临床基因扩增检验实验室的设置质量管理培训课件.ppt

1、临床基因扩增检验实临床基因扩增检验实验室的设置质量管理验室的设置质量管理题外话：题外话：n不参加实习课不参加实习课？n参加实习课参加实习课？临床基因扩增检验实验室的设置质量管理2对相关管理文件的理解：对相关管理文件的理解：n临床基因扩增检验实验室管理暂行办法临床基因扩增检验实验室管理暂行办法n临床基因扩增检验实验室基本设置标准临床基因扩增检验实验室基本设置标准（第六条）（第六条）n临床基因扩增检验实验室工作规范（第临床基因扩增检验实验室工作规范（第十条、第十三条、第十四条）十条、第十三条、第十四条）n临床实验室必须遵循的管理办法及其它临床实验室必须遵循的管理办法及其它行业标准行业标准临床基因扩

2、增检验实验室的设置质量管理3强调：强调：n污染的控制：预防为主污染的控制：预防为主n质量保证质量保证临床基因扩增检验实验室的设置质量管理4污染的途径：污染的途径：n实验材料实验材料n试剂每一成分试剂每一成分n设备的每一部位设备的每一部位n每一操作步骤每一操作步骤临床基因扩增检验实验室的设置质量管理5污染的判断：污染的判断：n经验：经验：全阳性，全阳性，CTCT值值3535；标准品的；标准品的CTCT值发生波动值发生波动 阴性质控阳性阴性质控阳性 阳性率异常增高阳性率异常增高n轻微污染和非特异性扩增？轻微污染和非特异性扩增？临床基因扩增检验实验室的设置质量管理6污染和非特异性扩增污染和非特异性扩

3、增:n目的基因目的基因n过程控制过程控制n反应体系反应体系（引物、模版、（引物、模版、酶、镁离子、退火、循环）酶、镁离子、退火、循环）n条件优化条件优化临床基因扩增检验实验室的设置质量管理7控制的手段：控制的手段：n工作区的严格划分工作区的严格划分nSOPSOP的制订和严格执行的制订和严格执行n去污染措施的常规采用去污染措施的常规采用临床基因扩增检验实验室的设置质量管理8污染的监测：污染的监测：n阴性质控的设置：阴性质控的设置：阴性血清样本阴性血清样本 以水为模拟标本以水为模拟标本 仅含扩增反应液仅含扩增反应液 （加鉴别实验室是否污染的空白管（加鉴别实验室是否污染的空白管)临床基因扩增检验实验

4、室的设置质量管理9质控品的位置质控品的位置标准品空白标准品空白阳性质控阴性质控阳性质控阴性质控临床样本临床样本标准品标准品空白空白阳性质控临床样本阴性质控阳性质控临床样本阴性质控临床基因扩增检验实验室的设置质量管理10实验室的设置实验室的设置n管理要求：设置标准和工作规范管理要求：设置标准和工作规范n具体落实：实事求是、因地制宜具体落实：实事求是、因地制宜临床基因扩增检验实验室的设置质量管理11设置标准和工作规范设置标准和工作规范 “原则上分为四个分隔的工作区；原则上分为四个分隔的工作区；各区必各区必须有明确的标记须有明确的标记”“每一区域都须有专用的仪器每一区域都须有专用的仪器；不同的工作；

5、不同的工作区应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服区应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服；离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出”“，可在开展临床标本检测前对提取方法进，可在开展临床标本检测前对提取方法进行评价行评价”“，本区如采用副压条件或减压情况下可减，本区如采用副压条件或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前区的可能性。少扩增产物从本区扩散至前区的可能性。临床基因扩增检验实验室的设置质量管理12理想的设置理想的设置缓冲间缓冲间扩增区试剂准备区样本制备区产物分析区空气流向空气流向空气流向缓冲间专用走廊工作流向磁性连锁装置磁性连锁装置临床基因扩增检

