临床微生物室标本处理及操作流程课件.ppt

1、临床微生物室标本处理及检验流程临床微生物室标本处理及检验流程临床微生物室标本处理及检验流程InfectionControlTeamThe Role of the Clinical Bacteriology LabI n f e c t i o n C o n t r o l T e a mT h e R o l e o临床微生物检验流程示意分析前门诊病房诊所不合格临床标本留取SOP环节二环节三环节一+SOP运送合格IQ标本合格判定培养基、冰箱温箱、气体标本合格？接种EQA标本实验室实验室直接检测环节四培养检测报告环节五分析中仪器设备、试剂环节六分析后对每个环节进行控制，构成质量保证体系临床微生

2、物检验流程示意分析前门诊病房诊所不合格临床标本留取S内 容标本处理微生物鉴定药敏试验内容标本处理微生物鉴定药敏试验标本处理?血培养?脑脊液培养?呼吸道标本(痰标本、咽部标本）?尿培养?生殖道标本培养?抽吸物和组织标本的培养（需氧、厌氧培养）?粪便培养标本处理?血培养?脑脊液培养?呼吸道标本(痰标本、咽部标本）血培养血培养Blood Culture 血培养B l o o d C u l t u r e 临床微生物室标本处理及操作流程课件脑脊液脑脊液CEREBROSPINAL FLUID脑脊液C E R E B R O S P I N A L F L U I D临床微生物室标本处理及操作流程课件严

3、格无菌操作严格无菌操作soap严格无菌操作s o a p脑脊液CEREBROSPINAL FLUID无菌操作，腰椎穿刺采样最少1 mL，最好5 mL打入3个小管中，以第二根小管送检培养分枝杆菌培养标本需要 2 mL以上，置于4保存即时送检绝对不能冷藏！脑脊液C E R E B R O S P I N A L F L U I D 无菌操作，腰椎穿临床微生物室标本处理及操作流程课件如何看待CSF的培养结果？（1）如果同期送检的血培养大于3天报警，通常不是很紧急（2）假如仍不确定，电话联系微生物室值日主管，了解革兰氏染色涂片的相关情况。（3）必须综合生化和血液学结果（4）如果CSF常规检查报告中没有

4、中性粒细胞或脑脊液的其他指标正常，对报告的致病菌应保持怀疑，可能送检污染。如何看待C S F 的培养结果？（1）如果同期送检的血培养大于3 天呼吸道标本呼吸道标本Respiratory Cultures呼吸道标本R e s p i r a t o r y C u l t u r e s上呼吸道标本上呼吸道标本Upper Respiratory Tract Specimens上呼吸道标本U p p e r R e s p i r a t o r y T r a c t 临床微生物室标本处理及操作流程课件下呼吸道标本下呼吸道标本Lower Respiratory Tract Specimens下呼

5、吸道标本L o w e r R e s p i r a t o r y T r a c t 下呼吸道感染Lower Respiratory Tract Infections?急性支气管炎社区获得性肺炎院内获得性肺炎免疫妥协患者肺炎下呼吸道感染L o w e r R e s p i r a t o r y T r a c t 下呼吸道标本Lower Respiratory Tract Specimen自然咳痰诱导痰气管内吸取物肺部组织支气管肺泡灌洗液保护性毛刷支气管灌洗液下呼吸道标本L o w e r R e s p i r a t o r y T r a c t 标本质量脓痰粘液样痰唾液or诱

6、导痰(?)带血痰标本质量脓痰粘液样痰唾液o r 诱导痰(?)带血痰用革兰氏染色来评估呼吸道标本是否合格用革兰氏染色来评估呼吸道标本是否合格痰标本10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收痰标本 1 0 鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收有PMN的痰标本，中性粒细胞多，且鳞状上皮细胞特别少=接受，进行培养粘液丝有P MN 的痰标本，中性粒细胞多，且鳞状上皮细胞特别少=接受，胞内细菌 提示感染提示感染细胞内细菌胞内细菌提示感染细胞内细菌柱状纤毛上皮细胞肺泡巨噬细胞柱状纤毛上皮细胞肺泡巨噬细胞滑石颗粒滑石颗粒滑石颗粒见于迁延长时间的呼吸道疾病淀粉样小体见于迁延长时间的呼吸道疾病淀粉样小体弹性纤维弹性纤维弹性纤维

7、库什曼螺旋体库什曼螺旋体库什曼螺旋体呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上皮细胞提示混合厌氧菌感染呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上皮细胞提示几种细菌的混合形态，缺乏鳞状上皮细胞=混合厌氧菌感染。如果是呼吸道标本可能是吸入性肺炎。报告临床医生如果是呼吸道标本可能是吸入性肺炎。报告临床医生“提示提示吸入性肺炎吸入性肺炎”你看见多少种形态？几种细菌的混合形态，缺乏鳞状上皮细胞=混合厌氧菌感染。如果是呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸杆菌呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸杆菌呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？肺中的结节吸出物，不规则肺中的结节吸出

