散射免疫比浊法精选课件.ppt

1、散射免疫比浊法散射免疫比浊法雅安职业技术学院雅安职业技术学院目录目录 第一节第一节 免疫比浊技术原理免疫比浊技术原理 第二节第二节 自动化免疫比浊分析自动化免疫比浊分析 第三节第三节 小结小结 雅安职业技术学院雅安职业技术学院第一节第一节 免疫比浊技术原理免疫比浊技术原理免疫比浊技术分类：免疫比浊技术分类：透射免疫比浊法透射免疫比浊法（turbidimetric immunoassay）散射免疫比浊法散射免疫比浊法（nephelometry immunoassay）速率散射比浊法速率散射比浊法终点散射比浊法终点散射比浊法雅安职业技术学院雅安职业技术学院一、透射免疫比浊法一、透射免疫比浊法 当一

2、定波长的光通过抗原抗体反应形成当一定波长的光通过抗原抗体反应形成的免疫复合物时会因为反射和吸收而减弱，的免疫复合物时会因为反射和吸收而减弱，一定范围内，透射光被吸收的量与复合物的一定范围内，透射光被吸收的量与复合物的量呈量呈正相关正相关关系，而复合物的量与抗原抗体关系，而复合物的量与抗原抗体量为一定的函数关系。量为一定的函数关系。（一）基本原理（一）基本原理4 在抗原或抗体量一定的条件下，可以利用比浊在抗原或抗体量一定的条件下，可以利用比浊仪在光源的光路方向上测定透射光强度与入射仪在光源的光路方向上测定透射光强度与入射光强度的比值或吸光度，来判断待测抗原的量，光强度的比值或吸光度，来判断待测抗

3、原的量，这种方法称为这种方法称为透射比浊法透射比浊法。雅安职业技术学院雅安职业技术学院透射免疫比浊法光路图透射免疫比浊法光路图雅安职业技术学院雅安职业技术学院待测的抗原抗体复合物分子量足够大。待测的抗原抗体复合物分子量足够大。抗原抗体复合物数量足够多。抗原抗体复合物数量足够多。具有充分的反应时间。具有充分的反应时间。高亲和力的抗体，并保证抗体过量。高亲和力的抗体，并保证抗体过量。（二）技术要求（二）技术要求雅安职业技术学院雅安职业技术学院自动化免疫比浊分析仪器的问世解决了以上的诸多问题。散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。第一节 免疫比浊技术原理

4、此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。该法是抗原抗体结合反应的一种动态测定方法。该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测标本数十份；（二）ARRAY分析系统此外，试剂需要加保护剂以提高其稳定性，所用器皿要洁净，避免杂质微粒的干扰。测定的时间依然较长，且随时间延长，抗原抗体复合物有重新结合的趋势，可影响散射值的变化及存在反应本底，在微量测定时，本底的干扰是影响测定准确性的重要因素。离子强度 PBS是较好的反应液。其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物的大小和多少密切相关。透射免疫比浊法的灵敏度是单向琼脂扩散

5、方法的510倍，但其与标记免疫分析技术相比还不够高。2抗体的纯度与效价 诊断试剂应尽可能选择高纯度与高效价的抗体。该法是抗原抗体结合反应的一种动态测定方法。该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种改良。该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复合物对结果影响也小，因此结果稳定、可靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均可使用。一、主流免疫比浊设备概况另外，要注意保证抗原浓度合适。该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测标本数十份；透射免疫比浊法的灵敏度是单向琼脂扩散方透射免

6、疫比浊法的灵敏度是单向琼脂扩散方法的法的5 51010倍，但其与标记免疫分析技术相比倍，但其与标记免疫分析技术相比还不够高。因此，透射比浊类的自动分析仪用还不够高。因此，透射比浊类的自动分析仪用于免疫测定已趋减少，该测定原理于免疫测定已趋减少，该测定原理主要用于生主要用于生化分析仪。化分析仪。（三）方法学评价（三）方法学评价雅安职业技术学院雅安职业技术学院抗原抗体反应曲线抗原抗体反应曲线雅安职业技术学院雅安职业技术学院二、二、散射免疫比浊法散射免疫比浊法散射比浊法散射比浊法是指一定波长的光沿水平轴照射，是指一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液时遇到其中的抗原抗体复合物，光通过溶液时遇到其中的抗原