6、验实验室的设置质量管理13现实的问题是：现实的问题是：n建筑结构建筑结构n通道、门通道、门n水电供应水电供应n采光、通风采光、通风临床基因扩增检验实验室的设置质量管理14基本的要求基本的要求:n四个区域必须是相互独立的四个区域必须是相互独立的n各区的仪器设备及各种物品必须是专用的各区的仪器设备及各种物品必须是专用的n各区间不能直通，应有缓冲间，供换工作各区间不能直通，应有缓冲间，供换工作服及鞋子用服及鞋子用n产物分析区应安装排风扇或其它抽风装置。产物分析区应安装排风扇或其它抽风装置。临床基因扩增检验实验室的设置质量管理15扩增区试剂准备区样本制备区产物检测区其它实验室走 廊实例：实例：临床基因

7、扩增检验实验室的设置质量管理16其它实验室样本制备区扩增区试剂准备区产品检测区走廊实例：实例：临床基因扩增检验实验室的设置质量管理17实例：实例：产物检测区扩增区样本制备区其它实验室临床基因扩增检验实验室的设置质量管理18休息区试剂准备区扩 增区产物检测区走廊模板加样区实例：实例：样本处理区临床基因扩增检验实验室的设置质量管理19实例：实例：临床基因扩增检验实验室的设置质量管理20小结：小结：n处理原则的核心是通过合理的设置处理原则的核心是通过合理的设置解决好临床解决好临床PCRPCR检测实际运作检测实际运作动态过动态过程程中可能发生的污染的预防问题中可能发生的污染的预防问题n因此，实验室的设

8、计必须充分考虑因此，实验室的设计必须充分考虑到对污染来源和污染途径的预防和到对污染来源和污染途径的预防和控制控制临床基因扩增检验实验室的设置质量管理21实验室各区的功能和配置：实验室各区的功能和配置：22试剂储存和准备区试剂储存和准备区n储存试剂的制备储存试剂的制备n试剂的分装试剂的分装n主反应混合液的制备主反应混合液的制备n冰箱冰箱n混匀器混匀器n微量加样器微量加样器n可移动紫外灯可移动紫外灯n专用工作服和工作鞋专用工作服和工作鞋n消耗品（带滤心吸头、离消耗品（带滤心吸头、离心管、一次性手套等）心管、一次性手套等）n专用办公用品等。专用办公用品等。临床基因扩增检验实验室的设置质量管理23标本

9、制备区：标本制备区：n临床标本的保存临床标本的保存 n核酸提取、储存核酸提取、储存及其及其加入至扩增加入至扩增反应管反应管n测定测定RNARNA时时cDNAcDNA的的合成合成n不得在本区对样不得在本区对样本进行本进行PCRPCR扩增扩增n冰箱冰箱(28(28和和-20-20或或-80)-80)n高速台式冷冻离心机高速台式冷冻离心机n水浴箱和水浴箱和/或加热模块或加热模块n生物安全柜生物安全柜n混匀器混匀器n微量加样器微量加样器n可移动紫外灯可移动紫外灯n专用工作服和工作鞋专用工作服和工作鞋n专用专用消耗品消耗品n专用办公用品等专用办公用品等临床基因扩增检验实验室的设置质量管理24扩增区：扩增

10、区：nDNA DNA 或或cDNAcDNA扩增扩增n已制备的已制备的DNADNA模板和合模板和合成的成的cDNAcDNA的加入的加入n主反应混合液制备成反主反应混合液制备成反应混合液应混合液n如果空间允许的话，模如果空间允许的话，模板的加入也可以在一个板的加入也可以在一个独立的空间内完成独立的空间内完成n核酸扩增仪核酸扩增仪n微量加样器微量加样器(视情况视情况定定)n可移动紫外灯可移动紫外灯n专用工作服和工作鞋专用工作服和工作鞋n专用消耗品专用消耗品n专用办公用品等专用办公用品等临床基因扩增检验实验室的设置质量管理25产物分析区：产物分析区：n扩增片段的测定扩增片段的测定n最主要的扩增产物污最

11、主要的扩增产物污染来源染来源n有可能使用致突变和有可能使用致突变和有毒物质有毒物质n微量加样器微量加样器n可移动紫外灯可移动紫外灯n专用工作服和工作鞋专用工作服和工作鞋n专用消耗品专用消耗品n专用办公用品等专用办公用品等临床基因扩增检验实验室的设置质量管理26辅助用房：辅助用房：n清洁区清洁区n标本接受区：标本接受区：灵活设置灵活设置 不干扰四区不干扰四区 规范的保存和传递规范的保存和传递临床基因扩增检验实验室的设置质量管理27实验室使用和管理：实验室使用和管理：标本接受区标本接受区样本制备区样本制备区扩增区扩增区产物分析区产物分析区试剂准备区试剂准备区临床基因扩增检验实验室的设置质量管理28