8、物，不规则“球菌球菌”，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都证明是分枝状的革兰阳性杆菌，可能是放线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织的标本）呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？肺中的结节吸出物很少的鳞状上皮细胞10个/低倍视野评述可以在玻片上看到许多鳞状上皮细胞，说明在采集时受到了上呼吸道分泌物的污染或口水的污染。很多的中性粒细胞很少有或没有中性粒细胞免疫抑制的病人也会出现中性粒细胞减少中性粒细胞和上皮细胞都很少的标本需要培养很多中性粒细胞混合有形态多样的细菌（革兰氏阴性杆菌，纺锤形，革兰氏阳性球菌）许多或中等量的中性粒细胞，以一种形态的细菌为主酵母菌样，

9、酵母菌是一种很少引起肺炎的细菌，常由口腔污染吸入性肺炎标本革兰氏染色的典型形式，培养只会培养出正常菌群，所以革兰氏染色是用于诊断的方法。成双革兰氏阳性球菌，短链=肺炎链球菌革兰氏阳性菌成群排列=金黄色葡萄球菌革兰氏阴性球杆菌（小）=流感嗜血杆菌革兰氏阴性杆菌大且肥厚=肺炎克雷伯菌或其他肠道菌革兰氏阴性双球菌=卡他莫拉菌可能是肺结核，抗酸杆菌不能被革兰氏染色所染色。许多不着色的有折射的杆状细菌很少的鳞状上皮细胞 105CFU/ml 105CFU/ml24小时后仍不生长则发出最终的生长阴性报告纯培养的机会致病菌（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）?1 organism?一种以上细菌生长三种或以上的机会

10、致病菌包括酵母菌ID&Suscept.鉴定&药敏多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清洁标本多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清洁标本)1-2种机会致病菌（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）若为腐生葡萄球菌，则处理与其他致病菌相同；其他的凝固酶阴性葡萄球菌则视为污染进行鉴定和药敏，若数量 104CFU/ml 104CFU/ml24小时后仍不生长则发出最终的生长阴性报告纯培养的机会致病菌（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）一种以上细菌生长检出三种或以上的机会致病菌包括酵母菌（病人的首份尿标本显示如此的培养结果，若重复的尿标本仍然培养出相同的细菌，则需要对菌株进行操作）鉴定&药敏多种肠道细菌或混杂的

11、皮肤菌丛；重新采集清洁标本1-2种机会致病菌（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的以上相同注释多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清洁标本.进行鉴定和药敏，若数量+PRO +WBC +PRO +WBC +PRO +WBC +*/PRO 尿培养结果计数 105计数 105培养出一种致病菌计数 105培养出大于两种致病菌计数 105培养出大于两种致病菌出现如下情况时，怎样判断？尿常规结果WB C P R O 生殖道标本生殖道标本Lower Genital Tract Specimens 生殖道标本L o w e r G e n i t a l T r a c t S p e c i女性生殖道标本送检女性生殖

12、道标本送检女性生殖道标本送检女性下生殖道标本采集宫颈或宫颈内部：淋病奈瑟菌，沙眼衣原体，人乳头瘤病毒肛门或直肠拭子：淋病奈瑟菌，B群链球菌（+阴道拭子）阴道高位拭子：酵母菌，阴道毛滴虫，细菌性阴道感染女性下生殖道标本采集宫颈或宫颈内部：淋病奈瑟菌，沙眼衣原体，早发B群链球菌病1%的新生儿因母亲定植（10-30%的孕妇）发展为EOD50%病死率25%的美国女性在L&D期间得到IV预防长期病症包括：在30%以上的新生儿中产生严重精神运动发展障碍Adriaanse et al.Neonatal early onset group B streptococcal infection:a nine-ye

13、ar retrospective study in a tertiary care hospital.J Perinat Med.2019;24:531538早发B 群链球菌病1%的新生儿因母亲定植（1 0-3 0%的孕妇）1.在孕期3537周时的普查培养a.b.c.d.阴道和直肠拭子肉汤过夜增菌接种于血平板上再孵育过夜和鉴定可疑菌落2.3.任何有GBS菌尿的患者需要在分娩期做好预防分娩时快速检测敏感性不够1.在孕期3 5 3 7 周时的普查培养a.b.c.d.阴道和直肠男性生殖道标本送检男性生殖道标本送检男性生殖道标本送检?男性的生殖道致病菌与女性绝大部分一致；?尿道炎通常由淋病奈瑟氏菌或非

14、淋病奈瑟氏菌引起；?可能并发于生殖器溃疡；?男性的生殖道致病菌与女性绝大部分一致；?尿道炎通常由淋病奈淋病奈瑟氏菌感染?挤压尿道或直接获取尿道口分泌物；?直接涂片?如果培养，须直接接种温暖的筛选性平板，保温并即刻送微生物室培养。淋病奈瑟氏菌感染?挤压尿道或直接获取尿道口分泌物；?直接涂片任何不能及时送检的生殖道标本，都应采用运送培养基采样保存。?禁止冷藏任何不能及时送检的生殖道标本，都应采用运送培养基采样保存。?临床微生物室标本处理及操作流程课件伤口、皮肤、组织伤口、皮肤、组织Wound、Skin、Tissue伤口、皮肤、组织Wo u n d、S k i n、T i s s u e标本采样和送

