临床病原学检查课件.ppt

1、2临床病原体检查目的临床病原体检查目的 临床病原体检查目的临床病原体检查目的:是确定感染的发生和性质，在疾病早期提是确定感染的发生和性质，在疾病早期提供恰当的治疗方案，并采取有效的预防措供恰当的治疗方案，并采取有效的预防措施，防止感染传播造成的危害。施，防止感染传播造成的危害。各种不同病原体的实验诊断方法遵各种不同病原体的实验诊断方法遵循以下基本原则循以下基本原则1.正确、规范采集和运送标本。2.直接显微镜查见病原体或检出病原体抗原，借助分子生物学的方法检测病原体核酸，结合病人的病史、症状或体征，快速作出初步诊断。3.初步诊断同时，对病原体进行分离与鉴定。4.检测机体对病原体的免疫产物。5.参

2、与临床选择抗菌药物，指导和监控微生物的治疗方案，避免 耐药菌株的产生。病原学诊断细菌学诊断病毒学诊断真菌学诊断 5直接涂片直接涂片染色镜检染色镜检分离培养分离培养形态特征形态特征生化试验生化试验血清学试验血清学试验动物实验动物实验明明确确诊诊断断初步诊断初步诊断血清学诊断血清学诊断细菌的快速鉴定细菌的快速鉴定形态学检查形态学检查（常规培养或特殊培养）（凝集试验、（凝集试验、沉淀反应、免疫标记技术等）沉淀反应、免疫标记技术等）(微生物数字编码分类鉴定法、血培养自动化检测系统、核微生物数字编码分类鉴定法、血培养自动化检测系统、核酸杂交技术、技术、芯片技术等）酸杂交技术、技术、芯片技术等）药药物物敏

3、敏感感试试验验细菌感染检查检验特点通过对标本直接显微镜检，病原菌的分离培养鉴定，病原菌的抗原检测，核酸检测和细菌感染后机体免疫应答产物的测定及药物的测定及药物敏感性试验，对细菌感染性疾病可作出及时、准确的病原学诊断。7 革兰阳性菌革兰阳性菌(Gram positive bacteria)(Gram positive bacteria)革兰阴性菌革兰阴性菌(Gram negative bacteria)(Gram negative bacteria)涂片涂片结晶紫结晶紫 染色染色碘液碘液媒染媒染酒精酒精脱色脱色复红复红复染复染革兰染色法（革兰染色法（）由丹麦医生由丹麦医生 于于18841884年

4、创立。年创立。1.1.步骤步骤9直接涂片染色镜检适用于具有特征性形态和染色性的病原菌,如葡萄球菌、脑膜炎奈瑟菌、抗酸染色阳性的结核分枝杆菌等。大多数细菌的形态与染色并无显著特异性，因此需要分离培养。如肠道杆菌均为杆菌，菌落形态亦相同。培养特征：化脓性链球菌小而透明、溶血环。分离培养 生化试验：如肠道杆菌进行乳糖发酵试验。血清学试验：已知抗体测抗原或已知抗原测病人血清中相应的抗体。如玻片凝集，鉴定菌种和型。动物试验：测定细菌的毒力、病原菌的分离和鉴定。分离培养血清学诊断血清学诊断原理：已知抗体测未知抗原进行病原菌的鉴定或用已知抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染

5、病的辅助诊断。标本：双份血清标本，恢复期血清抗体效价比急性期升高4倍者方有意义。单份血清效价超过一定标准才有诊断意义。种类：凝集试验、沉淀试验、中和试验、补体结合试验。常用的血清学诊断方法 玻片凝集试验玻片凝集试验试管凝集试验试管凝集试验酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验细菌的快速鉴定细菌数值鉴定系统细菌数值鉴定系统技术姬姆萨染色衣原体包涵体病毒被支原体感染的精子梅毒螺旋体1920病毒感染的微生物学检查法 病毒感染的微生物学检查法23 :病毒的数量与感染性测定蚀斑测定：准确滴定病毒感染性的方法蚀斑（）每个蚀斑是由一个有感染性病毒颗粒形成，称为蚀斑形成单位（，）。病毒的感染量用表示50%感染量（5

6、0）或50%组织细胞感染量（50）不能准确地测定感染性病毒颗粒的数量乙型肝炎的病原学乙型肝炎的病原学诊诊断断 病毒性肝炎病毒性肝炎 肠道传播肠道传播肠道外传播肠道外传播F,F,?其他其他病毒性肝炎病毒性肝炎-背景背景 传染源粪便血液/血源性物质/体液血液/血源性物质/体液血液/血源性物质/体液粪便传播途径粪-口经皮肤/经粘膜经皮肤/经粘膜经皮肤/经粘膜粪-口慢性感染否是是是否病毒性肝炎类型病毒性肝炎类型ABCDE基因组类型 B 乙型肝炎的病原体乙型肝炎的病原体 在全世界广泛流行，估计全球半数以上人在全世界广泛流行，估计全球半数以上人口已被感染过，口已被感染过，5%5%的人口为慢性感染的人口为慢

