疟疾的病原学诊断技术培训课件.ppt
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- 疟疾 病原学 诊断 技术培训 课件
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1、疟疾的病原学诊断技术(优选)疟疾的病原学(优选)疟疾的病原学诊断技术诊断技术血膜的制作血膜的制作用于检查疟原虫的血用于检查疟原虫的血涂片有两种一种是将涂片有两种一种是将血液涂呈薄膜状,称血液涂呈薄膜状,称薄血膜;一种是血液薄血膜;一种是血液涂成圆盘,称厚血膜。涂成圆盘,称厚血膜。无特殊要求的可厚薄无特殊要求的可厚薄血膜分载玻片涂制。血膜分载玻片涂制。发热病人血片发热病人血片标本片标本片薄血膜的制作l薄血膜薄血膜 取一小滴血(约取一小滴血(约11.5微升的血量),微升的血量),将血滴置于载玻片中部,将推玻片的边缘紧贴载将血滴置于载玻片中部,将推玻片的边缘紧贴载玻片血滴前,使血液沿推玻片边缘散开约
2、玻片血滴前,使血液沿推玻片边缘散开约 2cm宽时,使推玻片与平置的载玻片形成宽时,使推玻片与平置的载玻片形成25350夹夹角,平稳、均匀由右向左推片,形成舌型、头体角,平稳、均匀由右向左推片,形成舌型、头体尾分明的薄血膜(约尾分明的薄血膜(约2.02.5cm宽宽 2.53.0cm长)。长)。l影响因素速度快慢、血滴大小、推片与载玻片夹影响因素速度快慢、血滴大小、推片与载玻片夹角大小等影响血膜的厚薄、大小。角大小等影响血膜的厚薄、大小。l要求制成的薄血膜外观厚薄均匀,无划痕,无起要求制成的薄血膜外观厚薄均匀,无划痕,无起伏,边缘整齐光滑舌状血膜;在镜下看伏,边缘整齐光滑舌状血膜;在镜下看RBC平
3、铺平铺互相接触而不重叠。互相接触而不重叠。l薄血膜位置薄血膜位于载玻片左薄血膜位置薄血膜位于载玻片左1/2处。处。厚血片制作l厚血膜厚血膜 用推玻片的一角,从取血部位刮取约用推玻片的一角,从取血部位刮取约4微升左右血量,使血滴与平置的载玻片接触,微升左右血量,使血滴与平置的载玻片接触,接着用推玻片角由里向外一个方向旋转接着用推玻片角由里向外一个方向旋转24圈,圈,涂成直径涂成直径0.81cm大小、圆形厚血膜。大小、圆形厚血膜。l厚血膜要求外观圆形厚薄均匀,无划痕。镜下厚血膜要求外观圆形厚薄均匀,无划痕。镜下观察其厚度,以每油镜视野观察其厚度,以每油镜视野510个个WBC为宜。为宜。过厚易于脱落
4、,过薄达不到检出率要求。过厚易于脱落,过薄达不到检出率要求。l厚血膜位置位于玻片右半部分左厚血膜位置位于玻片右半部分左1/2处处血膜编号血膜编号 血膜制成后,立即在玻片面上写上受检者的个人编号,以防差错;待薄血膜干后玻片头可粘贴患者信息,亦可用铅笔在薄血膜头写上血片种类的代号,依次顺序插入标本盒内。制片时机掌握(取血时间)l采血时间采血时间 现症病人和流调普查时可现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时,则应掌握适某期疟原虫作标本时,则应掌握适宜的取血时机。宜的取血时机。l疟疾典型的临床表现分前驱期、发疟疾典型的临床表现分前驱期、发冷
5、(寒战)期、发热期、出汗期和冷(寒战)期、发热期、出汗期和间歇期五期。间歇期五期。1.采血时间采血时间 P.v 发作后发作后10小时内采血,小时内采血,各期(各期(R、T、S、G)疟原虫均可)疟原虫均可查见。查见。P.f 发作时采血可查到发作时采血可查到 R;发作;发作后后10天左右采血可查见天左右采血可查见 G。间日疟(取血时间)l在前驱期(相当于肝内期疟原虫发育)因原虫密度太低,镜检多为阴性。l发热期外周血中以环状体(小滋养体)为主,也可见到裂殖体;l发冷寒战期(相当于红内期,成熟裂殖体涨破红细胞期),镜检多为裂殖体和环状体。l出汗期因原虫密度太低,镜检多为阴性。l发作后数小时,间歇期外周
