临床本科11病原体检测课件.ppt

1、第九章第九章常见病原体检测常见病原体检测第一节第一节 标本采集运送标本采集运送v原则：原则：无菌操作、防止污染。无菌操作、防止污染。不接触消毒剂和抗菌药、立即送检。不接触消毒剂和抗菌药、立即送检。1、血液标本、血液标本v在病人发热初期、高峰期间采集，且在病人发热初期、高峰期间采集，且在应用抗菌药前。在应用抗菌药前。vSPS无菌瓶无菌瓶v怀疑败血症、毒血症、脓毒血症，在怀疑败血症、毒血症、脓毒血症，在发热期间发热期间24小时内多部位多量采血小时内多部位多量采血双部位采血培养双部位采血培养两瓶阴性两瓶阴性两瓶均阳性两瓶均阳性单瓶阳性单瓶阳性阴性报告阴性报告细菌鉴定细菌鉴定/药敏实验药敏实验阳性报告

2、阳性报告重新双部位采血培养重新双部位采血培养两瓶阴性两瓶阴性单瓶阳性单瓶阳性两瓶均阳性两瓶均阳性两次培养为不同细菌两次培养为不同细菌污染污染两次培养为相同细菌两次培养为相同细菌细菌鉴定细菌鉴定/药敏实验药敏实验重新双部位采血培养重新双部位采血培养阳性报告阳性报告2、尿液标本、尿液标本 杂菌多，要求晨起中段杂菌多，要求晨起中段尿或导尿管无菌操作。尿或导尿管无菌操作。v3、呼吸道标本、呼吸道标本 痰液和鼻咽拭子均要求痰液和鼻咽拭子均要求晨起清水漱口后采集晨起清水漱口后采集v4、粪便标本、粪便标本 取粘液脓血部位送检，怀取粘液脓血部位送检，怀疑疑2号病用碱性蛋白胨保养送检。号病用碱性蛋白胨保养送检。

3、v5、脑脊液应及时送检或床边接种，同、脑脊液应及时送检或床边接种，同时做血培养。时做血培养。v体腔积液，采量多，做血培养。体腔积液，采量多，做血培养。v6、泌尿生殖系标本泌尿生殖系标本 在无菌操作下采样在无菌操作下采样v7、创伤、组织、脓肿标本、创伤、组织、脓肿标本 注意防止皮注意防止皮肤表面污染菌混入，脓肿可穿刺采样。肤表面污染菌混入，脓肿可穿刺采样。二、常用检查方法二、常用检查方法v1、直接显微、直接显微镜检查镜检查 标本直接或离标本直接或离心浓缩沉淀后心浓缩沉淀后涂片染色用显涂片染色用显微镜观察形态微镜观察形态 v2、抗原抗体检测、抗原抗体检测 见免疫学检查见免疫学检查v3、核酸检查（、

4、核酸检查（PCR、基因芯片）、基因芯片）4、细菌分离培养、细菌分离培养 依据可疑细菌培养特依据可疑细菌培养特性，选择合适的培养性，选择合适的培养基进行基进行培养或分离培养或分离培养培养；根据菌落形态、；根据菌落形态、生化反应、染色作出生化反应、染色作出鉴定，有时进一步做鉴定，有时进一步做药物敏感试验药物敏感试验第二节第二节 病原体耐药性检测病原体耐药性检测v耐药机制（略）耐药机制（略）v药敏试验药敏试验 药敏试验是测定抗生素在体外抑制细药敏试验是测定抗生素在体外抑制细菌生长能力的试验，目的是选择最佳菌生长能力的试验，目的是选择最佳抗生素便于治疗抗生素便于治疗 将含有定量药物的将含有定量药物的纸

5、片贴在接种测试纸片贴在接种测试菌的琼脂平板上孵菌的琼脂平板上孵育育24h，根据抑菌，根据抑菌圈大小判定是否敏圈大小判定是否敏感或耐药。感或耐药。1、KB纸片琼脂扩散法纸片琼脂扩散法 药敏结果为临床提供参考意见药敏结果为临床提供参考意见 “敏感敏感”或或“中度敏感中度敏感”、“耐药耐药”选择？选择？药敏试验须先进行细菌培养、分离纯化，药敏试验须先进行细菌培养、分离纯化，时间长。医生可先试用一些药，时间长。医生可先试用一些药，注意事项注意事项 耐甲氧西林金葡菌耐甲氧西林金葡菌MRSA、耐甲氧西林凝、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌固酶阴性葡萄球菌MRSCoN是目前院内是目前院内感染的重要病原菌。感染的