12、区域的适当合并：区域的适当合并：“由于测定技术总是在发展之中，由于测定技术总是在发展之中，区域的合并应根据仪器的特点而定区域的合并应根据仪器的特点而定”临床基因扩增检验实验室的设置质量管理29小结：小结：n从核心仪器特点、实验室的现状出发，从核心仪器特点、实验室的现状出发，综合考虑管理要求综合考虑管理要求n尽可能在现有条件下满足管理要求尽可能在现有条件下满足管理要求n以管理措施弥补硬件的不足以管理措施弥补硬件的不足n有条件，留有余地有条件，留有余地n再好的分区设置，如果不辅之与认真执再好的分区设置，如果不辅之与认真执行的相应的管理制度，等同于无。行的相应的管理制度，等同于无。临床基因扩增检验实

13、验室的设置质量管理30实验室质量体系的建立实验室质量体系的建立：n管理要求管理要求n体系建立体系建立临床基因扩增检验实验室的设置质量管理31管理要求：管理要求：1 1 实验室设置和设备实验室设置和设备1.1 1.1 实验室原则上应分为四个区，但如使实验室原则上应分为四个区，但如使 用全自动扩增检测仪，区域可适当合用全自动扩增检测仪，区域可适当合 并。并。1.2 1.2 各工作区的明确标记各工作区的明确标记1.3 1.3 实验室设置应能有效地防止实验室设置应能有效地防止PCRPCR后区产后区产 物的污染。物的污染。临床基因扩增检验实验室的设置质量管理32管理要求：管理要求：2 2 设施和环境设施

14、和环境2.1 2.1 实验室的设施、工作区域、能源、照明、实验室的设施、工作区域、能源、照明、温控、通风等。应便于检测工作的正常进行。温控、通风等。应便于检测工作的正常进行。2.2 2.2 实验室应配备温度湿度计、稳压电源等。实验室应配备温度湿度计、稳压电源等。2.3 2.3 进入和使用实验室各区域应有明确的限制和进入和使用实验室各区域应有明确的限制和 控制。控制。2.4 2.4 应有实验室清洁、消毒制度及相应用具；应有实验室清洁、消毒制度及相应用具；2.5 2.5 实验室应有有关生物污染物处理、生物防护实验室应有有关生物污染物处理、生物防护 等措施及相应用具；等措施及相应用具；临床基因扩增检

15、验实验室的设置质量管理33管理要求：管理要求：3 3 人员人员3.1 3.1 实验室应配备足够数量的人员；实验室应配备足够数量的人员；这些人这些人 员必须经过培训，并取得上岗证；员必须经过培训，并取得上岗证；3.2 3.2 实验室应有培训计划和措施，保证其技术实验室应有培训计划和措施，保证其技术 人员得到及时培训。人员得到及时培训。3.3 3.3 实验室应保存其技术人员有关资格证书实验室应保存其技术人员有关资格证书 （如上岗证）、培训、技能和经历等技术档案。（如上岗证）、培训、技能和经历等技术档案。临床基因扩增检验实验室的设置质量管理34管理要求：管理要求：4 4 设备管理设备管理4.1 4.

16、1 主要设备应有维护程序文件及维护记录；主要设备应有维护程序文件及维护记录；4.2(a)4.2(a)有问题的设备应立即停止使用，并加上明显标识，如可有问题的设备应立即停止使用，并加上明显标识，如可 能应将其贮存在规定的地方直至修复；能应将其贮存在规定的地方直至修复；(b)(b)修复的设备必须修复的设备必须 经校准、检定（验证）或检测满足要求后方能再次投入使经校准、检定（验证）或检测满足要求后方能再次投入使 用；用；(c)(c)实验室应检查由于上述缺陷对以前所进行的检测工实验室应检查由于上述缺陷对以前所进行的检测工 作的影响。作的影响。4.3 4.3 加样器、温度计、扩增仪和酶标仪等应有校准程序

