病毒感染的实验诊断课件.ppt
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1、病毒感染的实验诊断病毒感染的实验诊断王王 跃跃临床微免教研室临床微免教研室病毒感染的实验诊断1什么是病毒?什么是病毒?病毒(病毒(virus)是一类体积微小、结构简单、)是一类体积微小、结构简单、有严格的细胞内寄生性的非细胞型微生物。有严格的细胞内寄生性的非细胞型微生物。病毒感染的实验诊断2 特点:特点:体积微小,只能在电镜下观察,能通过滤菌器体积微小,只能在电镜下观察,能通过滤菌器无完整的细胞结构:蛋白质衣壳核酸核心无完整的细胞结构:蛋白质衣壳核酸核心只有一种类型核酸:只有一种类型核酸:RNA或或DNA有严格的细胞内寄生性,只能在活细胞内生长有严格的细胞内寄生性,只能在活细胞内生长以核酸复制
2、的方式增殖,不能进行二分裂繁殖以核酸复制的方式增殖,不能进行二分裂繁殖抵抗力特殊:耐冷不耐热,对化学因素的抵抗力较抵抗力特殊:耐冷不耐热,对化学因素的抵抗力较一般比细菌强,耐甘油,对抗生素及磺胺类药物不一般比细菌强,耐甘油,对抗生素及磺胺类药物不敏感,干扰素可抑制病毒复制。敏感,干扰素可抑制病毒复制。病毒感染的实验诊断3病毒感染的实验诊断方法病毒感染的实验诊断方法 病原学诊断病原学诊断 病毒分离培养病毒分离培养显微镜检查显微镜检查抗原检测抗原检测核酸检测核酸检测血清学诊断血清学诊断 抗体检测抗体检测 IgM、IgG病毒感染的实验诊断4一、标本采集、运送和处理一、标本采集、运送和处理(一)标本采
3、集(一)标本采集采集时间:尽早采集(越早越好)采集时间:尽早采集(越早越好)标本种类:根据感染的部位、可能感染的病毒类标本种类:根据感染的部位、可能感染的病毒类型选择标本种类型选择标本种类无菌采集标本:必要时用抗生素或抗真菌药处理无菌采集标本:必要时用抗生素或抗真菌药处理抑制细菌生长抑制细菌生长 100U/ml青霉素青霉素100g/ml链霉素链霉素抑制真菌生长抑制真菌生长 2.5gg/ml二性霉素二性霉素B 或或40 g/ml制霉菌素制霉菌素血清学检查标本:双份血清血清学检查标本:双份血清病毒感染的实验诊断5(二)标本的运送与保存(二)标本的运送与保存1.低温送检低温送检 4可保存数小时,可保
4、存数小时,-70可长期保存可长期保存-10 -20下病毒易灭活,不可用于保存病毒标下病毒易灭活,不可用于保存病毒标本本对冷冻标本应避免反复冻融对冷冻标本应避免反复冻融2.保湿送检保湿送检50%甘油盐水保存送检甘油盐水保存送检 病毒转运培养基(病毒转运培养基(virus transport medium,VTM)含含0.5%明胶或牛血清白蛋白的明胶或牛血清白蛋白的Hanks液液3.无菌送检无菌送检抑制细菌生长抑制细菌生长 100U/ml青霉素青霉素100g/ml链霉素链霉素 抑制真菌生长抑制真菌生长 2.5gg/ml二性霉素二性霉素B 或或40 g/ml制霉制霉菌素菌素病毒感染的实验诊断6二、病
5、毒的形态学检查二、病毒的形态学检查1.光学显微镜检查光学显微镜检查 主要观察病变组织中的包涵体,某些大病毒也通主要观察病变组织中的包涵体,某些大病毒也通过光学显微镜观察。过光学显微镜观察。简便、快速,但敏感性低,有些病毒感染细胞后简便、快速,但敏感性低,有些病毒感染细胞后不形成包涵体不形成包涵体 狂犬病毒胞浆内包涵体狂犬病毒胞浆内包涵体(内基小体)(内基小体)巨细胞病毒胞核内包涵体巨细胞病毒胞核内包涵体(猫头鹰眼)(猫头鹰眼)病毒感染的实验诊断72.电镜及免疫电镜检查电镜及免疫电镜检查直接检查标本中的病毒颗粒,快直接检查标本中的病毒颗粒,快速,可确诊。但敏感性低(速,可确诊。但敏感性低(101