7、抗体复合物，光线被粒子颗粒折射而发生偏转，产线被粒子颗粒折射而发生偏转，产 生散射生散射光。光。（一）基本原理（一）基本原理10透射浊度法和散射浊度法的光路可以实现自动化管理，但用于免疫沉淀反应有很多缺陷，如因为是一次性测定光吸收值，没有考虑单个待测样本的散射效果，可能使测定结果不准确。透射免疫比浊法的灵敏度是单向琼脂扩散方法的510倍，但其与标记免疫分析技术相比还不够高。该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测标本数十份；速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗原的浓度。此外，试剂需要加保护剂以提高其稳定性，所用器皿

8、要洁净，避免杂质微粒的干扰。第二节 自动化免疫比浊分析离子强度 PBS是较好的反应液。（turbidimetric immunoassay）第一节 免疫比浊技术原理速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力交高的试剂。该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复合物对结果影响也小，因此结果稳定、可靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均可使用。（nephelometry immunoassay）3免疫复合物的大小及稳定性 溶液中免疫复合物颗粒的分散度尽可能相同，颗粒应该不容易相互聚集。其中光线偏转的角度与发射光的波长

9、和抗原抗体复合物的大小和多少密切相关。该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测标本数十份；（turbidimetric immunoassay）此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。敏感度高，最小检出量达微克/升水平。该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复合物对结果影响也小，因此结果稳定、可靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均可使用。此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。（一）BN特种蛋白分析测定系统 其中光线偏转的角度与发射光的波长其中光线偏转的角度与发射光

10、的波长和抗原抗体复合物的大小和多少密切相关。和抗原抗体复合物的大小和多少密切相关。散射光的强度与复合物的含量成散射光的强度与复合物的含量成正比正比，即，即待测的抗原越多，形成的复合物越多，散待测的抗原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。射光就越强。雅安职业技术学院雅安职业技术学院透射浊度法和散射浊度法的光路透射浊度法和散射浊度法的光路雅安职业技术学院雅安职业技术学院 应选择应选择适当适当的光源强度、反应时间、测量角度的光源强度、反应时间、测量角度及光源的波长。另外，要注意保证抗原浓度合及光源的波长。另外，要注意保证抗原浓度合适。此外，还要选择适宜的离子强度、适。此外，还要选择适宜的离子强度、

11、pHpH值等。值等。（二）技术要求（二）技术要求雅安职业技术学院雅安职业技术学院 散射免疫比浊法散射免疫比浊法是当今免疫化学分析中比较有是当今免疫化学分析中比较有优势的方法。可以实现自动化管理，但用于免疫沉优势的方法。可以实现自动化管理，但用于免疫沉淀反应有很多缺陷，如因为是一次性测定光吸收值，淀反应有很多缺陷，如因为是一次性测定光吸收值，没有考虑单个待测样本的散射效果，可能使测定结没有考虑单个待测样本的散射效果，可能使测定结果不准确。果不准确。（三）方法学评价（三）方法学评价雅安职业技术学院雅安职业技术学院 测定的时间依然较长，且随时间延长，抗原抗测定的时间依然较长，且随时间延长，抗原抗体复