17、并进行加样器、温度计、扩增仪和酶标仪等应有校准程序并进行 校准，扩增仪和酶标仪应有明显的标识表明其校准状态。校准，扩增仪和酶标仪应有明显的标识表明其校准状态。4.4 4.4 应保存扩增仪、酶标仪、生物安全柜、加样器等设备的档应保存扩增仪、酶标仪、生物安全柜、加样器等设备的档 案案临床基因扩增检验实验室的设置质量管理35管理要求：管理要求：5 5 检测方法检测方法5.1 5.1 实验室应制定：实验室应制定：有关仪器设备操作程有关仪器设备操作程 序；序；有关扩增检测的工作程序。有关扩增检测的工作程序。5.2 5.2 所有上述标准操作程序都应现行有效并便所有上述标准操作程序都应现行有效并便 于工作人

18、员使用。于工作人员使用。5.3 5.3 实验室应有仪器、试剂、消耗品的选购、实验室应有仪器、试剂、消耗品的选购、验收、贮存和质检程序；验收、贮存和质检程序；必须使用经国必须使用经国 家有关部门批准的试剂和仪器。家有关部门批准的试剂和仪器。临床基因扩增检验实验室的设置质量管理36管理要求：管理要求：6 6 标本管理标本管理6.1 6.1 实验室应建立对拟检测标本的唯一编号识别系统。实验室应建立对拟检测标本的唯一编号识别系统。6.2 6.2 实验室应制定有关标本收集、处理、运送、贮存实验室应制定有关标本收集、处理、运送、贮存 程序。程序。6.3 6.3 在接收标本时应有其状态的详细记录。在接收标本

19、时应有其状态的详细记录。6.4 6.4 实验室应确定标本是否符合检测要求实验室应确定标本是否符合检测要求,拒收标本拒收标本 原因要明确。原因要明确。6.5 6.5 如果标本必须在特定的环境条件下（如如果标本必须在特定的环境条件下（如2-82-8、-20 -20和和-70-70低温）贮存，则应对这些条件加以低温）贮存，则应对这些条件加以 维持、监控和记录；维持、监控和记录；临床基因扩增检验实验室的设置质量管理37管理要求：管理要求：7 7 记录记录7.1 7.1 实验室应有适合自身实际情况又符合现实验室应有适合自身实际情况又符合现 行规章制度的记录管理制度；行规章制度的记录管理制度；7.2 7.

20、2 记录应有参与标本收集、标本准备和处记录应有参与标本收集、标本准备和处 理、检测的人员签字。理、检测的人员签字。7.3 7.3 所有记录和报告都应安全贮存、妥善保所有记录和报告都应安全贮存、妥善保 管并保密。管并保密。临床基因扩增检验实验室的设置质量管理38管理要求：管理要求：8 8 报告报告8.1 8.1 检测结果的报告应准确、清晰和客观。定性测定报告检测结果的报告应准确、清晰和客观。定性测定报告“阴阴 性性”或或“阳性阳性”；定量测定则以拷贝数；定量测定则以拷贝数/ml/ml或或IU/mlIU/ml报告。报告。8.2 8.2 每份报告应包括以下信息：（每份报告应包括以下信息：（a a）标

21、题，例如）标题，例如“检测报告检测报告”（b b）报告的唯一性标识（如序号）；（）报告的唯一性标识（如序号）；（c c）检测标本的特性）检测标本的特性 和状态；（和状态；（d d）检测标本的接收时间和进行检测的时间；）检测标本的接收时间和进行检测的时间；（f f）采用的检测方法；（）采用的检测方法；（g g）实验操作及校核人员的签字，）实验操作及校核人员的签字，以及签发日期；（以及签发日期；（h h）检测报告中应给出参考结果或范围；）检测报告中应给出参考结果或范围；8.3 8.3 当报告的有效性发生疑问时，实验室应立即通知临床相关当报告的有效性发生疑问时，实验室应立即通知临床相关 科室予以改正

