基因工程绪论课件.ppt
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1、基因工程基因工程Gene Engineering绪论第一节基因工程的基本念绪论第一节基因工程的基本念 重组重组DNADNA技术技术是指将一种生物体是指将一种生物体(供体)(供体)的基因与的基因与载体载体DNADNA在体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体(在体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体(受体受体)内,并且按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状内,并且按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的的DNADNA体外操作技术,也称谓体外操作技术,也称谓分子克隆技术分子克隆技术。因此,因此,供体、载体、受体供体、载体、受体是重组是重组DNADNA技术的三大基本元技术的三大基本元件。件
2、。一、基因工程的基本定义 DNA重组技术重组技术 基因工程基因工程是指重组是指重组DNA技术的产业化设计与应用。技术的产业化设计与应用。包括包括上游技术上游技术和和下游技术下游技术两大组成部分。两大组成部分。上游技术上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建(即重组构建(即重组DNA技术);技术);下游技术下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。养以及基因产物的分离纯化过程。基因工程(遗传工程、生物工程)基因工程的基本形式基因工程的基本形式第一代基因工程第一代基因工程 蛋白多肽基因的高效表达
3、蛋白多肽基因的高效表达经典基因工程经典基因工程第二代基因工程第二代基因工程 蛋白编码基因的定向诱变蛋白编码基因的定向诱变蛋白质工程蛋白质工程第三代基因工程第三代基因工程 代谢信息途径的修饰重构代谢信息途径的修饰重构途经工程途经工程第四代基因工程第四代基因工程 基因组或染色体的转移基因组或染色体的转移基因组工程基因组工程 二、基因工程诞生的理论基础(1 1)肺炎双球菌转化实验)肺炎双球菌转化实验 1944年年 Avery,确定了基因的分子载体是,确定了基因的分子载体是DNA,而,而不是蛋白质不是蛋白质。(2 2)噬菌体转染实验)噬菌体转染实验 1952年年Alfred Hershy和和Marsh
4、a Chase进一步证明遗进一步证明遗传物质是传物质是DNA。1.1.DNA是遗传物质是遗传物质 1953年年James D.Watson和和Francis H.C.Crick揭示了揭示了DNA分子的分子的双螺旋结构双螺旋结构和和半保留复半保留复制机制制机制。2.DNA双螺旋结构双螺旋结构3.3.中心法则和遗传密码中心法则和遗传密码 1957年年Crick又提出了遗传信息传递的又提出了遗传信息传递的“中心法则中心法则”1964年年Marshall Nirenberg和和Gobind Khorana等终于破译了等终于破译了64个个遗传密码遗传密码DNARNAprotein三、基因工程诞生的技术突
5、破三、基因工程诞生的技术突破三、基因工程诞生的技术突破三、基因工程诞生的技术突破1.限制性内切酶(限制性内切酶(restriction enzymes)1970年年H.O.Smith等分离出第一种限制性核酸内切酶。等分离出第一种限制性核酸内切酶。Werner Arber 理论预见限制酶理论预见限制酶Daniel Nathans 用限制酶切得用限制酶切得SV40 DNA片断片断Hamilton O.Smith 得到第一个限制酶得到第一个限制酶1978年年Nobel生理或医学奖生理或医学奖2.DNA连接酶(连接酶(ligase)1967年年5个实验室几乎同时发现了个实验室几乎同时发现了DNA连接酶
