临床检验基础现状和特点课件.ppt
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1、绪绪 论论一、临床检验基础的现状和特点一、临床检验基础的现状和特点?古代古代:感官检查(如:尿液中世纪)感官检查(如:尿液中世纪)?17世纪世纪:荷兰荷兰Leeuwenhoek发明显微镜发明显微镜绪论一、临床检验基础的现状和特点?古代:感官检查(如:尿液?2020世纪末以来世纪末以来:自然科学基础学科与医学自然科学基础学科与医学基础学科结合电脑化、自动化、微量基础学科结合电脑化、自动化、微量化化?2 0 世纪末以来:自然科学基础学科与医学基础学科结合电脑化?2121世纪:现代信息网络技术(远程诊断)世纪:现代信息网络技术(远程诊断)与系统生物工程(包括分子生物学)、与系统生物工程(包括分子生物
2、学)、临床医学结合。临床医学结合。?2 1 世纪:现代信息网络技术(远程诊断)与系统生物工程(包括?最常用的临床检验,借助先进的检测技最常用的临床检验,借助先进的检测技术,对来自离体的术,对来自离体的血液、尿液、粪便血液、尿液、粪便以以及及分泌物和排泄物分泌物和排泄物等标本进行理学、化等标本进行理学、化学、病原学和显微镜形态学的检查,以学、病原学和显微镜形态学的检查,以简便、快速的检测结果,基本满足临床简便、快速的检测结果,基本满足临床医学检验医学检验筛检筛检疾病的需求。疾病的需求。?最常用的临床检验,借助先进的检测技术,对来自离体的血液、尿?临床检验现代特征:临床检验现代特征:1从手工从手工
3、自动化、电脑化检测自动化、电脑化检测?临床检验现代特征:1 从手工自动化、电脑化检测2床边检测(床边检测(point of care test,POCT)2 床边检测(p o i n t o f c a r e t e s t,P O C T3试剂批量、配套、专业和多样化试剂批量、配套、专业和多样化3 试剂批量、配套、专业和多样化4.4.检验方法标准化检验方法标准化如:如:19661966年,成立年,成立 国际血液学标准化委员国际血液学标准化委员会会(ICSHICSH,源自,源自19631963年欧洲血液学协会年欧洲血液学协会标准化委员会)标准化委员会)5全面质量保证全面质量保证 人员和物质人
4、员和物质检验分析前:检验分析前:标本的标本的采集、储存采集、储存 和和转运转运过程尤为重要。过程尤为重要。现认为,管理好这两个环节,可降低现认为,管理好这两个环节,可降低 70%70%的检验差错率。的检验差错率。4.检验方法标准化如:1 9 6 6 年,成立国际血液学标准化委员会(1)(1)标本采集原则标本采集原则保持离体标本保持离体标本质质和和量量的的完整性完整性(1)标本采集原则保持离体标本质和量的完整性(2 2)避免非疾病因素的干扰)避免非疾病因素的干扰生理变异:生理变异:第一类:不能控制的第一类:不能控制的 生理变异生理变异 年龄和性年龄和性别对检验影响为长期效应别对检验影响为长期效应
5、第二类:相对能控制的第二类:相对能控制的 生理变异生理变异,如,如食物、食物、药物、情绪、状态、体位和标本采集时间药物、情绪、状态、体位和标本采集时间等,对检验的影响多为短期效应。等,对检验的影响多为短期效应。1 1)饮食因素:刚进食、禁食、饮酒、吸烟)饮食因素:刚进食、禁食、饮酒、吸烟2 2)药物因素:方式、浓度)药物因素:方式、浓度(2)避免非疾病因素的干扰生理变异:第一类:不能控制的生理变二、临床检验基础的应用目的二、临床检验基础的应用目的1为疾病为疾病诊断和鉴别诊断诊断和鉴别诊断提供实验室提供实验室检测客观依据检测客观依据2.2.为疾病为疾病疗效监测和预后判断疗效监测和预后判断 提供动
6、态提供动态变化依据变化依据3.3.为为预防疾病预防疾病提供检测依据提供检测依据4.4.为为科学研究科学研究提供医学检验基本数据、提供医学检验基本数据、基本检验方法和操作技能。基本检验方法和操作技能。二、临床检验基础的应用目的1 为疾病诊断和鉴别诊断提供实验室三、学好临床基础检验的基本要求三、学好临床基础检验的基本要求1 1 掌握检验基础理论掌握检验基础理论2掌握检验实验技能掌握检验实验技能3 3熟悉检验方法学评价熟悉检验方法学评价4 4了解检验项目参考值了解检验项目参考值红细胞计数红细胞计数(RBC)(RBC)参考值参考值1212男性:男性:(4.0(4.05.5)5.5)1010/L L12
