性病实验室检方法课件.ppt
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1、资料仅供参考,不当之处,请联系改正。1.有实验室负责人,实验人员分工明确2.实验室人员应该定期参加培训、进修或专业研讨会3.有实验室各项管理制度4.制定常规实验室标准操作程序(SOP)性病实验室的组织管理性病实验室的组织管理资料仅供参考,不当之处,请联系改正。性病实验室质量管理性病实验室质量管理n1仪器、设备 实验室所有使用仪器应有使用、保养及维修记录有温控的仪器需每天记录温度n2培养基及试剂 严格按配方及技术要求配制培养基及试剂 对配制的培养基及试剂应有质检 购买的试剂盒应为经国家有关部门检验 合格的产品(附有关证明)所有培养基及试剂的保存都应符合要求2资料仅供参考,不当之处,请联系改正。性
2、病实验室质量管理性病实验室质量管理3质控(1)实验室开展室内质控,包括使用阳性 对照和阴性对照质控品(2)定期进行室间质控和参加外部质控3资料仅供参考,不当之处,请联系改正。性病实验室诊断技术性病实验室诊断技术 性病是一组传染病,主要通过性的接触传染。包括细菌、真菌、病毒、衣原体、支原体、螺 旋体、原虫和寄生虫等 性病实验室诊断有着及其重要的作用 正确诊断提供科学依据4资料仅供参考,不当之处,请联系改正。病原体病原体淋球菌梅毒螺旋体生殖器疱疹病毒生殖道沙眼衣原体乳头瘤病毒HIV病毒杜克雷噬血杆菌衣原体念珠菌滴虫疥虫阴虱肝炎病毒病病 种种淋病梅毒:生殖器疱疹:生殖道沙眼衣原体感染:尖锐湿疣:HI
3、V感染/艾滋病:软下疳:性病性淋巴肉芽肿:念珠菌性阴道炎:滴虫性阴道病:疥疮:阴虱病:肝炎(乙、丙):性传播疾病性传播疾病(STD)/(STD)/性传播感染性传播感染(STI)(STI)资料仅供参考,不当之处,请联系改正。主要常见性病实验室检测介绍主要常见性病实验室检测介绍n梅毒梅毒n淋病n生殖道沙眼衣原体感染资料仅供参考,不当之处,请联系改正。常用梅毒检测方法常用梅毒检测方法n病原学检测病原学检测n血清学检测血清学检测资料仅供参考,不当之处,请联系改正。病原学检查病原学检查n原理:一期、二期梅毒时,取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液,在暗视野显微镜下,光线从
4、聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光,从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。n方法:病原学检查的主要方法有暗视野显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法资料仅供参考,不当之处,请联系改正。暗视野显微镜检查暗视野显微镜检查标本采集部位:标本采集部位:一期或二期梅毒的皮肤或粘膜损害一期或二期梅毒的皮肤或粘膜损害 有痂者去痂,先用无菌棉球或纱布蘸生理盐水,将皮损拭净,轻压皮有痂者去痂,先用无菌棉球或纱布蘸生理盐水,将皮损拭净,轻压皮损至渗液(避免出血)。然后用载玻片印取渗液,立即检查,未破损至渗液(避免出血)。然后用载玻片印取渗液,立即检查,未破溃者用手术刀刮破皮疹,取渗出液。溃者用手术刀刮破
5、皮疹,取渗出液。淋巴结穿刺液淋巴结穿刺液 以无菌操作法用注射器吸取以无菌操作法用注射器吸取0.3-0.50.3-0.5mlml生理盐水,穿刺入淋巴结,再生理盐水,穿刺入淋巴结,再回吸数次,最后将吸取液涂玻片上,立即检查。回吸数次,最后将吸取液涂玻片上,立即检查。资料仅供参考,不当之处,请联系改正。暗视野显微镜检查暗视野显微镜检查n制片制片n标本置于载玻片上,加一滴生理盐水,盖上盖标本置于载玻片上,加一滴生理盐水,盖上盖玻片,在玻片,在暗室中暗室中于暗视野显微镜上油镜观察于暗视野显微镜上油镜观察n观察观察n先用低倍镜,再转至高倍镜先用低倍镜,再转至高倍镜n梅毒螺旋体在暗背景上呈白色发光,螺旋整齐