6、重要病原菌。早期进行细菌培养。早期进行细菌培养。PCR检测耐药基因检测耐药基因 二、耐药菌监测试验二、耐药菌监测试验 第三节第三节 感染性病原体检测感染性病原体检测（自学）（自学）第四节第四节 病毒性肝炎血清学标志检测病毒性肝炎血清学标志检测 v病毒性肝炎有病毒性肝炎有7 7型：型：HAV HBV HCV HAV HBV HCV HDV HEV HDV HEV HGV TTVHGV TTVv甲甲、丙、丁、戊四型肝炎均会产生丙、丁、戊四型肝炎均会产生特异抗体，特异抗体，IgM型抗体阳性示急性感型抗体阳性示急性感染或病毒在复制；染或病毒在复制；IgG型抗体阳性示型抗体阳性示继往感染，传染性降低。继

7、往感染，传染性降低。v抗抗HAVIgG属保护性抗体，可终生属保护性抗体，可终生阳性。阳性。v抗抗HCV：输血后肝炎：输血后肝炎v抗抗HDV检测须依赖检测须依赖乙肝病毒存在乙肝病毒存在v戊肝抗体检查戊肝抗体检查v 肝炎病毒和病毒性肝炎的特征肝炎病毒和病毒性肝炎的特征 病毒特征病毒特征 肝炎特征肝炎特征类型类型 直直径径(nm)核酸核酸 所致肝脏病所致肝脏病 感染途径感染途径 潜伏期潜伏期 急肝死亡率急肝死亡率甲型肝炎甲型肝炎 27-32 RNA 急性肝炎急性肝炎 经口经口 30天天 0.1-0.2%乙型肝炎乙型肝炎 42-47 DNA 急性肝炎急性肝炎 非经口非经口 60-70天天 约约1%慢性

8、肝炎慢性肝炎 肝硬化。肝癌肝硬化。肝癌丙型肝炎丙型肝炎 30-60 RNA 同上同上 非非 经口经口 50天天 不到不到1%丁型肝炎丁型肝炎 35-37 RNA 同上同上 非经口非经口 70天天 1-2%戊型肝炎戊型肝炎 27-34 RNA 急性肝炎急性肝炎 经口经口 40天天 1-2%乙肝血清学标志 vHBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb HBcAb即即“二对半二对半”vHBsAg（+）示急慢性乙肝或携带者，示急慢性乙肝或携带者，具有传染性具有传染性?vHBsAb（+）示继往感染，现已恢复。示继往感染，现已恢复。HBsAb属保护性抗体属保护性抗体 有中和作用有中和作用。vHBeAg

9、（+）示病毒在复制，有强传染示病毒在复制，有强传染性。且可胎传。性。且可胎传。vHBeAb（+）示病毒复制减少，传染性示病毒复制减少，传染性降低。一般认为降低。一般认为HBeAb无保护性。无保护性。vHBcAb（+）示病毒感染且复制，具有示病毒感染且复制，具有传染性（特别是传染性（特别是IgM阳性）。阳性）。HBcAb无无保护性。保护性。v“大三阳大三阳”即即HBsAg（+）HBeAg（+）HBcAb（+），），v“小三阳小三阳”即即HBsAg（+）HBeAb（+）HBcAb（+）。）。v乙肝标志在不同病程中呈现不同的乙肝标志在不同病程中呈现不同的变化。抗原阴转、表面抗体阳性示变化。抗原阴转、

10、表面抗体阳性示为好现象。为好现象。HBsAg 抗抗-HBs HBeAg 抗抗-Hbe 抗抗-HBc 临床意义临床意义v 过去和现在均未感染过去和现在均未感染HBV v +曾感染曾感染HBV，急性感染恢复期，急性感染恢复期v +同上同上v +HBV感染已康复感染已康复v +既往感染，急性既往感染，急性HBV感染恢复期感染恢复期v +同上同上v +急性急性HBV感染，慢性携带者感染，慢性携带者v +急性急性HBV感染，趋向恢复感染，趋向恢复v +急性或慢性乙肝，传染性强急性或慢性乙肝，传染性强v +急性急性HBV感染早期感染早期v +急性急性HBV感染早期感染早期v +同上同上v +急性感染中期急