12、合物有重新结合的趋势，可影响散射值的变体复合物有重新结合的趋势，可影响散射值的变化及存在反应本底，在微量测定时，化及存在反应本底，在微量测定时，本底的干扰本底的干扰是影响测定准确性的重要因素。是影响测定准确性的重要因素。雅安职业技术学院雅安职业技术学院三、三、速率免疫比浊法速率免疫比浊法该法是抗原抗体结合反应的一种该法是抗原抗体结合反应的一种动态测定动态测定方法。方法。将抗原抗体的沉淀反应与散射比浊分析相结合，将抗原抗体的沉淀反应与散射比浊分析相结合，对单位时间内抗原和抗体结合形成复合物的速对单位时间内抗原和抗体结合形成复合物的速度进行动力学测定即为度进行动力学测定即为速率免疫比浊法速率免疫比

13、浊法。（一）基本原理（一）基本原理16 当抗体的浓度固定于一定范围时，速度峰值当抗体的浓度固定于一定范围时，速度峰值的高低与抗原的含量成的高低与抗原的含量成正比正比，随着时间的延长，随着时间的延长，免疫复合物的量逐渐增多，抗原抗体结合速度的免疫复合物的量逐渐增多，抗原抗体结合速度的峰值在一定的时间出现。通过微机处理即可得到峰值在一定的时间出现。通过微机处理即可得到待测蛋白成份的含量。待测蛋白成份的含量。雅安职业技术学院雅安职业技术学院累计时间复合物产生总量产生速率510152025303540455055608132560150230300360415450480500512359080706

14、055453020 抗原抗体复合物形成时间与速率的关系抗原抗体复合物形成时间与速率的关系雅安职业技术学院雅安职业技术学院 速率散射比浊法速率散射比浊法峰值出现的时间峰值出现的时间与抗体浓度及与抗体浓度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力交高的试纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力交高的试剂。此外，要保证待测样本血清的性状符合要求，剂。此外，要保证待测样本血清的性状符合要求，如严重脂血等即为不合格样本。如严重脂血等即为不合格样本。（二）技术要求（二）技术要求雅安职业技术学院雅安职业技术学院 该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，其最大优点在于其最大优点在于

15、快速快速，检测不必等到抗原抗体，检测不必等到抗原抗体达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测标本数十份；敏感度高，最小检出量达微克标本数十份；敏感度高，最小检出量达微克/升水平。升水平。（三）方法学评价（三）方法学评价雅安职业技术学院雅安职业技术学院四、免疫胶乳比浊法四、免疫胶乳比浊法将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒上，制成致敏的胶乳颗粒，当遇到相应抗原时，上，制成致敏的胶乳颗粒，当遇到相应抗原时，发生交联反应，形成抗原抗体复合物，胶乳颗发生交联反应，形成抗原抗体复合物，胶乳颗粒发生凝集。粒发生凝集。（一）

16、基本原理（一）基本原理21速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗原的浓度。二、免疫比浊分析的主要影响因素本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量的前提下，光束通过抗原抗体复合物时所产生的散射光速率变化大小与抗原浓度成正比。（nephelometry immunoassay）速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力交高的试剂。一、主流免疫比浊设备概况离子强度 PBS是较好的反应液。可以实现自动化管理，但用于免疫沉淀反应有很多缺陷，如因为是一次性测定光吸收值，没有考虑单个待测样本的散射效果，可能使测定结果不准确。Array360、IMMAGE特种蛋白分析分析系统

17、该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测标本数十份；BN100、BN特种蛋白分析分析系统该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复合物对结果影响也小，因此结果稳定、可靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均可使用。单个胶乳颗粒在入射光波长之内并不阻碍光线透过，两个及其两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过的光减少，其减少的程度与胶乳颗粒凝聚的程度呈正比，即与待测抗原量呈正比，由此可检测样本中的特定抗原含量。离子强度 PBS是较好的反应液。此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。二

18、、免疫比浊分析的主要影响因素另外，要注意保证抗原浓度合适。自动化免疫比浊分析仪器的问世解决了以上的诸多问题。第一节 免疫比浊技术原理将抗原抗体的沉淀反应与散射比浊分析相结合，对单位时间内抗原和抗体结合形成复合物的速度进行动力学测定即为速率免疫比浊法。第一节 免疫比浊技术原理离子强度 PBS是较好的反应液。单个胶乳颗粒在入射光波长之内并不阻碍光单个胶乳颗粒在入射光波长之内并不阻碍光线透过，两个及其两个以上胶乳颗粒凝聚时则线透过，两个及其两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过的光减少，其减少的程度与胶乳颗粒凝使透过的光减少，其减少的程度与胶乳颗粒凝聚的程度呈正比，即与待测抗原量呈正比，由聚的程度呈正比，即

