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液头孢他啶样品头孢他啶样品（2020mg/mlmg/ml）外标法计算，本品含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过外标法计算，本品含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过0.3%0.3%AS中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室 头孢他啶中聚合物测定头孢他啶中聚合物测定-

20、测定法测定法葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶G-10254nm 检检 测测流动相流动相B：0.01%十二烷基十二烷基硫酸钠溶液硫酸钠溶液头孢他啶头孢他啶对照品溶液对照品溶液AR外标法计算，本品含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过外标法计算，本品含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过0.3%中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室 头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查头孢呋辛酯头孢呋辛酯A A，B B异构体之间、头孢呋辛酯异构体之间、头孢呋辛酯A A异构体与头异构体与头孢呋辛酯孢呋辛酯2-2-异构体之间的分离度应大于异构体之间的分离度应

21、大于1.51.5；色谱条件色谱条件：ODSODS分析柱；分析柱；0.20.2mol/Lmol/L磷酸二氢铵磷酸二氢铵-甲醇（甲醇（62:3862:38）为流动相；）为流动相；流速流速1 1ml/minml/min；检测波长检测波长278 278 nmnm。系统适用性试验系统适用性试验：理论板数按头孢呋辛酯理论板数按头孢呋辛酯A A异构体峰计算，应不低于异构体峰计算，应不低于15001500。中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室40020600302010时间(min)峰高(mAU)654A异构体异构体B异异构构体体113.95411.9192.40

22、1B B异构体峰的相对保异构体峰的相对保留时间约为留时间约为0.850.85，A A异构体峰的相对保异构体峰的相对保留时间为留时间为1.01.0。供试品色谱图中供试品色谱图中,A A异构体峰的面积与异构体峰的面积与A A、B B异构体峰的面异构体峰的面积和之比应为积和之比应为0.480.480.550.55。头孢呋辛酯中头孢呋辛酯中有关物质和异构体有关物质和异构体的检查的检查中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室异构体中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室 头孢呋辛酯中头孢呋辛酯中有关物质和异构体有关物质和

23、异构体的检查的检查有关物质有关物质 5 5、含量测定、含量测定-碘量法（碘量法（ChP2000ChP2000）中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室原理：青霉素与头孢菌素本身不与碘反应，但其原理：青霉素与头孢菌素本身不与碘反应，但其碱性降解产物可消耗碘碱性降解产物可消耗碘青霉素族头孢菌素族NaOH水解4I2H+8I-I2+2Na2S2O3 2NaI+Na2S4O6定量过量定量过量剩剩 余余5 5、含量测定、含量测定-碘量法（碘量法（ChP2000ChP2000）中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室反应分两

24、步进行：反应分两步进行：水解反应水解反应 (按化学计算量进行按化学计算量进行)氧化氧化-还原反应还原反应 (无定量关系，受温度、无定量关系，受温度、pH值和时间等因素影响，值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定)5 5、含量测定、含量测定 -碘量法（碘量法（ChP2000ChP2000）中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室因样品中杂质会消耗碘，故应作空因样品中杂质会消耗碘，故应作空白试验。白试验。加入样品，不加碱加入样品，不加碱；其余试剂（醋酸盐缓冲液，碘液，硫代硫酸钠）都其余试剂（

25、醋酸盐缓冲液，碘液，硫代硫酸钠）都要加碱。要加碱。空白试验空白试验:空白试验与经典空白试验不同：空白试验与经典空白试验不同：5 5、含量测定、含量测定-碘量法（碘量法（ChP2000ChP2000）中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室试验条件试验条件:（I2氧化）氧化）弱酸性（弱酸性（pH4.5pH4.5）2020分钟后，耗碘量随时间的变化较分钟后，耗碘量随时间的变化较小小碱碱 I2 IO3-+I-酸酸 某些药物与碘生成复盐沉淀某些药物与碘生成复盐沉淀温度（温度（24242626）温度温度38 38 时未水解的供试品亦消耗碘时未水解的供试品亦消耗碘

