病毒感染检查方法和防治原则培训课件.ppt

1、病毒感染检查方法和病毒感染检查方法和防治原则防治原则内内 容容第一节第一节 病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法第二节第二节 病毒感染的特异性预防病毒感染的特异性预防(自学自学)第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗(自学自学)2病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则第一节第一节 病毒感染的诊断病毒感染的诊断（Diagnosis of viral infection）标本采集与送检原则标本采集与送检原则 病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法3病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则一、标本采集与送检原则一、标本采集与送检原则 按疾病种类与病程采取不同标本按疾病种类

2、与病程采取不同标本 在发病早期与用药之前采取标本在发病早期与用药之前采取标本 无菌操作，无菌操作，有菌标本用有菌标本用“双抗双抗”（青、链（青、链霉霉 素）或素）或“三抗三抗”（青、链霉素（青、链霉素+两性霉素两性霉素B B）处理处理 冷藏速送，病变组织用冷藏速送，病变组织用5050甘油保存甘油保存 血清学检测：血清学检测：IgM IgM 单份血清单份血清 IgG IgG 双份血清双份血清 4病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则二、检查方法二、检查方法 病毒的形态学检查病毒的形态学检查 病毒的血清学检查病毒的血清学检查 病毒的分子生物学检查病毒的分子生物学检查 病毒的分离培养与

3、鉴定病毒的分离培养与鉴定快速诊断快速诊断5病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则病毒的分离培养与鉴定病毒的分离培养与鉴定:病毒的分离培养病毒的分离培养 病毒的鉴定病毒的鉴定 病毒数量及感染性测定病毒数量及感染性测定6病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则病毒的分离培养方法：病毒的分离培养方法：动物接种动物接种 鸡胚培养鸡胚培养 细胞培养细胞培养:7病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则 动物接种动物接种(animal inoculation)动物：动物：鼠、兔、猴、黑猩猩等鼠、兔、猴、黑猩猩等优点：优点：结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物

4、模型缺点：缺点：有饲养条件要求，费用高、动物有饲养条件要求，费用高、动物 体内常带有潜伏病毒。体内常带有潜伏病毒。目前已很少应用。目前已很少应用。8病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则 鸡胚培养鸡胚培养(embryonated egg culture)受精卵受精卵孵育孵育9-149-14天天鸡胚鸡胚接种病毒接种病毒孵育孵育2-72-7天天收获相应的材料进行鉴定收获相应的材料进行鉴定9病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则鸡胚接种部位：鸡胚接种部位：尿囊腔接种尿囊腔接种绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜接种接种卵黄囊卵黄囊接种接种羊膜腔羊膜腔接种接种10病毒感染检查方法和防治原则

5、病毒感染检查方法和防治原则(3)(3)细胞培养细胞培养 (cell culture)根据细胞生长的方式分根据细胞生长的方式分:单层细胞培养单层细胞培养（monolayer cell culture）11病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则根据细胞来源、染色体特征及传代次数分根据细胞来源、染色体特征及传代次数分:原代培养细胞原代培养细胞 二倍体细胞株二倍体细胞株 传代细胞系或株传代细胞系或株(3)(3)细胞培养细胞培养 (cell culture)12病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则原代培养细胞原代培养细胞（primary cultural cells)动物组

6、织动物组织单层细胞单层细胞(原代细胞原代细胞)剪碎剪碎 组织块组织块蛋白酶蛋白酶分散成单个细胞分散成单个细胞培养基培养基传代培养传代培养单层细胞单层细胞(次代细胞次代细胞)原代培养：将动物组织消化后在体外的初次培养。原代培养：将动物组织消化后在体外的初次培养。13病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则原代培养细胞原代培养细胞（primary cultural cells)特点特点:对多种病毒敏感对多种病毒敏感 生长能力有限生长能力有限,获取成本高获取成本高 可携带潜伏病毒可携带潜伏病毒应用应用:病毒分离与鉴定病毒分离与鉴定 病毒学实验研究病毒学实验研究 不能不能用于制备疫苗用于制

7、备疫苗epithelial cells14病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则体外分裂体外分裂5050100100代仍保持二倍染色体数目的单层细胞代仍保持二倍染色体数目的单层细胞特点特点:对多种病毒敏感对多种病毒敏感 不带异种蛋白不带异种蛋白(人源性人源性)不带病毒不带病毒,无致瘤潜能无致瘤潜能应用应用:病毒分离与鉴定病毒分离与鉴定 病毒学实验研究病毒学实验研究 制备疫苗制备疫苗二倍体细胞株二倍体细胞株 (diploid cell strain)fibroblastic cells15病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则 传代细胞系传代细胞系 (continuo

8、us cell line)特点特点:对多种病毒敏感性高对多种病毒敏感性高 繁殖能力强繁殖能力强,传代时间长传代时间长 有致癌危险有致癌危险(来源于癌细来源于癌细胞或突变的二倍体细胞株胞或突变的二倍体细胞株)应用应用:病毒分离与鉴定病毒分离与鉴定 病毒学实验研究病毒学实验研究 不能不能用于制备疫苗用于制备疫苗能在体外无限传代的细胞系。如能在体外无限传代的细胞系。如 HeLa,Hep-2epithelioid cells16病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则:病毒的分离培养病毒的分离培养 病毒的鉴定病毒的鉴定 病毒数量及感染性测定病毒数量及感染性测定病毒的分离培养与鉴定病毒的分离