6、连接酶。3.载体(载体(vector)1972年前后使用小分子量的细菌年前后使用小分子量的细菌质粒质粒和和 噬菌体噬菌体作作载体。在细菌细胞里的大量扩增。载体。在细菌细胞里的大量扩增。4.感受态体系感受态体系1970年年M.Mandel和和A.Higa发现经过发现经过氯化钙氯化钙处理处理的大肠杆菌容易吸收噬菌体的大肠杆菌容易吸收噬菌体DNA。1972年年S.Cohen发现这种处理过的细菌同样能吸收质粒发现这种处理过的细菌同样能吸收质粒DNA。5.5.琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳1960s发明了琼脂糖凝胶电泳,可将不同长度的发明了琼脂糖凝胶电泳,可将不同长度的DNA分离开。分离开。6.DNA测序
7、技术测序技术1975年年F.Sanger、A.Maxam和和W.Gilbert发明了发明了DNA快速测序技术。快速测序技术。1980年年Nobel化学奖化学奖四、基因工程的诞生四、基因工程的诞生1980年年Nobel化学奖化学奖1972年斯坦福大学的年斯坦福大学的Paul Berg小组完成了首次小组完成了首次体外重组体外重组实验:实验:1.Berg的开创性实验的开创性实验将将SV40的的DNA片断与片断与 噬菌体的噬菌体的DNA片片断连接起来。断连接起来。(用(用DNA末端转移酶,而非末端转移酶,而非限制性内切酶)限制性内切酶)1973年斯坦福大学的年斯坦福大学的S.Cohen小组将含有小组将
8、含有卡那霉卡那霉素抗性素抗性基因的大肠杆菌基因的大肠杆菌R6-5质粒与含有质粒与含有四环素抗四环素抗性性基因的另一种大肠杆菌质粒基因的另一种大肠杆菌质粒pSC101连接成重组连接成重组质粒,具有质粒,具有双重抗药性双重抗药性。后来又把非洲爪蟾核糖体基因片断同后来又把非洲爪蟾核糖体基因片断同pSC101质质粒重组,转化大肠杆菌,并在菌体内成功转录粒重组,转化大肠杆菌,并在菌体内成功转录出相应的出相应的mRNA。这是第一次成功的。这是第一次成功的基因克隆基因克隆实验。实验。外源外源DNA在寄主细胞内可大量扩增,和高水平表达。在寄主细胞内可大量扩增,和高水平表达。1.跨物种性跨物种性2.无性扩增无性
9、扩增外源基因外源基因到另一种不同的生物细胞内进行到另一种不同的生物细胞内进行繁殖。繁殖。五、基因工程的特征五、基因工程的特征2.重组体的制备重组体的制备六、基因工程的主要操作内容六、基因工程的主要操作内容1.目的基因的获取目的基因的获取从复杂的生物基因组中,经过酶切消化或从复杂的生物基因组中,经过酶切消化或PCR扩扩增等步骤,分离出带有增等步骤,分离出带有目的基因目的基因的的DNA片断。片断。将目的基因的将目的基因的DNA片断插入到能片断插入到能自我复制自我复制并带并带有有选择性标记选择性标记(抗菌素抗性)的(抗菌素抗性)的载体载体分子上。分子上。将重组体(载体)将重组体(载体)转入转入适当的
10、受体细胞中。适当的受体细胞中。4.克隆鉴定克隆鉴定挑选挑选转化成功的细胞克隆(含有目的基因)。转化成功的细胞克隆(含有目的基因)。5.目的基因表达目的基因表达使导入寄主细胞的目的基因使导入寄主细胞的目的基因表达表达出我们所需要出我们所需要的基因产物。的基因产物。制造带有抗生素抗性基因或有产生病毒能力的基因制造带有抗生素抗性基因或有产生病毒能力的基因的的新型微生物新型微生物有可能在人类或其它生物体内传播。有可能在人类或其它生物体内传播。1.1.对环境的影响对环境的影响2.2.新型病毒的出现新型病毒的出现重新组合重新组合一种在自然见尚未发现的的生物性状有可一种在自然见尚未发现的的生物性状有可能给现
11、有的生态环境带来不良影响。能给现有的生态环境带来不良影响。一、基因工程的安全隐患一、基因工程的安全隐患第二节第二节 基因工程的安全性基因工程的安全性将肿瘤病毒或其它动物病毒的将肿瘤病毒或其它动物病毒的DNA引入细菌引入细菌有可能扩大癌症的发生范围。有可能扩大癌症的发生范围。4.4.人造生物扩散人造生物扩散新组成的新组成的重组重组DNA生物体的意外扩散可能会出现生物体的意外扩散可能会出现不同程度的潜在危险。不同程度的潜在危险。3.3.癌症扩散癌症扩散1.1.公众的担忧公众的担忧二、重组二、重组DNA研究的安全准则研究的安全准则1973年美国的公众第一次公开表示担心应年美国的公众第一次公开表示担心