26、 反应时间：（反应时间：（20 20分钟）分钟）5 5、含量测定、含量测定-碘量法（碘量法（ChP2000ChP2000）中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室含量含量 对照品对照品V样空样空 -V样样 W对对 V对空对空-V对对 W样样灵敏度高：样品灵敏度高：样品:碘碘 =1:8反应条件、实验操作要求高反应条件、实验操作要求高1 1份含量份含量V V对对、V V对空对空V V样样、V V样空样空加试剂次序、反应时间、滴定速度相同加试剂次序、反应时间、滴定速度相同 特特 点：点：5 5、含量测定、含量测定-电位配位滴定法（汞量法）电位配位滴定法（汞量

27、法）中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室原理：青霉素不与汞盐反应，其碱性降解产物可与原理：青霉素不与汞盐反应，其碱性降解产物可与HgHg2+2+络和。络和。Hg2+OOHHRHHCNCCCSCONHCHCCOOHCH3CH3ROHHHCSCONHCCOOHCH3CH3HNCHg2+OHHCHCONHHOOCROCSCH3CH3CNHHg2+O方法说明：方法说明：a a、空白试验与碘量法类似，加样品，不加空白试验与碘量法类似，加样品，不加NaOHNaOH b b、与碘量法相比，汞量法不需对照试验与碘量法相比，汞量法不需对照试验：又称氯四环素，其抗菌谱

28、与四环素相似，对革兰氏阳性球菌，特别是葡萄球菌、肺炎球菌有效。中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室 1.化学结构化学结构中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室-OH：酸性酸性N(CH3)2：碱性碱性与酸、碱均可成盐与酸、碱均可成盐临床多用盐酸盐临床多用盐酸盐两两 性性旋光性旋光性易发生异构化，降解等反易发生异构化，降解等反应，性质不稳定应，性质不稳定稳定性稳定性酚羟基、烯醇基与酚羟基、烯醇基与Ca2+、Mg2+络合显色络合显色与金属离子络合与金属离子络合2、主要、主要理化性质理化性质UV和荧光和荧光中中

29、国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室 2.主要理化性质主要理化性质碱碱 性性 C环开环，形成内酯环开环，形成内酯 异四环素异四环素弱酸性（弱酸性（pH2-6）A环环C-4异构化异构化 差向四环素差向四环素酸性（酸性（pH 2）C环脱水环脱水 脱水四环素脱水四环素中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室OOHCONH2(CH3)2NOHHOOHCONH2N(CH3)2HOHAApH2.06.0差向异构体差向异构体ROHCH3OHOOHHRCH3OHOOHRCH3OHOHOH2ODDDCBBCBC脱水四环素类脱水四环

30、素类ROHCH3OHROOHOOHCONH2NHOHCH3CH3CH3CH3ROHROOOHCONH2NHOHOCH3O异四环素异四环素OH-中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室3 3.鉴鉴 别别1 1）浓硫酸反应）浓硫酸反应2 2）FeClFeCl3 3反应：反应：（酚羟基）（酚羟基）显红色显红色褐色褐色3 3）TLCTLC、HPLCHPLC4 4）荧光：（含共轭双键）紫外灯照射下产生不同颜色荧光荧光：（含共轭双键）紫外灯照射下产生不同颜色荧光ChPChP、USPU

31、SP：HPLC HPLC法法 JPJP：比色法比色法4 4.检检 查查TLCTLC、HPLCHPLC法法杂质吸收度（降解产物颜色较深）杂质吸收度（降解产物颜色较深）5 5.含含 量量中中 国国 药药 科科 大大 学学 药药 学学 院院 药药 分分 教教 研研 室室内源性：药物自身聚合物内源性：药物自身聚合物 来源于生产过程、贮存过程、使用不当来源于生产过程、贮存过程、使用不当外源性：蛋白、多肽、多糖及其与药物的结合物外源性：蛋白、多肽、多糖及其与药物的结合物 来源于发酵过程来源于发酵过程临床应用其硫酸盐临床应用其硫酸盐高分子杂质高分子杂质凝胶色谱法：葡聚糖凝胶凝胶色谱法：葡聚糖凝胶 Sephadex G-10杂质控制方法杂质控制方法