15、检?临床常常送检脓液和渗出液的拭子给实验室做检查。风险?标本不足量?拭子干燥?拭子吸附细菌，难于释放到平板培养?尽可能抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样深部伤口和特殊原因造成的伤口，如动物咬伤，应考虑厌氧培养；标本采样和送检?临床常常送检脓液和渗出液的拭子给实验室做检查临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件组织和抽吸物涂片检查发现出现鳞状上皮细胞大量的中性粒细胞大量的中性粒细胞染色多样染色阳性和阴性，小的细菌出现少量破碎的中性粒细胞和比较大的面包车样的染色不定的杆菌很少有中性粒细胞，但是有其他体细胞评述提示标本采集技术不过关；培养出来的可能是皮肤正常菌群如果查

16、见细胞内的细菌，则更有意义。混合有厌氧或兼性厌氧菌感染可能是梭菌引起的组织坏死，紧急外科手术，产气荚膜梭菌引起的气性坏疽患者不能产生足够的免疫反应或微生物不能趋化中性粒细胞（如球菌）。仍然高度怀疑细菌病因。细菌感染如果分离自脓肿，提示咽峡炎链球菌（米勒链球菌）感染。细胞内微生物成块的小的灰白的染色不规则的阳性成链的球菌很细小的革兰氏阴性杆菌特别是从淋巴结或组织中分离的，可能是生物恐怖试剂（布鲁氏杆菌，耶尔森，弗朗西斯）要在风厨中操作。平板用胶条密封在生物安全柜中操作，不可以嗅标本。组织和抽吸物涂片检查发现出现鳞状上皮细胞大量的中性粒细胞大量胃肠道标本（略）胃肠道标本（略）胃肠道标本（略）临床微

17、生物室标本处理及操作流程课件微生物鉴定微生物鉴定微生物鉴定微生物鉴定（1）?血平皿上的菌落形态革兰阳性细菌所有的链球菌-溶血链球菌-溶血链球菌与肺炎链球菌葡萄球菌属肠道革兰阴性杆菌沙门菌属，志贺菌属假单胞菌属嗜血杆菌属微生物鉴定（1）?血平皿上的菌落形态革兰阳临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件

18、微生物鉴定（2）?奈瑟菌属、莫拉菌属?不动杆菌属?布氏杆菌属、巴斯德菌属?芽胞杆菌属?产单核李斯特菌?酵母菌属微生物鉴定（2）?奈瑟菌属、莫拉菌属?不动杆菌属?布氏杆菌属临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件药敏试验?纸片扩散法药敏试验?特殊药敏试验MRSA克林霉素耐药的葡萄球菌VISA或VRSA青霉素耐药的葡萄球菌超广谱-内酰胺酶药敏试验?纸片扩散法药敏试验?特殊药敏试验MR S A 克林霉素耐

19、临床微生物室标本处理及操作流程课件纸片扩散法-测量抑菌圈（1）使用透射光观察：Staphylococcusspp.葡萄球菌属linezolid利奈唑烷oxacillin苯唑西林vancomycin万古霉素任何生长均有意义Enterococcus spp.肠球菌属vancomycin万古霉素Light光线纸片扩散法-测量抑菌圈（1）使用透射光观察：S t a p h y l o纸片扩散法-测量抑菌圈（2）使用反射光观察：所有其他药物/菌株组合Light光线纸片扩散法-测量抑菌圈（2）使用反射光观察：所有其他药物/菌纸片扩散法-测量抑菌圈（3）变形杆菌属变形杆菌属.忽略迁徙性生长纸片扩散法-测量抑

20、菌圈（3）变形杆菌属.忽略迁徙性生长纸片扩散法-测量抑菌圈（4）测量完全抑菌的圈Linezolid利奈唑烷纸片扩散法-测量抑菌圈（4）测量完全抑菌的圈L i n e z o l i纸片扩散法-测量抑菌圈（5）大肠埃希菌混杂有肠球菌；用纯培养重复试验铜绿假单胞菌耐药亚群；测量无菌区域圈内菌落纸片扩散法-测量抑菌圈（5）大肠埃希菌混杂有肠球菌；用纯培养临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件临床微生物室标本处理及操作流程课件致谢：Ms Ellen Jo Baron(Stanford Univ.Dept.Pathology)Ms Janet Hindler(UCLA Medical Center Los Angeles,California)提供提供“临床微生物实验室基本操作流程临床微生物实验室基本操作流程”图片资料。图片资料。致谢：Ms E l l e n J o B a r o n(S t a n f o r d谢谢谢谢!谢谢!