11、性感染中期v +急性感染趋向恢复急性感染趋向恢复v +同上同上v +同上同上v +HBV感染已恢复感染已恢复第五节第五节 STD病原体检测病原体检测 P437/458病原体：衣原体、支原体、梅毒螺旋体、病原体：衣原体、支原体、梅毒螺旋体、淋球菌、淋球菌、HIV、HPV、真菌、原虫、真菌、原虫WHO列入列入20余种（含病毒性肝炎）余种（含病毒性肝炎）我国列入的我国列入的STD有有8种：梅毒、种：梅毒、淋病、艾滋病淋病、艾滋病、生殖器疱疹、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、软生殖器疱疹、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、软下疳、性病性肉芽肿、下疳、性病性肉芽肿、1 1、艾滋病、艾滋病 AIDS定义：定义：病死率高

12、病死率高目前目前无特效药，无特效药，无预防疫苗无预防疫苗 26HIV检测：v病毒标志检测：分离病毒组分病毒标志检测：分离病毒组分v免疫标志检测：抗免疫标志检测：抗HIV-1.2、P24v非特异性检测：非特异性检测：CD4、T细胞亚群细胞亚群2728强阳强阳弱阳弱阳阴性阴性典典型型的的HIV-2血血清清阳阳性性反反应应 初筛检测阳性标本初筛检测阳性标本两种初筛试剂两种初筛试剂阴性报告阴性报告阴性报告阴性报告阴性反应阴性反应一阴一阳一阴一阳阳性反应阳性反应免疫印迹法免疫印迹法WB-1/2WB-1/2混合型混合型复核复核报告报告HIV-2HIV-2血清学血清学阳性反应阳性反应,必要时测核酸必要时测核

13、酸阴性反应阴性反应可疑反应可疑反应HIV-2 阳性反应阳性反应免疫印迹法免疫印迹法WB-2WB-2阴性报告阴性报告出现出现gp36gp36阴性反应阴性反应可疑反应可疑反应HIV-1 阳性报告阳性报告HIV-1 阳性反应阳性反应每三个月随访一次，共两次，仍属可疑，判为阴性每三个月随访一次，共两次，仍属可疑，判为阴性HIV抗体抗体确认实验流程图确认实验流程图2 2、梅毒、梅毒 v病原体为螺旋体，传病原体为螺旋体，传播途径也是性接触、播途径也是性接触、血液、母婴。血液、母婴。v血清学检查血清学检查 有有RPR、U S R、T R U S T、TPPA等。等。v阳性为梅毒感染，须阳性为梅毒感染，须用用

14、TPPA或暗视野螺旋或暗视野螺旋体检查进行确定体检查进行确定 3、淋病、淋病 v病原体为病原体为G-双球双球菌，传播途径为性菌，传播途径为性接触和胎传。接触和胎传。v直接涂片或厌氧分直接涂片或厌氧分离培养找到离培养找到G-双双球菌可确诊为淋病球菌可确诊为淋病vPCRPCR快速特异快速特异 第十章第十章 其它检测其它检测包括基因诊断、流式细胞术、染色体检查包括基因诊断、流式细胞术、染色体检查基因诊断定义基因诊断定义 以以DNA、RNA为原料，为原料，检查目标基因的存在、缺陷或表达异常，检查目标基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断对人体状态和疾病作出诊断 常用技术有：常用技术有：核

15、酸分子杂交、核酸分子杂交、PCR、限、限制性制性片段长度多肽性片段长度多肽性分析、分析、DNA测序等测序等 应用范围应用范围 感染性疾病：乙肝、丙肝、结核菌、淋菌感染性疾病：乙肝、丙肝、结核菌、淋菌基因突变基因突变：如血友病、血红蛋白分子如血友病、血红蛋白分子肿瘤相关基因：肿瘤相关基因：ras癌基因癌基因、抑癌基因抑癌基因p53法医鉴定法医鉴定 如亲子关系、如亲子关系、DNA测序测序v流式细胞术与标记免疫学结合应用于流式细胞术与标记免疫学结合应用于肿瘤及血液病诊治肿瘤及血液病诊治v染色体检查多应用于染色体检查多应用于XYY综合征、白综合征、白细胞诊治。细胞诊治。重点提示重点提示v标本采集运送原则标本采集运送原则v药敏试验定义、选择药敏试验定义、选择v甲乙丙肝炎病毒检测意义甲乙丙肝炎病毒检测意义vSTD病原体检查意义病原体检查意义The end!The end!人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。所以我们要勤恳读书，广泛阅读，古人说“书中自有黄金屋。”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，培养逻辑思维能力；通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，培养文学情趣；通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。有许多书籍还能培养我们的道德情操，给我们巨大的精神力量，鼓舞我们前进。