6、,梅毒螺旋体在暗背景上呈白色发光,螺旋整齐,运动规律(运动规律(旋转、伸缩或蛇行旋转、伸缩或蛇行运动)运动)资料仅供参考,不当之处,请联系改正。梅毒螺旋体特征梅毒螺旋体特征n螺旋整齐,数目固定螺旋整齐,数目固定n折光性强,较其他螺旋体亮折光性强,较其他螺旋体亮n运动缓慢而有规律,有三种运动方式运动缓慢而有规律,有三种运动方式n围绕其长轴旋转运动围绕其长轴旋转运动n伸缩其螺旋间距离移动伸缩其螺旋间距离移动n弯曲扭动如蛇行弯曲扭动如蛇行资料仅供参考,不当之处,请联系改正。病原学检查的临床意义病原学检查的临床意义n病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体,在临床可确诊梅毒,且具有快速、方便、易操作的特点。n螺
7、旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法,对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。n如未见到梅毒螺旋体,并不能排除患梅毒的可能性资料仅供参考,不当之处,请联系改正。暗视野显微镜检查暗视野显微镜检查n结果解释阴性结果不能排除梅毒,可能是:阴性结果不能排除梅毒,可能是:螺旋体数量不足螺旋体数量不足已用过抗生素或某些外用药已用过抗生素或某些外用药 损害接近自然消退损害接近自然消退资料仅供参考,不当之处,请联系改正。非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒血清学检测方法梅毒血清学检测方法14资料仅供参考,不当之处,请联系
8、改正。梅毒实验室操作要求梅毒实验室操作要求梅毒血清学试验操作和结果分析梅毒血清学试验操作和结果分析标本的采集和分离标本的采集和分离编号或姓名登记编号或姓名登记采血、分离血清和贮存采血、分离血清和贮存15资料仅供参考,不当之处,请联系改正。梅毒实验室操作要求梅毒实验室操作要求试剂准备试剂准备温度、器具的校正温度、器具的校正试剂、血清和反应板恢复到试验温度试剂、血清和反应板恢复到试验温度试剂鉴定试剂鉴定16资料仅供参考,不当之处,请联系改正。梅毒实验室操作要求梅毒实验室操作要求试验操作试验操作血清量的控制血清量的控制试剂量的控制试剂量的控制旋转仪速度和时间的控制旋转仪速度和时间的控制17资料仅供参
9、考,不当之处,请联系改正。非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验1、原理:梅毒螺旋体感染人体后,宿主会产生抗类脂抗原的抗体,可检测梅毒患者血中的抗类脂抗原的抗体 2、方法:n 快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)n 甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)n 性病研究实验室试验(VDRL)资料仅供参考,不当之处,请联系改正。RPR定性试验在纸卡圆圈中加入50L待检血清,涂满整待检血清,涂满整个圆圈个圆圈使用滴管和专用针头(60滴滴/mL),加),加1滴抗原悬液滴抗原悬液旋转100rpm8min立即判断结果资料仅供参考,不当之处,请联系改正。RPR定量试验待检血清用等渗盐水在纸卡圆圈中作6
10、个个稀释度:原血清,稀释度:原血清,1:2,1:4,1:8,1:16,1:32按定性试验步骤操作,以出现阳性反应的最高稀释度报告结果资料仅供参考,不当之处,请联系改正。RPR定量试验定量试验n中等至大的凝块为阳性(圈4和7)有明确但很小的凝块为弱阳性(圈2和3)颗粒均匀分布(圈1,5,8-10)或稍粗糙(圈6)为阴性资料仅供参考,不当之处,请联系改正。非梅毒螺旋体抗原血清试验的优缺点非梅毒螺旋体抗原血清试验的优缺点:优点:*敏感性特异性好敏感性特异性好 *不需要昂贵设备,简单易行不需要昂贵设备,简单易行 *适用于大量人群的血清筛查适用于大量人群的血清筛查 *有效治疗后血清滴度可下降并阴转,故可