7、12女性:女性:(3.5(3.55.05.0)1010/L L三、学好临床基础检验的基本要求1 掌握检验基础理论2 掌握检5 5熟悉检验项目临床意义熟悉检验项目临床意义?尿蛋白定性临床意义尿蛋白定性临床意义 阳性有生理阳性有生理性,也有病理性。糖尿病患者尿性,也有病理性。糖尿病患者尿中持续出现尿蛋白阳性,需除外中持续出现尿蛋白阳性,需除外泌尿系感染、原发性肾病外,应泌尿系感染、原发性肾病外,应考虑糖尿病肾病的诊断考虑糖尿病肾病的诊断5 熟悉检验项目临床意义?尿蛋白定性临床意义阳性有生理性,也血液标本采集和血涂片制备血液标本采集和血涂片制备血液标本采集和抗凝剂选择血液标本采集和抗凝剂选择全血全血
8、:临床血液学检查:血细胞计数、分类:临床血液学检查:血细胞计数、分类血浆血浆:临床生化检查(内分泌激素测定等);血:临床生化检查(内分泌激素测定等);血栓与止血的检查栓与止血的检查血清血清:除纤维蛋白原等凝血:除纤维蛋白原等凝血因子外,其他成分与血浆因子外,其他成分与血浆基本相同,多数临床化学和基本相同,多数临床化学和临床免疫学检查。临床免疫学检查。血液标本采集和血涂片制备血液标本采集和抗凝剂选择全血:临床血一、采血方法一、采血方法静静 脉脉 采采 血血 法法(venipuncture(venipuncture forfor bloodbloodcollection)collection)皮皮
9、 肤肤 采采 血血 法法(skin(skin puncturepuncture forfor bloodbloodcollectioncollection)真真 空空 采采 血血 法法(vacuum(vacuum tubetube forfor bloodbloodcollectioncollection,负压采血法,负压采血法)。定量、安全、转运方便定量、安全、转运方便.封闭式采血封闭式采血,无需容器转移,减少溶血。无需容器转移,减少溶血。真空定量贮存试管适于不同的检验项目真空定量贮存试管适于不同的检验项目一、采血方法静脉采血法(v e n i p u n c t u r e f o r b
10、 l o真空采血容器色泽及应用范围真空采血容器色泽及应用范围颜颜色色抗抗 凝凝 剂剂草酸盐、氟化钠草酸盐、氟化钠应应 用用 范范 围围全血、血浆,血葡全血、血浆,血葡萄糖萄糖血培养血培养灰灰黄黄绿绿肝素肝素全血、血浆:血气全血、血浆:血气血清:生化、免疫血清:生化、免疫红红蓝蓝紫紫枸橼酸盐枸橼酸盐全血、血浆:凝血全血、血浆:凝血检查检查乙二胺四乙酸盐乙二胺四乙酸盐全血、血浆,钾盐全血、血浆,钾盐用于血细胞、血小用于血细胞、血小板和血液学检查板和血液学检查真空采血容器色泽及应用范围颜色抗凝剂草酸盐、氟化钠应用范围全【方法学评价】【方法学评价】?皮肤采血:易溶血、凝血和可能混入组皮肤采血:易溶血、
11、凝血和可能混入组织液,重复性差。织液,重复性差。?开放式采血开放式采血:操作环节多、不规范,易:操作环节多、不规范,易污染。污染。?封闭式采血封闭式采血:操作规范,安全性、重复:操作规范,安全性、重复性好。性好。【方法学评价】?皮肤采血:易溶血、凝血和可能混入组织液,重复【质量控制】【质量控制】血标本采集是分析前质量控制重要环节。血标本采集是分析前质量控制重要环节。1 1患者患者2 2采血采血 静脉采血:止血带压迫时间宜静脉采血:止血带压迫时间宜小小于于1min【质量控制】血标本采集是分析前质量控制重要环节。1 患者2 3 3溶血溶血4 4血标本处理原则血标本处理原则及时运送检测及时运送检测保
12、存:温度和有效时间保存:温度和有效时间5 5实验结果分析实验结果分析采样时采样时:年龄、性别、饮食、药物、时间:年龄、性别、饮食、药物、时间3 溶血4 血标本处理原则及时运送检测保存:温度和有效时间5二、抗凝剂选择二、抗凝剂选择1.1.乙乙 二二 胺胺 四四 乙乙 酸酸(ethylenediamineethylenediaminetetraacetictetraacetic acid,acid,EDTAEDTA)盐)盐NaNa2 2C C1010H H1414O O8 8N N2 2+Ca+Ca2+2+aCaC1010H H1212O O8 8N N2 2+2Na+2Na+2H+2H+特点:特
