管灸治疗面神经炎的机制研究课件.ppt
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- 治疗 神经炎 机制 研究 课件
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1、文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。怎样进行机制研究?管灸作为灸法治疗的一种,主要用于治疗面神经炎、神经性耳聋等疾病。采用人类疾病动物模型进行治疗机制研究是目前国内外最常用的方法。因此我们通过建立家兔面神经损伤模型,采用管灸和电针进行治疗,对其机理进行研究,同时和电针进行对比。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。所运用的技术病理形态学技术 形态计量学 原位杂交RT-PCR病理学技术分子生物学技术文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。检测内容 测量髓鞘厚度、神经束神经纤维总
2、数、神经纤维直径、轴突面积和神经束面积,颊肌组织。面神经核、面神经、表情肌中神经生长因子(NGF)、神经营养因子-3(NT-3)表达水平。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。拟解决的问题对损伤面神经是否具有促进修复作用?修复的机制是什么?对临床运用管灸有什么指导作用?文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。操作流程文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。动物分组模型组制作面神经损伤模型,但不做任何治疗 电针组制作面神经损伤模型,给予电针治疗 假手术组仅手术暴露面神经,但不损伤面
3、神经管灸组制作面神经损伤模型,给予管灸治疗文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。模型制作方法 家兔麻醉后取耳屏前至下颌角下缘“S”形切口,钝性分离暴露面神经颊支,用同一特定钳于瞳孔下正对神经干处一扣压榨30秒钟、松开30秒钟、再压榨30秒钟后(Sunderland III度损伤的力度),用缝线标记损伤段,缝合皮下及皮肤层。假手术组动物暴露双侧面神经颊支,钝性分离面神经后,不予压榨即缝合皮下及皮肤层。术后常规抗感染治疗5天后开始治疗,每天1次,6天为一疗程,疗程间隔1天。假手术组:常规饲养,仅做术后常规抗感染治疗。模型组:常规饲养,仅做术后常规抗感染治疗。
4、电针组:常规饲养,治疗时用兔台固定,选用双侧翳风,直刺1.0cm;颊车,直刺0.5cm;下关,直刺0.5cm;合谷,约当第2掌骨中点桡侧,直刺1.0cm。其中翳风与颊车采用强度为20100Hz(波型间动频为30次/min);电压24V,强度由小逐渐增大,电针时间30min;治疗时间每次30分钟。管灸组:照常饲养,治疗时用兔箱固定,取2g艾绒置入特制的管灸器中,点燃后将软管插入家兔双侧外耳道约2cm,施以熏灸,每次约30分钟。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。各组分别于第一、二、四疗程后随机选择7只动物处死,按相应的要求取材进行相关指标检测。实验结束时
5、切取一侧面神经核、标记段的面神及颊肌组织冻于液氮中保存以备RTPCR检测,切取动物另一侧面神经核、部分标记段面神经及颊肌组织,经4%多聚甲醛/0.1molPBS(Ph7.07.6),含有1/1000DEPC中固定4hr,全自动组织脱水机处理,石蜡组织包埋机包埋,石蜡组织切片机连续作4m厚切片。将切片裱贴于原位杂交专用玻片上。其余面神经分别固定于4%甲醛-钙液及10%甲醛中。损伤近、远点作横断石蜡包埋,损伤处作纵断石蜡包埋,分别作HE染色、水溶性猩红-亮绿双重染色。观察神经纤维结缔组织、雪旺细胞、髓鞘、轴突的病理改变。采用Image-Pro Plus 5.0图像分析系统测量髓鞘厚度、神经束神经纤
6、维总数、神经纤维直径、轴突面积和神经束面积。颊肌组织亦作HE染色,光镜观察肌肉组织病理改变情况。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。模型制作流程面神经钳子丝线文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。病理检测方法病理切片HE染色猩红-亮绿染色神经纤维数、纤维直径髓鞘厚度、轴突面积神经束面积文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。髓鞘厚度、轴突面积比较髓鞘厚度、轴突面积比较组组 别别 髓鞘厚度髓鞘厚度(m)m)轴突面积轴突面积(mm2 2)第一疗程第一疗程 第二疗程第二疗程 第四疗
7、程第四疗程 第一疗程第一疗程 第二疗程第四疗程第二疗程第四疗程假手术组假手术组 1.52 1.520.530.53 1.54 1.540.620.621.581.580.580.58 8.25 8.251.511.51 8.97 8.971.421.42 8.358.351.461.46模型组模型组 0.72 0.720.15 0.760.15 0.760.240.24 0.860.860.16 5.350.16 5.350.92 5.860.92 5.861.02 1.02 7.527.521.38 1.38 管灸组管灸组 0.82 0.820.180.18 1.22 1.220.310.3
8、1 1.381.380.320.32 6.176.171.02 7.841.02 7.841.331.33 13.93 13.932.212.21电针组电针组 0.79 0.790.22 1.180.22 1.180.260.26 1.291.290.270.27 5.93 5.930.98 7.360.98 7.361.241.24 12.69 12.691.831.83注:与模型组比较,:注:与模型组比较,:p 0.05p 0.05;p0.01p0.01;与电针组比较;与电针组比较p 0.05p 0.05;p0.01p0.01 病理检测结果病理检测结果文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模
9、仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。神经束面积比较组组 别别 第一疗程第一疗程 第二疗程第二疗程 第四疗程第四疗程 假手术组假手术组 435724357214391439 42965 4296512411241 43198 4319813951395模型组模型组 29856298561153 368581153 368581324 453721324 453721691 1691 管灸组管灸组 320843208415841584 40889 4088917291729 59496 5949635743574 电针组电针组 30928309281365 396621365 39662190