22、。科室予以改正。8.4 8.4 当临床科室或患者要求用电话、图文传真或其它电子和电当临床科室或患者要求用电话、图文传真或其它电子和电 磁设备传送结果时，实验室应保证工作人员遵循文件化的磁设备传送结果时，实验室应保证工作人员遵循文件化的 程序，并为对方保密。程序，并为对方保密。临床基因扩增检验实验室的设置质量管理39管理要求：管理要求：9 9 质量控制质量控制9.1 9.1 实验室应有室内质量控制标准操作程序实验室应有室内质量控制标准操作程序 文件：（文件：（a a）质控物的合理性；）质控物的合理性；（b b）质控方法（图）的有效性；）质控方法（图）的有效性；（c c）失控的判断；）失控的判断；

23、（d d）失控的措施。）失控的措施。9.2 9.2 实验室应参加室间质量评价实验室应参加室间质量评价临床基因扩增检验实验室的设置质量管理40管理要求：管理要求：10 10 抱怨抱怨10.1 10.1 实验室应制定抱怨及其处理的标准操作程序；应实验室应制定抱怨及其处理的标准操作程序；应 将抱怨资料及处理抱怨所采取的措施及结果记录将抱怨资料及处理抱怨所采取的措施及结果记录 归档保存。归档保存。10.2 10.2 当抱怨或其它任何事项是对实验室是否符合其现当抱怨或其它任何事项是对实验室是否符合其现 行程序、或者是否符合临床基因扩增实验室管行程序、或者是否符合临床基因扩增实验室管 理暂行办法和临床基因

24、扩增实验室工作规理暂行办法和临床基因扩增实验室工作规 范、或是对其它有关实验室校准或检测质量提范、或是对其它有关实验室校准或检测质量提 出疑问时，则实验室应立即对这些范围的工作和出疑问时，则实验室应立即对这些范围的工作和 有关职责进行审核。有关职责进行审核。临床基因扩增检验实验室的设置质量管理41管理要求（现场考核）：管理要求（现场考核）：n送审的文件描述与实验室实际情况的一送审的文件描述与实验室实际情况的一致性致性n实际运行与文件规定的一致性实际运行与文件规定的一致性n人员素质：对文件的认知、熟悉、灵活人员素质：对文件的认知、熟悉、灵活运用程度运用程度临床基因扩增检验实验室的设置质量管理42

25、现场考核的实际内涵：现场考核的实际内涵：n认识到不到位认识到不到位n落实到不到位落实到不到位n符合性检查加指导性检查符合性检查加指导性检查n有重点的全面检查有重点的全面检查临床基因扩增检验实验室的设置质量管理43建立质量管理体系首先要解决的问题：建立质量管理体系首先要解决的问题：n第一个问题：质量体系建立的核心问题第一个问题：质量体系建立的核心问题是什么？是什么？n第二个问题：质量体系模式要达到的管第二个问题：质量体系模式要达到的管理目的是什么？理目的是什么？n第三个问题：达到目的的方法（途径、第三个问题：达到目的的方法（途径、手段）是什么？手段）是什么？临床基因扩增检验实验室的设置质量管理4

26、4质量体系的定义质量体系的定义 为实施质量管理所需的组织结为实施质量管理所需的组织结构、程序、过程和资源。构、程序、过程和资源。n要点：定义涵盖了实验室管理的每一个要点：定义涵盖了实验室管理的每一个 方面。方面。临床基因扩增检验实验室的设置质量管理45n组织结构：一个组织为行使其职能，按某组织结构：一个组织为行使其职能，按某种方式建立的职责、权限及其相互关系。种方式建立的职责、权限及其相互关系。n程序：为进行某项活动所规定的途径。程序：为进行某项活动所规定的途径。n过程：将输入转化为输出的一组彼此相关过程：将输入转化为输出的一组彼此相关的资源和活动。的资源和活动。临床基因扩增检验实验室的设置质

27、量管理46四个组成部分的关系：四个组成部分的关系：n关键：核心关键：核心过程（活动）过程（活动）纽带纽带程序程序 组织结构组织结构 程序程序 资源资源 过程过程临床基因扩增检验实验室的设置质量管理47理解理解n“过程过程”的重要性的重要性 1 1、工作是通过过程来完成的。、工作是通过过程来完成的。2 2、质量管理是通过对各种过程的控制、质量管理是通过对各种过程的控制 来实现的。来实现的。3 3、质量管理本身也是一系列的过程、质量管理本身也是一系列的过程n过程的分解、控制过程的分解、控制n过程的有机组合过程的有机组合过程过程临床基因扩增检验实验室的设置质量管理48前处理前处理检测检测样本采集样本