13、点:对血细胞形态、血小板计数影响很小(但对血细胞形态、血小板计数影响很小(但影响血小板聚集)。影响血小板聚集)。根据根据国际血液学标准化委员会国际血液学标准化委员会(International(InternationalCommitteeCommitteeforforStandardizationStandardizationofofhematologyhematology,ICSHICSH)19931993年文件建议,年文件建议,血细血细胞胞 计计 数数 用用 EDTA-KEDTA-K2 2作作 抗抗 凝凝 剂剂(EDTA-KEDTA-K2 2-2H-2H2 2O O1.51.52.2mg/
14、ml2.2mg/ml血液血液)。)。二、抗凝剂选择1.乙二胺四乙酸(e t h y l e n e d i a mi n2草酸盐(草酸盐(sodium oxalate):对凝):对凝血血V因子保护功能差,影响凝血酶原时间因子保护功能差,影响凝血酶原时间测定;草酸盐与凝血酶钙结合后形成的测定;草酸盐与凝血酶钙结合后形成的沉淀物,影响自动凝血仪的使用;高浓沉淀物,影响自动凝血仪的使用;高浓度钾或钠离子易使血细胞脱水皱缩,草度钾或钠离子易使血细胞脱水皱缩,草酸铵使血细胞膨胀。酸铵使血细胞膨胀。2 草酸盐(s o d i u m o x a l a t e):对凝血V 因子保护3肝素肝素(hepari
15、n)加强抗凝血酶加强抗凝血酶III(antithrombin III,AT-III)灭活丝氨酸)灭活丝氨酸蛋白酶的作用,从而蛋白酶的作用,从而阻止凝血酶阻止凝血酶形成,形成,阻止血小板聚集等作用,抗凝力强。用阻止血小板聚集等作用,抗凝力强。用量量(152.5)U/ml血液血液。但常可。但常可引起白引起白细胞聚集细胞聚集,并使血涂片在罗氏染色,并使血涂片在罗氏染色(Romanowskys staining)时产生蓝)时产生蓝色背景。色背景。3 肝素(h e p a r i n)加强抗凝血酶I I I(a n t i t4 4 枸枸 橼橼 酸酸 盐盐枸枸 橼橼 酸酸 钠钠(trisodiumtri
16、sodiumcitratecitrate),能与血液中的钙离子结合形成,能与血液中的钙离子结合形成螯合物,从而阻止血液凝固。螯合物,从而阻止血液凝固。2Na2Na3 3C C6 6H H5 5O O7 7+2Ca+2Ca2+2+2CaC2CaC6 6H H5 50 07 7-+6Na+6Na+抗凝力较弱。抗凝力较弱。抗凝比例抗凝比例19。多用于临床。多用于临床血液学检查、血液保养(毒性小)。血液学检查、血液保养(毒性小)。4 枸橼酸盐枸橼酸钠(t r i s o d i u mc i t r a t e),能第二节第二节 血液涂片制备和细胞染色血液涂片制备和细胞染色一、血液涂片制备一、血液涂片
17、制备厚薄适宜(与血量多少、推片速度有关),厚薄适宜(与血量多少、推片速度有关),头体尾明显:细胞分布要均匀头体尾明显:细胞分布要均匀血膜边缘整齐(留一定空隙)血膜边缘整齐(留一定空隙)第二节血液涂片制备和细胞染色一、血液涂片制备厚薄适宜(与血量血血涂涂片片分分布布 不不 均均主主 要要 原原因:因:推片边缘推片边缘不齐、不齐、用力不用力不均匀、均匀、载片不载片不清洁清洁血涂片分布不均主要原因:推片边缘不齐、用力不均匀、载片不清洁二、血液细胞染色二、血液细胞染色(一)瑞氏染色法(一)瑞氏染色法(Wright(Wright s s stain)stain)1 1瑞氏染料瑞氏染料-酸性染料伊红(酸性
18、染料伊红(eosin,eosin,E E)+碱性染料亚甲蓝(碱性染料亚甲蓝(methylenemethylene blue,blue,M M;又名美蓝)组成复合染料。又名美蓝)组成复合染料。甲醇:溶解美蓝和伊红甲醇:溶解美蓝和伊红 MEME;固定细胞的形;固定细胞的形态;提高对染料的吸附作用。态;提高对染料的吸附作用。二、血液细胞染色(一)瑞氏染色法(Wr i g h t s s t a i n2 2染色原理染色原理物理吸附、化学亲和物理吸附、化学亲和3 3pHpH值的影响值的影响细胞各种成分多属蛋白质,由于细胞各种成分多属蛋白质,由于 蛋白质系两性电蛋白质系两性电解质解质,所带电荷随溶液,所