10、31903 53751 5375133183318注:与模型组比较,:注:与模型组比较,:p 0.05p 0.05;p0.01p0.01;与电针组比较;与电针组比较p 0.05p 0.05;p0.01p0.01 病理检测结果病理检测结果文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。神经纤维数、纤维直径比较神经纤维数、纤维直径比较组组 别别 神经纤维数神经纤维数(条条)纤维直径纤维直径(m)m)第一疗程第一疗程 第二疗程第二疗程 第四疗程第四疗程第一疗程第一疗程 第二疗程第二疗程 第四疗程第四疗程假手术组假手术组 38563856524524 3725372547
11、3 473 38193819569 569 3.523.520.570.57 3.293.290.850.853.673.670.710.71模型组模型组 29312931489 489 33263326591591 4032 4032653 653 2.162.160.33 2.520.33 2.520.45 0.45 3.01 3.010.46 0.46 管灸组管灸组 34183418567567 42514251614614 51295129706706 2.652.650.40 2.980.40 2.980.370.37 3.953.950.620.62电针组电针组 332833284
12、93 493 41854185587587 48564856634634 2.53 2.530.28 2.870.28 2.870.340.34 3.863.860.560.56注:与模型组比较,:注:与模型组比较,:p 0.05p 0.05;p0.01p0.01;与电针组比较;与电针组比较p 0.05p 0.05;p0.01p0.01 病理检测结果病理检测结果文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。结论 与假手术组相比,模型组神经纤维数、纤维直径、髓鞘厚度、轴突面积、神经束面积随着疗程延长均有增高趋势,但仍小于假手术组,有统计学差异(P0.05或0.01
13、);与模型组相比,管灸组和电针组第2、3疗程上述指标均增高,有统计学差异(P0.05或0.01)。管灸组与电针组上述指标各疗程无显著性差异。结果提示管灸和电针均可以促进面神经再生,且管灸和电针疗效相当。病理观察和分析表明,管灸和电针对损伤神经的修复再生具有促进作用,管灸疗效和电针相当。文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。表情肌面神经核、面神经多点标记DIG(地高辛)探针原位杂交过氧化物酶显色法RT-PCR方法(逆转录PCR法)NGF NT-3检测文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。NGF原位杂交检测结果管灸对面
14、神经损伤模型家兔面神经核中管灸对面神经损伤模型家兔面神经核中NGFmRNANGFmRNA积分光密度的影响积分光密度的影响 组组 别别 动动 物物 数数 积分光密度(积分光密度(10106 6)1 1疗程疗程2 2疗程疗程4 4疗程疗程 假手术组假手术组 7 9.49 7 9.492.51 10.002.51 10.003.143.14 10.8610.862.922.92 模型组模型组 7 11.85 7 11.852.29 14.192.29 14.193.633.63 15.6115.613.123.12 管灸组管灸组 7 18.36 7 18.363.143.14 35.25 35.25
15、5.955.95 36.7236.725.095.09 电针组电针组 7 17.18 7 17.184.214.21 26.27 26.276.706.70 28.1928.197.017.01注:与模型组比较,:注:与模型组比较,:p 0.05p 0.05;p0.01p0.01;与电针组比较;与电针组比较p 0.05p 0.05;p0.01p0.01文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。管灸对面神经损伤模型家兔面神经中管灸对面神经损伤模型家兔面神经中NGFmRNANGFmRNA积分光密度的影响积分光密度的影响 组组 别别 动动 物物 数数 积分光密度(
16、积分光密度(10106 6)1 1疗程疗程2 2疗程疗程4 4疗程疗程 假手术组假手术组 7 7 2.15 2.150.33 2.060.33 2.060.410.412.242.240.380.38 模型组模型组 7 7 2.072.070.58 2.510.58 2.510.440.44 2.762.760.120.12 管灸组管灸组 7 7 2.53 2.530.28 3.970.28 3.970.860.86 4.274.270.630.63 电针组电针组 7 7 2.822.820.620.62 3.233.230.410.41 3.613.610.920.92注:与模型组比较,:注
17、:与模型组比较,:p 0.05p 0.05;p0.01p0.01;与电针组比较;与电针组比较p 0.05p 0.05;p0.01p0.01NGF原位杂交检测结果NGF原位杂交检测结果文档仅供参考,不能作为科学依据,请勿模仿;如有不当之处,请联系网站或本人删除。管灸对面神经损伤模型家兔表情肌中管灸对面神经损伤模型家兔表情肌中NGFmRNANGFmRNA积分光密度的影响积分光密度的影响 组组 别别 动动 物物 数数 积分光密度(积分光密度(10106 6)1 1疗程疗程 2 2疗程疗程 4 4疗程疗程 假手术组假手术组 7 7 2.722.720.240.24 2.812.810.800.80 2
18、.682.680.430.43 模型组模型组 7 7 3.653.650.68 0.68 4.074.070.950.95 4.854.850.760.76 管灸组管灸组 7 7 4.864.860.510.51 7.62 7.620.120.128.018.010.590.59 电针组电针组 7 7 3.95 3.950.27 0.27 5.815.810.140.146.166.160.350.35注:与模型组比较,:注:与模型组比较,:p 0.05p 0.05;p0.01p0.01;与电针组比较;与电针组比较p 0.05p 0.05;p0.01p0.01NGF原位杂交检测结果文档仅供参考
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