6、血中以大滋养体为主,形态较易辩认,为诊断的有利时机。发作3648h,可检出裂殖体。l发作12次后,配子体出现较多。恶性疟(取血时间)l恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20h内。l初发患者退热后常查不到原虫。l末梢血中检出恶性疟配子体,是在末梢血出现环状体之后的10天左右。制作血膜的注意事项 1.玻片清洗时,避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时,手指只能持载片的边缘,不能接触玻片表面,以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑,才能使推出的血膜均匀一致。制作血膜的注意事项l 2.刚涂制的血膜要平放在标本盒内,厚血膜未干前勿使标本盒
7、倾斜,以免血膜倾向一侧,造成血膜厚薄不均,厚处不一溶血和着色而影响检查结果;晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜,干后应及时装入标本盒并盖严,新的木制标本盒需敞开放置一段时间,让木醇挥发后才能使用,以免厚血膜红蛋白被其固定,不能溶血或染色效果不佳。制作血膜的注意事项l 3.血膜让其自然干燥,切忌用太阳晒或火烤,干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能2448小时内固定染色;冬天也不能超过72小时。放置时间越久,厚血膜越不易脱血,染色效果也差。若不能及时染色,膜血膜宜先用甲醇固定(13分钟)然后用过滤清水对厚血膜溶血,晾干固定后装入盒内盖严,待以后染色。厚薄血膜的优缺点及适用范围
8、薄血膜用血量少薄血膜用血量少11.5ul,疟原虫的,疟原虫的形态完整,便于疟原虫虫种的鉴形态完整,便于疟原虫虫种的鉴定。为保证检测的敏感性,常耗定。为保证检测的敏感性,常耗时较多,不适用于大规模调查,时较多,不适用于大规模调查,常出现漏诊。常出现漏诊。厚血膜用血量较多厚血膜用血量较多45ul,疟原虫胞,疟原虫胞浆和核有一定程度的固缩,较难浆和核有一定程度的固缩,较难识别;但须查范围小,节省时间,识别;但须查范围小,节省时间,阳性检出率较高。阳性检出率较高。血片的镜检原则血片的镜检原则1.1.镜检疟原虫,必须对正常厚薄血膜中各种血细胞的形态、结构和染色性质能够识别。2.镜检疟原虫,首先要会看薄血
9、膜,在基本上掌握薄血膜中疟原虫形态后,才镜检厚血膜。3.镜检疟原虫一般只查厚血膜,薄血膜仅作为原虫分类时参考和血片编号之用。4.镜检疟原虫必须用油镜头配合5X低倍目镜镜检,当发现疑难问题时可调换10X目镜进行观察。5.检查时应从厚血膜的上缘开始,使血膜从上而下,自左至右,由右至左,一行接一行,一个视野稍叠一个视野顺序地查完整个血膜。放置时间越久,厚血膜越不易脱血,染色效果也差。间日疟原虫的配子体呈圆形或卵圆形,除虫体略缩小且着色深外,均与薄血膜相似。制片时,手指只能持载片的边缘,不能接触玻片表面,以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。小滋养体大小较大,约占红细胞直径的1/3胞浆小环状体纤细
10、,大环状体与间日疟原虫相似采血时间 P.间日疟雄(小)配子体形态1、疟原虫要有核有浆(红核蓝浆)。红细胞大小正常,颜色恶性疟原虫大滋养体与薄血膜形态相似,常呈圆形,体小结实,疟色素细小,金黄色,结成块状后,呈黑褐色。一个红细胞内可有几个环状体镜下观察其厚度,以每油镜视野510个WBC为宜。制片时机掌握(取血时间)虫体大小:不超过被寄生红细胞的3/4卵圆形滋养体,蓝色较深,核较大虫体较小,占满胀大的红细胞形状新月形,两端稍尖。发冷寒战期(相当于红内期,成熟裂殖体涨破红细胞期),镜检多为裂殖体和环状体。虫体大小较大,约为红细胞直径1/3。各发育阶段的基本特点薄血膜中常见的血液细胞中性粒细胞嗜酸性粒