9、培养与鉴定17病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则病毒鉴定病毒鉴定：病毒在细胞中增殖的指标病毒在细胞中增殖的指标 病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定 病毒抗原鉴定病毒抗原鉴定 病毒基因鉴定病毒基因鉴定18病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则 细胞病变效应细胞病变效应 (cytopathic effect,CPE)病毒在敏感细胞内增殖引起的光镜下病毒在敏感细胞内增殖引起的光镜下可见的细胞病理改变。可见的细胞病理改变。19病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则CPECPE：病毒感染细胞发生形态改变：病毒感染细胞发生形态改变20病毒感染检查方法和防治原则病毒感

10、染检查方法和防治原则CPE：形成包涵体（：形成包涵体（inclusion body）(核内核内)()(胞浆内胞浆内)22病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则Syncytial formation caused by mumps virus and haemadsorption of erythrocytes onto the surface of the cell sheet.红细胞吸附红细胞吸附（hemadsorption,HAd）受染细胞膜表面血凝素（受染细胞膜表面血凝素（HAHA）RBCRBC表面表面HAHA受体受体23病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则

11、 干扰现象干扰现象（interference）风疹病毒人胚肾细胞风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，CPECPE（）（）埃可病毒人胚肾细胞埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，CPECPE（）（）人胚肾细胞人胚肾细胞风疹病毒？风疹病毒？埃可病毒埃可病毒CPE(-)CPE(-)埃可病毒埃可病毒(-)(-)风疹病毒风疹病毒(+)(+)CPE(+)CPE(+)埃可病毒埃可病毒(+)(+)风疹病毒风疹病毒(-)(-)24病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则 细胞代谢的改变细胞代谢的改变病毒病毒 感染细胞感染细胞 在细胞内增值在细胞内增值细胞代谢改变细胞代谢改变培养液培养液pHpH

12、值改变值改变25病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则:病毒的分离培养病毒的分离培养 病毒的鉴定病毒的鉴定 病毒数量与感染性测定病毒数量与感染性测定病毒的分离培养与鉴定病毒的分离培养与鉴定26病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则 病毒数量与感染性测定：病毒数量与感染性测定：蚀蚀(空空)斑形成试验斑形成试验 50%50%组织细胞感染量组织细胞感染量病毒总量病毒总量(活病毒活病毒+死病毒死病毒)：感染性病毒量感染性病毒量:血凝试验血凝试验27病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则蚀蚀(空空)斑形成试验斑形成试验（plaque assay）原理：原理：将适

13、当稀释浓度的病毒液定量接种于敏感将适当稀释浓度的病毒液定量接种于敏感的单层细胞，经一段时间吸附后，在细胞上覆盖的单层细胞，经一段时间吸附后，在细胞上覆盖一层未凝固琼脂，待其凝固后继续培养，由于病一层未凝固琼脂，待其凝固后继续培养，由于病毒的增值使感染的单层细胞病变脱落，形成肉眼毒的增值使感染的单层细胞病变脱落，形成肉眼可见的空斑，一个可见的空斑，一个蚀蚀斑是由一个感染性病毒颗粒斑是由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的，计数平板中空斑数可计算出样品增殖而形成的，计数平板中空斑数可计算出样品中活病毒的数量。中活病毒的数量。通常以每毫升病毒液的空斑形成单位（通常以每毫升病毒液的空斑形成单位（plaque

14、 plaque forming unit,PFU),forming unit,PFU),既既 PFU/mlPFU/ml表示。表示。28病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY29病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY30病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则PLAQUE ASSAYPLAQUE ASSAY31病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则蚀蚀(空空)斑形成试验斑形成试验（plaque assay）Vero cells,which grew

15、 confluently on the bottom of the plastic plate(1.5 cm diameter),were infected with herpes simplex virus 32病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则用途：用途：测定感染性病毒量测定感染性病毒量 单位单位:PFU:PFU(plaque forming unit)/ml(plaque forming unit)/ml 由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的一由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的一 个空斑称为空斑形成单位。个空斑称为空斑形成单位。分纯病毒分纯病毒蚀蚀(空空)斑形成试验斑形成试验

16、（plaque assay）33病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则50%50%组织细胞感染量组织细胞感染量(50%tissue culture infectious dose,TCID50)概念：概念：测定病毒感染细胞后引起测定病毒感染细胞后引起50%50%细胞病变或细胞病变或死亡的最小病毒量。死亡的最小病毒量。方法：方法：将待测病毒液作将待测病毒液作1010倍系列稀释，分别接种倍系列稀释，分别接种于单层细胞，经培养后观察于单层细胞，经培养后观察CPECPE等指标，以能使等指标，以能使50%50%细胞感染的病毒最高稀释度作为终点。用统细胞感染的病毒最高稀释度作为终点。用统计方

17、法计算出计方法计算出50%50%组织细胞感染量。组织细胞感染量。用途：用途：判断病毒的感染性和毒力判断病毒的感染性和毒力34病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则50%50%组织细胞感染量组织细胞感染量(TCID50)35病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则1.1.名词解释名词解释:cytopathic effect（CPE）hemadsorption（Had）plaque assay TCID50 2.2.分离病毒标本和血清学诊断标本各有何求？分离病毒标本和血清学诊断标本各有何求？3.3.常用分离培养病毒的方法有哪些？常用分离培养病毒的方法有哪些？4.4.病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？5.5.病毒性感染的快速诊断方法有哪些？病毒性感染的快速诊断方法有哪些？思考题思考题36病毒感染检查方法和防治原则病毒感染检查方法和防治原则