28、采集和接受和接受编制报告编制报告审核审核报告发放报告发放记录保存记录保存登记登记编号编号质控质控咨询咨询临床基因扩增检验实验室的设置质量管理49质量体系运行的目的质量体系运行的目的方针方针目标目标质量环质量环及要素及要素QS结构结构QS文件文件QS运行运行QS审核审核QS评审评审质量改进质量改进报告报告 证书证书临床基因扩增检验实验室的设置质量管理50主要手段：质量体系文件主要手段：质量体系文件n质量方针：质量方针：n质量手册：阐明实验室的质量方针，各质量手册：阐明实验室的质量方针，各方面质量管理的一般性描述方面质量管理的一般性描述n程序性文件：程序性文件：对通用于整个实验室的某对通用于整个实

29、验室的某些方面工作的文件化描述些方面工作的文件化描述n标准操作程序（标准操作程序（SOPSOP文件）：文件）：是实验室最是实验室最为具体、最具有可操作性、也是使用频为具体、最具有可操作性、也是使用频率最高的文件率最高的文件临床基因扩增检验实验室的设置质量管理51n申请表的附录申请表的附录5“5“需准备的标准操作程序需准备的标准操作程序（最低要求）（最低要求）”n对实验室的质量手册和程序文件没作要求对实验室的质量手册和程序文件没作要求n对必须具备的对必须具备的SOPSOP文件的编撰格式没作具体文件的编撰格式没作具体要求要求临床基因扩增检验实验室的设置质量管理53SOPSOP：实验室最具个性的文件

30、：实验室最具个性的文件n不够严谨准确不够严谨准确n不够连贯不够连贯n不够严密不够严密临床基因扩增检验实验室的设置质量管理54例：例：n用加样枪取用加样枪取100100ll样品加入提取液样品加入提取液n用加样器（移液器）以前进式移液法吸用加样器（移液器）以前进式移液法吸取取100l100l样品加入提取液样品加入提取液临床基因扩增检验实验室的设置质量管理55例：例：向一新的经高压灭菌处理过的向一新的经高压灭菌处理过的0.5ml0.5ml离心管中加入离心管中加入10l10l充分混匀的充分混匀的RNARNA提取液提取液A A（RNARNA提取液提取液A A易沉淀，取易沉淀，取样前需用移液器反复吸打混匀

31、后吸取）样前需用移液器反复吸打混匀后吸取）。加人。加人50l50l血血清标本或阴阳性标准品，再加人清标本或阴阳性标准品，再加人200l200l的的RNARNA提取液提取液B B充分混匀。室温放置充分混匀。室温放置5 5分钟。分钟。6000rpm6000rpm离心离心1 1分钟，小心分钟，小心吸去上清，用吸去上清，用7575的预冷乙醇（的预冷乙醇（DEPCDEPC水配制）洗沉淀水配制）洗沉淀两次。（取两次。（取7575乙醇乙醇450l450l洗沉淀，充分震荡混匀，洗沉淀，充分震荡混匀，6000rpm6000rpm，离心，离心1 1分钟，然后去上清，再用分钟，然后去上清，再用7575的乙醇的乙醇4

32、50l450l洗一次），洗一次），6565干燥沉淀干燥沉淀1010分钟。（注：分钟。（注：75%75%乙醇配制时须用试剂盒中提供的乙醇配制时须用试剂盒中提供的DEPC H2ODEPC H2O）。）。临床基因扩增检验实验室的设置质量管理56 机械地抄书、说明书、其它实验机械地抄书、说明书、其它实验室的文件。室的文件。临床基因扩增检验实验室的设置质量管理57撰写撰写SOPSOP文件要做到：文件要做到：n具有专业知识的人，按文件就能顺利完具有专业知识的人，按文件就能顺利完成实验成实验n忠实而且连贯地反映实验过程忠实而且连贯地反映实验过程n对文件表述的理解无歧义对文件表述的理解无歧义n严谨、严密严谨、