11、细胞单核细胞淋巴细胞红细胞血小板疟原虫的生活史疟原虫的生活史及其及其 各发育阶段的基本特点各发育阶段的基本特点疟原虫生活史l人疟原虫完成其生活史需要人和按蚊两人疟原虫完成其生活史需要人和按蚊两个宿主。个宿主。l 1.在按蚊体内进行有性繁殖,按蚊在按蚊体内进行有性繁殖,按蚊是疟原虫的终末宿主。是疟原虫的终末宿主。l 2.在人体内进行无性增殖,人是疟在人体内进行无性增殖,人是疟原虫的中间宿主。原虫的中间宿主。传播媒介传播媒介l中华按蚊疟原虫生活史 含成熟疟原虫子孢子按蚊 叮咬人 子孢子随唾液进入人体血液 约30分钟 侵入肝细胞 裂体增殖 成熟裂殖体(含数以万计裂殖子)肝细胞破裂 裂殖子侵入红细胞(
12、开始红细胞内期红细胞内期发育)发育 小滋养体(环状体)摄食营养、发育 大滋养体 核分裂、发育 未成熟裂殖体 核进一步分裂 裂殖体(成熟)被寄生红细胞破裂 裂殖子释放入血流 一部分被巨噬细胞吞噬。一部分再侵入红细胞,开始新的一轮发育。一部分裂殖子在红细胞内不再进行裂体增殖,而发育成雌、雄配子体。在蚊体内进行有性生殖。疟原虫生活史示意图疟原虫生活史示意图疟原虫生活史示意图 (红内各期原虫形态)疟原虫生活史示意疟原虫生活史示意由生活史看出由生活史看出疟原虫对人体的主要致病阶段疟原虫对人体的主要致病阶段 是红细胞内期的裂体增殖期;主要是指是红细胞内期的裂体增殖期;主要是指红细胞内期的无性体红细胞内期的
13、无性体小滋养体到成小滋养体到成熟裂殖体,而不是红细胞内期的无性熟裂殖体,而不是红细胞内期的无性体体配子体;配子体;具有流行病学意义的疟疾传染源具有流行病学意义的疟疾传染源 是外周血内有配子体的现症病人和带虫是外周血内有配子体的现症病人和带虫者。者。可见早期诊断治疗的重要性。可见早期诊断治疗的重要性。复发由肝内期迟发型子孢子引起。复发由肝内期迟发型子孢子引起。人类疟原虫的 基本特征人体疟原虫的基本结构人体疟原虫的基本结构l人体疟原虫的基本构造胞人体疟原虫的基本构造胞核、胞质和包膜核、胞质和包膜疟原虫的结构与镜检疟原虫的结构与镜检l 疟原虫形态检查三要素疟原虫形态检查三要素l 胞核、胞质和疟色素胞
14、核、胞质和疟色素l1、胞、胞 核核 即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色,呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密,只有红色,呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密,只有在个别发育阶段较为疏松。在个别发育阶段较为疏松。l l 2、胞、胞 质;质;被染成蔚蓝色或深蓝色,随着虫体发育长被染成蔚蓝色或深蓝色,随着虫体发育长大,细胞浆逐渐增多。大,细胞浆逐渐增多。l l 3、疟色素;颜色和颗粒的形状,因疟原虫种类而异。、疟色素;颜色和颗粒的形状,因疟原虫种类而异。感染人的疟原虫有四种:l恶性疟原虫恶性疟原虫 P.falciparum l间日疟原虫间日疟原虫 P.v
15、ivaxl三日疟原虫三日疟原虫 P.malariae l卵形疟原虫卵形疟原虫 P.ovale 核 红色,分裂为二个以上。裂殖子832个,通常818个,排列不规则红细胞胀大,褪色,可有薛氏小点。1、胞 核 即细胞核或染色质粒。6-12平均=8呈菊花状采血时间 P.81cm大小、圆形厚血膜。色素黄褐色,均匀散在f 发作时采血可查到 R;胞浆不规则,浅蓝色,出现阿米巴伪足,有空泡。薄血膜间日疟大滋养体形态恶性疟雌(大)配子体形态阿米巴样滋养体,浅蓝色,活泼虫体大小较小,约为红细胞直径1/51/6。间日疟原虫的环较大,常呈分号“;采血时间 现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。胞浆和核裂殖子832涨大