6、06 6/ml/ml)免疫电镜敏感性高,但只能用于免疫电镜敏感性高,但只能用于已知病毒的检测)已知病毒的检测)乙型肝炎病毒电镜图 轮状病毒电镜图 病毒感染的实验诊断8三、病毒的分离与鉴定三、病毒的分离与鉴定动物接种动物接种组织培养组织培养标本采集标本采集标本处理后接种标本处理后接种鸡胚接种鸡胚接种卵黄囊膜卵黄囊膜尿囊液尿囊液羊膜腔液羊膜腔液绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜观察囊膜病变观察囊膜病变血凝试验血凝试验血凝抑制试验血凝抑制试验CPEEM包涵体包涵体空斑试验空斑试验红细胞吸附红细胞吸附中和试验中和试验观察发病观察发病抗原检测抗原检测抗体检测抗体检测病理检查病理检查病毒感染的实验诊断9(一)病毒的分离
7、(一)病毒的分离组织培养组织培养鸡胚培养鸡胚培养动物接种动物接种病毒感染的实验诊断101.组织培养组织培养将人或动物离体的活组织或分散的活细胞在体外将人或动物离体的活组织或分散的活细胞在体外人工控制的条件下使其生长繁殖的一种技术。人工控制的条件下使其生长繁殖的一种技术。组织培养的类型组织培养的类型:(1)组织块培养)组织块培养(2)器官培养)器官培养 人胚气管呼吸道病毒;人胚气管呼吸道病毒;人胚肠人胚肠 肠道病毒肠道病毒(3)细胞培养)细胞培养 最常用最常用原代和次代细胞培养原代和次代细胞培养 二倍体细胞培养二倍体细胞培养传代细胞培养传代细胞培养病毒感染的实验诊断11动物新鲜组织(人胚肾等)动
8、物新鲜组织(人胚肾等)胰酶消化胰酶消化营养营养液培养液培养单层细胞(原代细胞)单层细胞(原代细胞)原代细胞原代细胞胰酶消化胰酶消化转种培养(次代培养细转种培养(次代培养细胞)胞)对病毒敏感,但制备费时费力,只能传对病毒敏感,但制备费时费力,只能传23代。代。原代和次代培养细胞原代和次代培养细胞病毒感染的实验诊断12二倍体细胞株二倍体细胞株 原代细胞反复传代(原代细胞反复传代(5070代)代)仍保持二倍体染色体特性。病毒分离和疫苗制仍保持二倍体染色体特性。病毒分离和疫苗制备的首选细胞株。备的首选细胞株。传代细胞株传代细胞株 来源于肿瘤细胞或突变的二倍体来源于肿瘤细胞或突变的二倍体细胞,能在体外无
9、限增殖。增殖快,不易衰老,细胞,能在体外无限增殖。增殖快,不易衰老,易于传代保存。常用于病毒的分离鉴定,但不易于传代保存。常用于病毒的分离鉴定,但不能用于制备疫苗。能用于制备疫苗。病毒感染的实验诊断13优点优点细胞来源广、敏感细胞株多细胞来源广、敏感细胞株多不受机体免疫因素的影响,个体差异小不受机体免疫因素的影响,个体差异小病变结果易于观察病变结果易于观察可用于病毒的分离鉴定和制备疫苗及抗原可用于病毒的分离鉴定和制备疫苗及抗原缺点缺点条件要求相对较高,有细胞培养条件的实验室条件要求相对较高,有细胞培养条件的实验室才能做才能做病毒感染的实验诊断142.鸡胚培养鸡胚培养新鲜受精卵新鲜受精卵 接种病
10、毒接种病毒3839713d卵黄囊接种(流行性脑炎病毒)卵黄囊接种(流行性脑炎病毒)羊膜腔接种(流感病毒)羊膜腔接种(流感病毒)尿囊腔接种(传代培养)尿囊腔接种(传代培养)绒毛尿囊膜接种(痘类病毒)绒毛尿囊膜接种(痘类病毒)病毒感染的实验诊断15绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤绒毛尿囊膜表现有痘病毒的特异性损伤病毒感染的实验诊断16优点优点鸡胚来源充足,操作简便,有多种接种途径鸡胚来源充足,操作简便,有多种接种途径病毒增殖快,可收获大量病毒病毒增殖快,可收获大量病毒鸡胚本身是无菌的,对接种的病毒不产生抗鸡胚本身是无菌的,对接种的病毒不产生抗体体缺点缺点易感病毒少,目前主要易感病毒少,目前主要用
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