33、严密n准确和简练准确和简练临床基因扩增检验实验室的设置质量管理58文件的文字组织：简练明确文件的文字组织：简练明确n向一新的经高压灭菌处理过的向一新的经高压灭菌处理过的0.5ml0.5ml离心管中加入离心管中加入10l10l充分混匀的充分混匀的RNARNA提取液提取液A A（RNARNA提取液提取液A A易沉淀，取易沉淀，取样前需用移液器反复吸打混匀后吸取样前需用移液器反复吸打混匀后吸取）。）。加人加人50l50l血血清标本或阴阳性标准品，再加人清标本或阴阳性标准品，再加人200l200l的的RNARNA提取液提取液B B充分混匀。室温放置充分混匀。室温放置5 5分钟。分钟。6000rpm60

34、00rpm离心离心1 1分钟，小心分钟，小心吸去上清，用吸去上清，用7575的预冷乙醇（的预冷乙醇（DEPCDEPC水配制水配制）洗沉淀洗沉淀两次。（取两次。（取7575乙醇乙醇450l450l洗沉淀，充分震荡混匀，洗沉淀，充分震荡混匀，6000rpm6000rpm，离心，离心1 1分钟，然后去上清，再用分钟，然后去上清，再用7575的乙醇的乙醇450l450l洗一次），洗一次），6565干燥沉淀干燥沉淀1010分钟。分钟。（注：（注：75%75%乙醇配制时须用试剂盒中提供的乙醇配制时须用试剂盒中提供的DEPC H2ODEPC H2O）。临床基因扩增检验实验室的设置质量管理59质量体系文件的构

35、成：质量体系文件的构成：质量质量 手册手册 程序性程序性 文文 件件质量文件质量文件 质量文件（作业指质量文件（作业指 导书、表格、报告等）导书、表格、报告等）临床基因扩增检验实验室的设置质量管理60程序文件和程序文件和SOPSOP的关系的关系n对通用于整个实验对通用于整个实验室的某些方面工作室的某些方面工作的文件化描述的文件化描述n具体操作的标准化具体操作的标准化文件文件程序文件等同于以往的管理制度程序文件等同于以往的管理制度SOPSOP等同于以往的操作卡或操作说明书等同于以往的操作卡或操作说明书临床基因扩增检验实验室的设置质量管理61nWhatWhatnWhoWhonWhereWheren

36、WhenWhennWhyWhynHowHow写合乎管理要求的写合乎管理要求的 ，写你做得到的，写你做得到的临床基因扩增检验实验室的设置质量管理62难点难点：n写你所做的写你所做的n做你所写的做你所写的n记录你所做的记录你所做的关键：关键：SOPSOP和记录的必要性和重要性和记录的必要性和重要性临床基因扩增检验实验室的设置质量管理63仪器设备的校准程序仪器设备的校准程序目的：保证检验的有效性，准确性。目的：保证检验的有效性，准确性。范围：本程序适用于满足范围：本程序适用于满足PCR实验室检测需要并可能对检验结果造成误差的仪器设备。主要有：实验室检测需要并可能对检验结果造成误差的仪器设备。主要有：

37、职责：校准由职责：校准由PCR实验室主任负责组织执行。实验室主任负责组织执行。工作流程：工作流程：4.1 校准方法：校准方法：Finpipette可调式移液器校准采用厂家推荐方法。校准主要使用设备为可调式移液器校准采用厂家推荐方法。校准主要使用设备为BS110S电子电子天平（天平（Max 110g,d=0.1mg）。）。4.2 校准计划：校准计划：4.2.1 启用校准：设备在投入使用时实施启用校准。启用校准：设备在投入使用时实施启用校准。4.2.2 周期校准：设备在投入使用后，每半年实施一次校准。周期校准：设备在投入使用后，每半年实施一次校准。4.2.3 维修后校准：设备在维修后须经校准方可重

38、新投入使用。维修后校准：设备在维修后须经校准方可重新投入使用。4.2.4 校准计划外的校准：如在检测及校准计划外的校准：如在检测及EQA，IQC活动中发现存在结果漂移或偏差及其它可疑情况时，通活动中发现存在结果漂移或偏差及其它可疑情况时，通 过分析对可疑设备实施校准。过分析对可疑设备实施校准。4.2.5 Finpipette可调式移液器的校准顺序：按照单一流向规定，对可调式移液器的校准顺序：按照单一流向规定，对Finpipette可调式移液器的校准首先可调式移液器的校准首先 校准试剂准备区，然后依次为样本处理区和校准试剂准备区，然后依次为样本处理区和PCR扩增区。每校准完一个区的移扩增区。每校