19、与待测抗原量呈正比，由此可检测样本中的特定抗原含量。此可检测样本中的特定抗原含量。雅安职业技术学院雅安职业技术学院 胶乳颗粒的胶乳颗粒的均一性均一性将直接影响光散射作用，将直接影响光散射作用，影响检测结果，因此需要选择均匀一致的胶影响检测结果，因此需要选择均匀一致的胶乳颗粒。此外，试剂需要加保护剂以提高其乳颗粒。此外，试剂需要加保护剂以提高其稳定性，所用器皿要洁净，避免杂质微粒的稳定性，所用器皿要洁净，避免杂质微粒的干扰。干扰。（二）技术要求（二）技术要求雅安职业技术学院雅安职业技术学院 该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复合该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复合物对结果影响也小，因此结果稳定、可

20、靠，物对结果影响也小，因此结果稳定、可靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均可使用。或散射比浊仪均可使用。返回章目录返回章目录（三）方法学评价（三）方法学评价雅安职业技术学院雅安职业技术学院（一）（一）BNBN特种蛋白分析测定系统特种蛋白分析测定系统该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种改良。以发光二极管作为光源，检测前向角改良。以发光二极管作为光源，检测前向角13132424度的散射光，然后利用硅化光电二极度的散射光，然后利

21、用硅化光电二极管接收散射光信号，经过微电脑处理，与标管接收散射光信号，经过微电脑处理，与标准曲线进行比较，最后转换成待检物质的浓准曲线进行比较，最后转换成待检物质的浓度。度。第二节第二节 自动化免疫比浊分析自动化免疫比浊分析一、主流免疫比浊设备概况一、主流免疫比浊设备概况1.测定原理测定原理雅安职业技术学院雅安职业技术学院 系统由分析仪、计算机、条码读取器、打印机四部分组成，其中分析仪是主要组成部分，包括散射测浊仪、自动加样系统、运输装置和比色杯装置。2.仪器基本组成仪器基本组成雅安职业技术学院雅安职业技术学院BN100BN100、BNBN特种蛋白分析分析系统特种蛋白分析分析系统雅安职业技术学

22、院雅安职业技术学院本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量的本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量的前提下，光束通过抗原抗体复合物时所产生的散前提下，光束通过抗原抗体复合物时所产生的散射光速率变化大小与抗原浓度成正比。速率的峰射光速率变化大小与抗原浓度成正比。速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗原的浓度。值通过电脑处理系统转换成待测抗原的浓度。1.测定原理测定原理（二）（二）ARRAYARRAY分析系统分析系统雅安职业技术学院雅安职业技术学院 ARRAY ARRAY系统由分析仪、电脑处理系统、打印机构系统由分析仪、电脑处理系统、打印机构成，其主要构成部分为分析仪，由加液系统、成，其主要构成

23、部分为分析仪，由加液系统、散射测浊仪、散射测浊仪、4040孔样本转盘、孔样本转盘、2020孔试剂转盘、孔试剂转盘、软盘驱动器等组成。软盘驱动器等组成。2.仪器基本组成仪器基本组成雅安职业技术学院雅安职业技术学院Array360Array360、IMMAGEIMMAGE特种蛋白分析分析系统特种蛋白分析分析系统雅安职业技术学院雅安职业技术学院二、免疫比浊分析的主要影响因素二、免疫比浊分析的主要影响因素1 1抗原抗体比例抗原抗体比例 抗原抗体比例要适当。抗原抗体比例要适当。2 2抗体的纯度与效价抗体的纯度与效价 诊断试剂应尽可能诊断试剂应尽可能选择高纯度与高效价的抗体。选择高纯度与高效价的抗体。3