19、带电荷随溶液 pHpH而定。而定。在在偏酸时正电荷(偏酸时正电荷(H H)增多)增多,易与伊红结合,染,易与伊红结合,染色偏红。色偏红。在在偏碱时负电荷增多偏碱时负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染,易与美蓝或天青结合,染色偏蓝。色偏蓝。染料染料贮存时间愈久,染色效果愈好贮存时间愈久,染色效果愈好。染液贮存,必须加塞,以防止甲醇挥发和被氧化染液贮存,必须加塞,以防止甲醇挥发和被氧化成甲酸。成甲酸。加入甘油加入甘油,防止甲醇挥发,染色清晰防止甲醇挥发,染色清晰。2 染色原理物理吸附、化学亲和3 p H 值的影响细胞各种成分多(二)(二)姬姆萨染色法姬姆萨染色法姬姆萨染液:由姬姆萨染液:由天青、伊红
20、天青、伊红组成。组成。(二)姬姆萨染色法姬姆萨染液:由天青、伊红组成。【方法学评价】【方法学评价】1.1.血涂片制备血涂片制备手工推片法手工推片法:血量少、操作简单、重复差。血量少、操作简单、重复差。【方法学评价】1.血涂片制备手工推片法:血量少、操作简单、重2.血液细胞染色血液细胞染色瑞氏染色法:最经典、最常用瑞氏染色法:最经典、最常用瑞氏瑞氏-姬姆萨复合染液:取长补短姬姆萨复合染液:取长补短2.血液细胞染色瑞氏染色法:最经典、最常用瑞氏-姬姆萨复合染第二章第二章 血液一般检验血液一般检验第一节第一节 红细胞检验红细胞检验红细胞(红细胞(red blood cell;erythrocyte)
21、起起 源源 于于 骨骨 髓髓 造造 血血 干干 细细 胞胞(colonyforming unit-spleen,CFU-S)红细胞的主要生理功能:通过胞内的血红红细胞的主要生理功能:通过胞内的血红蛋白来实现的。蛋白来实现的。第二章血液一般检验第一节红细胞检验红细胞(r e d b l o o d c一、红细胞计数一、红细胞计数(red(red bloodblood cellcell countcount,RBC)RBC)【检测原理】【检测原理】1手工显微镜法手工显微镜法2 2血液分析仪法血液分析仪法利用电阻抗和(或)光散射原理利用电阻抗和(或)光散射原理一、红细胞计数(r e d b l o
22、o d c e l l c o u n t,R B C)红细胞计数红细胞计数2ml稀释液稀释液充分混匀充分混匀10ul血液血液充池、静止充池、静止镜下计镜下计数数计算:计算:RBC/L=N510106200红细胞计数2 ml 稀释液充分混匀1 0 u l 血液充池、静止镜下计数Neubauer计数盘N e u b a u e r 计数盘3mmWBC WBC WBC WBC 1mm3 mmWB C 【方法学评价】【方法学评价】1 1手工显微镜法手工显微镜法2 2血液分析仪法血液分析仪法为目前主要临床检验细胞计数方法为目前主要临床检验细胞计数方法变变异异系系数数(coefficientcoeffi
23、cient ofof variation,variation,CVCV)小。)小。【方法学评价】1 手工显微镜法2 血液分析仪法为目前主要临床【质量控制】【质量控制】1 1手工法手工法误差来源包括:标本、操作、误差来源包括:标本、操作、器材、固有误差(计数域误差)器材、固有误差(计数域误差)2 2仪器法仪器法严格按操作规程;定期作室内和室间质严格按操作规程;定期作室内和室间质控。控。【质量控制】1 手工法误差来源包括:标本、操作、器材、固有误【参考值】【参考值】成年:男性成年:男性(4(45.5)5.5)10101212/L/L1212女性女性(3.5(3.55.0)5.0)1010/L/L新
24、生儿新生儿(6.07.0)1012/L。【参考值】成年:男性(4 5.5)1 0 1 2/L 1 2 女性(3【临床意义】【临床意义】1 1生理性变化生理性变化(1)(1)年龄与性别的差异年龄与性别的差异(2)(2)精神因素精神因素(3)(3)剧烈体力运动和劳动剧烈体力运动和劳动(4)(4)气压降低气压降低(5)(5)妊娠中、后期妊娠中、后期【临床意义】1 生理性变化(1)年龄与性别的差异(2)精神因2 2病理性变化病理性变化(1 1)红细胞和血红蛋白量减少:在临床)红细胞和血红蛋白量减少:在临床最常见于最常见于各种原因的贫血各种原因的贫血。1 1)急性、慢性红细胞丢失过多:如各种)急性、慢性
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