12、应用重组用重组DNA技术可能会培养出具有潜在危技术可能会培养出具有潜在危险性的新型微生物,从而给人类带来难以险性的新型微生物,从而给人类带来难以预料的后果。预料的后果。1974年美国国立卫生研究院(年美国国立卫生研究院(NIH)考虑到重组)考虑到重组DNA的潜在危险,提请的潜在危险,提请Paul Berg博士组成一个博士组成一个重组重组DNA咨询委员会。咨询委员会。这个由这个由11名分子生物学和重组名分子生物学和重组DNA权威学者组成的委权威学者组成的委员会在同年员会在同年7月发表公开信(月发表公开信(science,158,303),要求,要求在没有弄清楚重组在没有弄清楚重组DNA所涉及的危
13、险性范围和程度,所涉及的危险性范围和程度,以及在采取必要的防护措施之前,暂停两类试验(以及在采取必要的防护措施之前,暂停两类试验(带带抗生素抗性和肿瘤病毒及动物病毒抗生素抗性和肿瘤病毒及动物病毒)。)。2.专家的态度专家的态度3.3.制定安全规则制定安全规则1976年年6月月23日,日,NIH正式公布了正式公布了“重组重组DNA研研究的安全准则究的安全准则”。规定了规定了安全防护(物理防护和生物防护)标准安全防护(物理防护和生物防护)标准以及以及禁止禁止若干类型的实验。若干类型的实验。1979年、年、1981年、年、1989年年NIH又做了多次修改,又做了多次修改,放宽了许多限制。放宽了许多限
14、制。一、基因工程在农业生产中的应用一、基因工程在农业生产中的应用1.1.提高植物的光合作用效率提高植物的光合作用效率第三节第三节 基因工程的应用基因工程的应用改变与光合作用有关的改变与光合作用有关的酶的结构和组成酶的结构和组成(如二磷酸核酮糖羧化酶)。(如二磷酸核酮糖羧化酶)。(1)提高)提高CO2的固定率的固定率改变改变光能交换系统光能交换系统的分子的基因结构。的分子的基因结构。(2)提高光能吸收率和转化率)提高光能吸收率和转化率3 3转基因植物转基因植物 农业生物技术的主要内容。农业生物技术的主要内容。将克隆将克隆到的特殊基因导入受体植物,使之增加一些到的特殊基因导入受体植物,使之增加一些
15、优质性优质性状状(高产、稳定、优质、抗虫、抗病等)。(高产、稳定、优质、抗虫、抗病等)。2.提高豆科植物的固氮效率提高豆科植物的固氮效率 将外源基因导入动物细胞,并在基因组内稳将外源基因导入动物细胞,并在基因组内稳定整合,遗传给后代。定整合,遗传给后代。使动物成为使动物成为生物反应器生物反应器生产有用的活性蛋白等。生产有用的活性蛋白等。4.转基因动物转基因动物在乳汁中分泌人组织纤溶酶源激活物(在乳汁中分泌人组织纤溶酶源激活物(TPA)和尿激酶的转基因小鼠;和尿激酶的转基因小鼠;分泌分泌a1抗胰蛋白酶的转基因山羊等。抗胰蛋白酶的转基因山羊等。转基因猪转基因猪转基因牛转基因牛转基因鼠转基因鼠转基因
16、药物工厂转基因药物工厂 转基因鱼转基因鱼转基因生物安全性转基因生物安全性 2019年8 月,英国阿伯丁罗威特研究所教授普兹泰发现老鼠食用转基因土豆之后免疫系统受到破坏,普兹泰进一步推论,很多消费者也象被用于试验的老鼠一样食用没有经过严格鉴定的转基因食品。该消息的发布,使世界各国如日中天的转基因热潮蒙上了一层阴影。人们开始疑惑:转基因技术-改造自然还是破坏自然?造福人类还是给人类带来灾难性的毁灭?中国的生物基因工程安全管理工作相对滞后,到目前为止,只有2部基因工程安全管理规章:1993年年12月国家科委发布的基因工程安全管理办法月国家科委发布的基因工程安全管理办法 2019年年7月农业部发布的农
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