24、3免疫复合物的大小及稳定性免疫复合物的大小及稳定性 溶液中免溶液中免疫复合物颗粒的分散度尽可能相同，颗粒应疫复合物颗粒的分散度尽可能相同，颗粒应该不容易相互聚集。该不容易相互聚集。雅安职业技术学院雅安职业技术学院4 4增聚剂增聚剂 利用增聚剂破坏抗原抗体的水化利用增聚剂破坏抗原抗体的水化层，促进反应的进行。层，促进反应的进行。5.5.离子强度离子强度 PBSPBS是较好的反应液是较好的反应液。返回章目录返回章目录雅安职业技术学院雅安职业技术学院小小 结结 经典的免疫沉淀反应通常是在抗原抗体经典的免疫沉淀反应通常是在抗原抗体反应的终点进行结果判断，存在操作繁琐、费反应的终点进行结果判断，存在操作

25、繁琐、费时、敏感度低及难以自动化等缺陷。自动化免时、敏感度低及难以自动化等缺陷。自动化免疫比浊分析仪器的问世解决了以上的诸多问题。疫比浊分析仪器的问世解决了以上的诸多问题。雅安职业技术学院雅安职业技术学院二、免疫比浊分析的主要影响因素速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗原的浓度。第一节 免疫比浊技术原理可以实现自动化管理，但用于免疫沉淀反应有很多缺陷，如因为是一次性测定光吸收值，没有考虑单个待测样本的散射效果，可能使测定结果不准确。ARRAY系统由分析仪、电脑处理系统、打印机构成，其主要构成部分为分析仪，由加液系统、散射测浊仪、40孔样本转盘、20孔试剂转盘、软盘驱动器等组成。该法敏感度高，

26、试剂稳定，个体免疫复合物对结果影响也小，因此结果稳定、可靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均可使用。该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测标本数十份；抗原抗体复合物形成时间与速率的关系一、主流免疫比浊设备概况散射比浊法是指一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液时遇到其中的抗原抗体复合物，光线被粒子颗粒折射而发生偏转，产 生散射光。此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复合物对结果影响也小，因此结果稳定、可靠，特异性好，精确度高，

27、且不需要特殊的仪器设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均可使用。（nephelometry immunoassay）该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测标本数十份；其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物的大小和多少密切相关。第二节 自动化免疫比浊分析敏感度高，最小检出量达微克/升水平。该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测标本数十份；一、主流免疫比浊设备概况另外，要注意保证抗原浓度合适。该法敏感度高，试剂稳定，

28、个体免疫复合物对结果影响也小，因此结果稳定、可靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均可使用。（turbidimetric immunoassay）离子强度 PBS是较好的反应液。第二节 自动化免疫比浊分析单个胶乳颗粒在入射光波长之内并不阻碍光线透过，两个及其两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过的光减少，其减少的程度与胶乳颗粒凝聚的程度呈正比，即与待测抗原量呈正比，由此可检测样本中的特定抗原含量。此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。透射浊度法和散射浊度法的光路将抗原抗体的沉淀反应与散射比浊分析相结合，对单位时间内抗原和抗体结合形成复合物的速度

29、进行动力学测定即为速率免疫比浊法。该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种改良。此外，试剂需要加保护剂以提高其稳定性，所用器皿要洁净，避免杂质微粒的干扰。4增聚剂 利用增聚剂破坏抗原抗体的水化层，促进反应的进行。可以实现自动化管理，但用于免疫沉淀反应有很多缺陷，如因为是一次性测定光吸收值，没有考虑单个待测样本的散射效果，可能使测定结果不准确。离子强度 PBS是较好的反应液。此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复合物对结果影响也小，因此结果稳定、可靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均可使用。抗原抗体复合物