39、准完一个区的移 液器，将其放回原处后，再取下一个区的移液器进行校准。液器，将其放回原处后，再取下一个区的移液器进行校准。4.2.6 校准安排在不进行样本检测的日期完成。校准安排在不进行样本检测的日期完成。4.3 校准的有效标识：经校准的设备加贴绿色标签，标签上应标明本次校准的日期和结果及下次校准的计校准的有效标识：经校准的设备加贴绿色标签，标签上应标明本次校准的日期和结果及下次校准的计划划 预定日期。预定日期。4.4 校准结果的审批及记录保存：每次校准的结果须及时送交科质量负责人审阅签字予以核准。校准记录校准结果的审批及记录保存：每次校准的结果须及时送交科质量负责人审阅签字予以核准。校准记录须

40、须 妥善保存直至设备报废。妥善保存直至设备报废。校准涉及的文件：校准涉及的文件：5.1 校准方法文件：校准方法文件：Cal-SOP-1 Cal-SOP-25.2 校准记录文件：校准记录文件：Cal-Rec-1-112临床基因扩增检验实验室的设置质量管理64FinnpipetteFinnpipette可调式移液器的校准方法可调式移液器的校准方法 1 校准原理：采用移液枪吸蒸馏水称重的方法校准；校准原理：采用移液枪吸蒸馏水称重的方法校准；2 校准接受标准：比较测量结果与允许值，若测量结果在允许值范围之外，即使五次校准接受标准：比较测量结果与允许值，若测量结果在允许值范围之外，即使五次 中只出现一次

41、，该支移液器也必须重新校准；中只出现一次，该支移液器也必须重新校准；3 校准环境和用具要求：校准环境和用具要求：3.1 室温：室温：2025，测定中波动范围不大于，测定中波动范围不大于0.5；3.2 电子天平：在校准前注意检查电子天平的水平状态及校准记录；为保证天平内的电子天平：在校准前注意检查电子天平的水平状态及校准记录；为保证天平内的 湿度天平内应放置一装有湿度天平内应放置一装有10ml蒸馏水的小烧杯；蒸馏水的小烧杯；4 校准操作步骤：按生产厂家推荐的校准步序进行：校准操作步骤：按生产厂家推荐的校准步序进行：4.1 按下表指示用量设定移液器移液体积按下表指示用量设定移液器移液体积4.2 把

42、芬兰移液器嘴牢固地安装在移液器端部；把芬兰移液器嘴牢固地安装在移液器端部；4.3 用移液器将蒸馏水转移到预称重烧杯中至少五次，并记录重量（读数至十分之一用移液器将蒸馏水转移到预称重烧杯中至少五次，并记录重量（读数至十分之一 毫克）毫克）4.4.1若测量结果可接受若测量结果可接受4.4.2若测量结果不可接受，使用调较工具进行调试若测量结果不可接受，使用调较工具进行调试4.5 调试后，重复上述过程，确定该移液器是否已符合要求。调试后，重复上述过程，确定该移液器是否已符合要求。5校准注意事项：校准注意事项：临床基因扩增检验实验室的设置质量管理65nFinnpipette可调式移液器的校准记录可调式移

43、液器的校准记录 (Rec-Cal-1)临床基因扩增检验实验室的设置质量管理66临床临床PCRPCR检测实验室的技术验收检测实验室的技术验收n准备准备n申请：书面资料的提交、审核申请：书面资料的提交、审核n现场验收：现场验收：1 1、设置、设备、档案、记录、设置、设备、档案、记录 等实际情况的检查等实际情况的检查 2 2、已知样本现场检测、已知样本现场检测 3 3、对工作人员的口试或笔试、对工作人员的口试或笔试n5 5年后的周期性复审年后的周期性复审 临床基因扩增检验实验室的设置质量管理67临床基因扩增检验实验室的设置质量管理68Merry ChristmasandHappy New Year临床基因扩增检验实验室的设置质量管理69