16、,可达正常的 1.色素黑褐色团块状雄配子体核大,疏松,圆形或呈星状,胞浆较少,着色淡,疟色素颗粒大,数量较多,散在分布。核红色,一个,偶有二个。恶性疟 P.falciparum 分布热带、亚热带,是非洲的重要疾病分布热带、亚热带,是非洲的重要疾病 我国流行区域为云南省和海南省我国流行区域为云南省和海南省 四种疟原虫中致病力最强,无免疫力者四种疟原虫中致病力最强,无免疫力者 感感染后出现急性症状染后出现急性症状,不及时治疗可危及生命不及时治疗可危及生命间日疟 P.vivax 间日疟原虫分布于我国大部分地区,主要是中部间日疟原虫分布于我国大部分地区,主要是中部地区。地区。病程良性病程良性,有复发。
17、有复发。遍布全球温带地区及大片热带地区。在热遍布全球温带地区及大片热带地区。在热 带非洲,特别是西非则很少见。带非洲,特别是西非则很少见。三日疟 P.malariae l遍及热带和亚热带地区,特别是东、西非洲,圭亚那及印度遍及热带和亚热带地区,特别是东、西非洲,圭亚那及印度部分地区,呈片状、块状分布部分地区,呈片状、块状分布l三日疟在我国非常少见,只在南方广西有过散在报告三日疟在我国非常少见,只在南方广西有过散在报告l无复发无复发卵形疟 P.ovale又称蛋形疟原虫又称蛋形疟原虫,主要分布非洲。太平洋地区、缅甸、东南亚有主要分布非洲。太平洋地区、缅甸、东南亚有散在报告散在报告l在我国已基本消灭
18、在我国已基本消灭l症状与间日疟相似症状与间日疟相似,有复发有复发1.红细胞通常涨红细胞通常涨大大 2.薛氏点明显薛氏点明显 3.成熟环状体粗成熟环状体粗大大4.滋养体胞浆有滋养体胞浆有阿米巴样伪足阿米巴样伪足5.血片中可见各血片中可见各期的原虫形态期的原虫形态6.成熟裂殖体约成熟裂殖体约含含12-24个裂殖个裂殖子子 间日疟(间日疟(P.vivax)鉴定要点)鉴定要点1.红细胞不涨大红细胞不涨大2.环状体钎细环状体钎细,一个红一个红细胞内可有几个环细胞内可有几个环状体状体,环状体内可有环状体内可有2个核个核 3.环状体可贴在红细环状体可贴在红细胞边缘胞边缘 4.血片中没有其他发血片中没有其他发
19、育期滋养体育期滋养体 5.配子体呈新月形或配子体呈新月形或腊肠形腊肠形6.成熟裂殖体约含成熟裂殖体约含6-32个裂殖子个裂殖子7.可出现茂氏点可出现茂氏点恶性疟(恶性疟(P.falciparum)鉴定)鉴定 要点要点1.红细胞不涨红细胞不涨大或略小大或略小2.环状体可呈环状体可呈方形方形3.胞浆不活跃胞浆不活跃呈带状形呈带状形 4.成熟滋养体成熟滋养体呈菊花状呈菊花状,内内含含6-12个裂个裂殖子殖子 5.核可能出现核可能出现在环状体边在环状体边缘缘 三日疟(三日疟(P.malariae)诊断要点)诊断要点卵形疟(卵形疟(P.ovale)诊断要点)诊断要点1.红细胞涨大红细胞涨大 2.常见慧星
20、状常见慧星状(也称齿轮状也称齿轮状)3.环粗大环粗大 4.薛氏点明显薛氏点明显 5.成熟滋养体类成熟滋养体类似三日疟原虫似三日疟原虫但更粗大但更粗大6.成熟裂殖体约成熟裂殖体约含含4-12个裂殖个裂殖子子 种种周 围 血周 围 血中 发 育中 发 育阶段阶段红细胞形态红细胞形态疟原虫形态疟原虫形态大小大小点彩点彩胞浆胞浆疟色素疟色素裂殖子数裂殖子数恶性疟原恶性疟原虫虫环状体环状体配子体配子体正常正常常见常见茂氏茂氏点点环状体钎细,环状体钎细,常见个核常见个核粗黑,配子粗黑,配子体中明显体中明显6-32平均平均=10-24间日间日疟原疟原虫虫各 期 滋各 期 滋养体养体裂 殖 体裂 殖 体和和配
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