30、形成时间与速率的关系自动化免疫比浊分析仪器的问世解决了以上的诸多问题。一、主流免疫比浊设备概况散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。可以实现自动化管理，但用于免疫沉淀反应有很多缺陷，如因为是一次性测定光吸收值，没有考虑单个待测样本的散射效果，可能使测定结果不准确。其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物的大小和多少密切相关。测定的时间依然较长，且随时间延长，抗原抗体复合物有重新结合的趋势，可影响散射值的变化及存在反应本底，在微量测定时，本底的干扰是影响测定准确性的重要因素。测定的时间依然较长，且随时间延长，抗原抗体复合物有重新结合的趋势，可

31、影响散射值的变化及存在反应本底，在微量测定时，本底的干扰是影响测定准确性的重要因素。（nephelometry immunoassay）单个胶乳颗粒在入射光波长之内并不阻碍光线透过，两个及其两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过的光减少，其减少的程度与胶乳颗粒凝聚的程度呈正比，即与待测抗原量呈正比，由此可检测样本中的特定抗原含量。将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒上，制成致敏的胶乳颗粒，当遇到相应抗原时，发生交联反应，形成抗原抗体复合物，胶乳颗粒发生凝集。一、主流免疫比浊设备概况2抗体的纯度与效价 诊断试剂应尽可能选择高纯度与高效价的抗体。离子强度 PBS是较好的反应液。速率的峰值通过电脑处理系

32、统转换成待测抗原的浓度。该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测标本数十份；第二节 自动化免疫比浊分析二、免疫比浊分析的主要影响因素该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复合物对结果影响也小，因此结果稳定、可靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊的仪器设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均可使用。散射比浊法是指一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液时遇到其中的抗原抗体复合物，光线被粒子颗粒折射而发生偏转，产 生散射光。速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗原的浓度。其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物的

33、大小和多少密切相关。待测的抗原抗体复合物分子量足够大。此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。透射浊度法和散射浊度法的光路本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量的前提下，光束通过抗原抗体复合物时所产生的散射光速率变化大小与抗原浓度成正比。1抗原抗体比例 抗原抗体比例要适当。胶乳颗粒的均一性将直接影响光散射作用，影响检测结果，因此需要选择均匀一致的胶乳颗粒。高亲和力的抗体，并保证抗体过量。待测的抗原抗体复合物分子量足够大。单个胶乳颗粒在入射光波长之内并不阻碍光线透过，两个及其两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过的光减少，其减少的程度与胶乳颗粒凝聚的程度呈正比，即与待测抗原量呈正比，由此可检测样本中的

34、特定抗原含量。其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物的大小和多少密切相关。敏感度高，最小检出量达微克/升水平。测定的时间依然较长，且随时间延长，抗原抗体复合物有重新结合的趋势，可影响散射值的变化及存在反应本底，在微量测定时，本底的干扰是影响测定准确性的重要因素。第二节 自动化免疫比浊分析散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。经典的免疫沉淀反应通常是在抗原抗体反应的终点进行结果判断，存在操作繁琐、费时、敏感度低及难以自动化等缺陷。胶乳颗粒的均一性将直接影响光散射作用，影响检测结果，因此需要选择均匀一致的胶乳颗粒。速率的峰值通过电脑处理系统转

35、换成待测抗原的浓度。（二）ARRAY分析系统此外，试剂需要加保护剂以提高其稳定性，所用器皿要洁净，避免杂质微粒的干扰。高亲和力的抗体，并保证抗体过量。自动化免疫比浊分析仪器的问世解决了以上的诸多问题。此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。Array360、IMMAGE特种蛋白分析分析系统离子强度 PBS是较好的反应液。第二节 自动化免疫比浊分析透射浊度法和散射浊度法的光路该法是抗原抗体结合反应的一种动态测定方法。离子强度 PBS是较好的反应液。散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。测定的时间依然较长，且随时