11、作疗效观察、有效治疗后血清滴度可下降并阴转,故可作疗效观察、判愈、复发。判愈、复发。*20分钟可获得实验结果。分钟可获得实验结果。*试剂与方法均已标化,各实验室间结果可比较。试剂与方法均已标化,各实验室间结果可比较。*试验可被内部质控和外部质控监控进行。试验可被内部质控和外部质控监控进行。缺点:缺点:*敏感性和特异性低于螺旋体抗原试验,敏感性和特异性低于螺旋体抗原试验,BFP反应和前带反应和前带现象现象 资料仅供参考,不当之处,请联系改正。非特异性血清试验的假阴性:非特异性血清试验的假阴性:1)有)有25%40%的未治梅毒在晚期隐性期可自然逆转的未治梅毒在晚期隐性期可自然逆转为阴性,约为阴性,
12、约30%的心血管和神经梅毒呈阴性。的心血管和神经梅毒呈阴性。2)前带现象()前带现象(the prozonphenomenon),即为抗即为抗原抗体量比例不适,抑制阳性反应。一般易发生在滴原抗体量比例不适,抑制阳性反应。一般易发生在滴度在度在1:500以上的标本中。以上的标本中。1%的的II期梅毒会出现前期梅毒会出现前带现象。带现象。3)操作人员应注意实验的温度,试剂盒从冰箱取出)操作人员应注意实验的温度,试剂盒从冰箱取出后应恢复至室温,室温过低(后应恢复至室温,室温过低(10)可能出现假阴)可能出现假阴性或结果不准确。性或结果不准确。资料仅供参考,不当之处,请联系改正。非特异性血清试验生物学
13、假阳性非特异性血清试验生物学假阳性 0.25%0.86%阳性标本为生物学假阳性,主要出现阳性标本为生物学假阳性,主要出现在自身免疫疾病(所有在自身免疫疾病(所有BFP反应的反应的14%)的患者、其它)的患者、其它病原体感染(病毒性肺炎、恶性肿瘤和麻风)、妊娠病原体感染(病毒性肺炎、恶性肿瘤和麻风)、妊娠妇女。妇女。应排除技术性、生理性和生物学假阳性,并用特应排除技术性、生理性和生物学假阳性,并用特异性试验来证实。异性试验来证实。资料仅供参考,不当之处,请联系改正。非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义n非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于
14、大量人群的筛查。n早期梅毒硬下疳出现1周-2周后,血清可呈阳性。n经治疗后血清滴度可下降并阴性,故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。资料仅供参考,不当之处,请联系改正。梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验1 1、原理:原理:用梅毒螺旋体特异蛋白为抗原,检测梅毒患者血中用梅毒螺旋体特异蛋白为抗原,检测梅毒患者血中 特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体 2 2、方法:方法:n 梅毒螺旋体颗粒凝集试验梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)(TPPA)n 梅毒螺旋体血球凝集试验梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA)(TPHA)n 梅毒酶联免疫吸附试验(梅毒酶联免疫吸附试验
15、(ELISAELISA)n 梅毒免疫层析法梅毒免疫层析法-梅毒快速检测梅毒快速检测(RT)(RT)n 荧光螺旋体抗体吸收试验(荧光螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABSFTA-ABS)n 化学发光免疫分析法(化学发光免疫分析法(CLIACLIA)n 梅毒梅毒IgMIgM抗体检测(抗体检测(IgMIgM)n 梅毒螺旋体蛋白印迹试验(梅毒螺旋体蛋白印迹试验(WBWB)资料仅供参考,不当之处,请联系改正。梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验原理:用经纯化及超声裂解处理的梅毒螺原理:用经纯化及超声裂解处理的梅毒螺旋体为抗原,或重组抗原包被固相,检旋体为抗原,或重组抗原包被固相,检测特异性梅
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