7、性感染 中国：乙肝高发区，人群的检出率达中国：乙肝高发区，人群的检出率达9.8%9.8%.3200 :B :B :B :B :B :B e :B e 抗原抗原组组成成 位于病毒表面，是一种糖蛋白位于病毒表面，是一种糖蛋白 4种亚型种亚型()欧美国家欧美国家:我国汉族我国汉族:我国少数民族我国少数民族:判断感染的指标之一判断感染的指标之一 刺激机体产生保护性抗体即抗刺激机体产生保护性抗体即抗抗原抗原组组成成 位于颗粒核心部分和肝细胞核内，在血清位于颗粒核心部分和肝细胞核内，在血清中不易检出游离的中不易检出游离的 主要成分是蛋白质主要成分是蛋白质 刺激机体产生抗刺激机体产生抗(非保护性抗体非保护性

8、抗体)在乙肝急性期、恢复期和携带者中常可检在乙肝急性期、恢复期和携带者中常可检出抗出抗 抗抗 常提示病毒处于复制状态常提示病毒处于复制状态抗原抗原组组成成 位于的核心位于的核心,是一种可溶性蛋白抗原是一种可溶性蛋白抗原 和颗粒出现相平行，且与多聚酶在血中的消长动态相符合和颗粒出现相平行，且与多聚酶在血中的消长动态相符合 血中的出现可作为复制及血清有感染性的指标血中的出现可作为复制及血清有感染性的指标 刺激机体产生抗刺激机体产生抗 抗能与受染肝细胞表面的抗能与受染肝细胞表面的e e抗原结合抗原结合,通过补体介导破坏受通过补体介导破坏受染的肝细胞染的肝细胞,抗的出现是预后良好的征象抗的出现是预后良

9、好的征象抗原抗原组组成成 抗原抗原 位于的外衣壳上，有两种位于的外衣壳上，有两种 刺激机体产生抗刺激机体产生抗1和抗和抗2，能阻断与肝细胞受体结，能阻断与肝细胞受体结合，从而起到抵抗病毒的作用合，从而起到抵抗病毒的作用 抗抗1和抗和抗2的出现，表示病情好转，趋向痊愈的出现，表示病情好转，趋向痊愈传传染源染源 患者患者 潜伏期潜伏期 急性期急性期 慢性期慢性期 无症状携无症状携带带者者 各种体液中的各种体液中的浓浓度度 血源性传播 输血、注射、外科和牙科手术、针刺等 剃刀、牙刷和蚊虫叮咬等 母婴垂直传播 宫内传播 分娩时微小皮损处传播 产后母婴密切接触 性传播 传播途径传播途径 高高(8%):(

10、8%):占占45%45%一生感染的危险一生感染的危险 60%60%婴幼儿感染常见婴幼儿感染常见 中等中等(2%(2%7%):7%):占占43%43%一生感染的危险是一生感染的危险是 20%20%60%60%感染存在于所有年龄组感染存在于所有年龄组 低低(2%):(2%):占占12%12%一生感染的危险一生感染的危险 20%20%许多感染发生在成人危险组许多感染发生在成人危险组 病原学诊断抗原抗体检测病原学诊断抗原抗体检测 项目：、抗、抗、抗以及抗项目：、抗、抗、抗以及抗 方法方法(，最常用，定性，最常用，定性)发光免疫分析发光免疫分析(定量定量)反相间接血凝试验反相间接血凝试验(少用少用)的基

11、本原理的基本原理 利用抗原和抗体特异性结合利用抗原和抗体特异性结合 主要的试剂主要的试剂 固相抗原或抗体固相抗原或抗体 酶标记的抗原或抗体酶标记的抗原或抗体 酶的底物酶的底物的主要方法的主要方法 间接法间接法:测定抗测定抗 夹心法：测定和夹心法：测定和 竞争法：测定抗竞争法：测定抗 中和法：测定抗中和法：测定抗 捕捉法：测定抗捕捉法：测定抗 病原学诊断病原学诊断(二二)核酸检测核酸检测 核酸杂交核酸杂交 探针探针 引物引物 感染的标志感染的标志 既往感染既往感染/接种疫苗接种疫苗 急性感染标志急性感染标志 既往或慢性感染既往或慢性感染 急性病毒复制，有传染性急性病毒复制，有传染性 病毒不再复制

12、病毒不再复制 急性病毒复制，比更准确；主要用于监测治疗急性病毒复制，比更准确；主要用于监测治疗反应反应血清学血清学检测检测的的临临床意床意义义 抗抗 抗抗 抗抗 临临床意床意义义急性或慢性感染急性或慢性感染(大三阳大三阳)+-+-+乙肝后期或慢性感染乙肝后期或慢性感染(小三阳小三阳)-+-潜伏期或急性乙肝早期潜伏期或急性乙肝早期-+痊愈或恢复期痊愈或恢复期,有免疫力有免疫力-+-痊愈痊愈,有免疫力有免疫力疫苗接种或曾疫苗接种或曾经经感染感染过过,有免疫力有免疫力 0481216202428323652100 (6)()048 12 16 20 24 28 32 3652 真菌感染检查检验特点 形态学检查为检测真菌的重要手段 抗原检测适合血清和脑脊液中隐球菌、念珠菌、夹膜组织胞浆菌。血清学诊断适用于深部真菌感染。52 菌丝、孢子53小结 细菌感染的微生物学检查法病原体检查 核酸的检测 抗原、抗体的检测 病毒感染的微生物学检查法电镜及免疫电镜 病毒的分离培养和鉴定 核酸的检测 抗原、抗体的检测 真菌感染的微生物学检查法直接镜检 真菌的分离培养