36、间延长，抗原抗体复合物有重新结合的趋势，可影响散射值的变化及存在反应本底，在微量测定时，本底的干扰是影响测定准确性的重要因素。一、主流免疫比浊设备概况该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测标本数十份；此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。胶乳颗粒的均一性将直接影响光散射作用，影响检测结果，因此需要选择均匀一致的胶乳颗粒。第一节 免疫比浊技术原理另外，要注意保证抗原浓度合适。第二节 自动化免疫比浊分析高亲和力的抗体，并保证抗体过量。待测的抗原抗体复合物分子量足够大。其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物的

37、大小和多少密切相关。离子强度 PBS是较好的反应液。（turbidimetric immunoassay）该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测标本数十份；（turbidimetric immunoassay）自动化免疫比浊分析仪器的问世解决了以上的诸多问题。一、主流免疫比浊设备概况自动化免疫比浊分析仪器的问世解决了以上的诸多问题。2抗体的纯度与效价 诊断试剂应尽可能选择高纯度与高效价的抗体。散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗原

38、的浓度。第一节 免疫比浊技术原理二、免疫比浊分析的主要影响因素4增聚剂 利用增聚剂破坏抗原抗体的水化层，促进反应的进行。高亲和力的抗体，并保证抗体过量。3免疫复合物的大小及稳定性 溶液中免疫复合物颗粒的分散度尽可能相同，颗粒应该不容易相互聚集。可以实现自动化管理，但用于免疫沉淀反应有很多缺陷，如因为是一次性测定光吸收值，没有考虑单个待测样本的散射效果，可能使测定结果不准确。另外，要注意保证抗原浓度合适。一、主流免疫比浊设备概况该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种改良。（nephelometry immunoassay）4增聚剂 利用增聚剂破坏抗原抗体的水化层，促进反应的进行。2抗体的纯度与效

39、价 诊断试剂应尽可能选择高纯度与高效价的抗体。测定的时间依然较长，且随时间延长，抗原抗体复合物有重新结合的趋势，可影响散射值的变化及存在反应本底，在微量测定时，本底的干扰是影响测定准确性的重要因素。该法具有快速、敏感度及精密度高的特点，其最大优点在于快速，检测不必等到抗原抗体达到平衡，大大节省反应时间，每小时可检测标本数十份；高亲和力的抗体，并保证抗体过量。离子强度 PBS是较好的反应液。将抗原抗体的沉淀反应与散射比浊分析相结合，对单位时间内抗原和抗体结合形成复合物的速度进行动力学测定即为速率免疫比浊法。该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复合物对结果影响也小，因此结果稳定、可靠，特异性好，精确度

40、高，且不需要特殊的仪器设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均可使用。当抗体的浓度固定于一定范围时，速度峰值的高低与抗原的含量成正比，随着时间的延长，免疫复合物的量逐渐增多，抗原抗体结合速度的峰值在一定的时间出现。抗原抗体复合物数量足够多。测定的时间依然较长，且随时间延长，抗原抗体复合物有重新结合的趋势，可影响散射值的变化及存在反应本底，在微量测定时，本底的干扰是影响测定准确性的重要因素。单个胶乳颗粒在入射光波长之内并不阻碍光线透过，两个及其两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过的光减少，其减少的程度与胶乳颗粒凝聚的程度呈正比，即与待测抗原量呈正比，由此可检测样本中的特定抗原含量。此外，试剂需要加保护剂以提高其稳定性，所用器皿要洁净，避免杂质微粒的干扰。自动化免疫比浊分析仪器的问世解决了以上的诸多问题。目前，透射免疫比浊法和散射免疫比浊等方法已目前，透射免疫比浊法和散射免疫比浊等方法已常规运用于临床特定体液蛋白质的检测，相关仪器已常规运用于临床特定体液蛋白质的检测，相关仪器已广泛应用于国内各级医院，成为临床免疫检测的重要广泛应用于国内各级医院，成为临床免疫检测的重要手段之一。手段之一。返回章目录返回章目录雅安职业技术学院雅安职业技术学院