胶体金试纸条检测技术课件.ppt

1、 胶体金试纸条诊断技术胶体金试纸条诊断技术一、简一、简 介介 胶体金试纸条诊断是采用胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成，胶体金免疫层析技术研制而成，该技术是该技术是9090年代初在免疫渗滤技年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，最先用于人的免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素（绒毛膜促性腺激素（HCGHCG）的测的测定和乙型肝炎病毒表面抗原定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAgHBsAg）等检测。等检测。p胶体金胶体金（Colloidal goldColloidal gold）是氯是氯金酸（金酸（HAuClHAuCl4 4

2、）的水溶胶，氯金的水溶胶，氯金酸在还原剂的作用下，聚合成特酸在还原剂的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。用成为一种稳定的胶体状态。zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥，以维持胶体金的稳定状态。基础金核基础金核双离子双离子 内层负离子（AuC12）zeta电位 外层离子层 H+分散在胶体间的溶液中 胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非共价结合，形成胶体金标记物。质量好的胶体金：溶液呈红色，胶质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球形，大小均一，无棱体金颗粒为球

3、形，大小均一，无棱角。角。质量差的胶体金：溶液呈紫色，大质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状各异。小不一，形状各异。胶体金的质量判胶体金的质量判定标准定标准p胶体金标记的原理：胶体金标记的原理：胶体金在胶体金在碱性条件下带负电荷，与蛋白碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电吸质分子的正电荷基团藉静电吸引而形成牢固结合。引而形成牢固结合。p胶体金标记技术胶体金标记技术（Immunogold Immunogold labeling techniquelabeling technique）是以胶是以胶体金作为示踪标记物应用于抗体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标原抗

4、体反应的一种新型免疫标记技术。记技术。二、胶体金试纸条诊断技术二、胶体金试纸条诊断技术的原理的原理 以硝酸纤维素膜为载体，利用了以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原色（红色）反应，检测抗原/抗体。抗体。有三种反应模式：夹心法，间接法，有三种反应模式：夹心法，间接法，竞争抑制法。竞争抑制法。最常用的是双抗夹心法检测抗原最常用的是双抗夹心法检测抗原胶体金试纸条示意胶体金试纸条示意图图检测线检测

5、线质检线质检线吸收垫吸收垫样品垫样品垫硝酸纤维素膜硝酸纤维素膜连接垫连接垫（胶体金垫）（胶体金垫）背衬背衬（底板）（底板）p测定时将试纸条下端测定时将试纸条下端浸入液体标本中，下浸入液体标本中，下端吸水材料即吸取液端吸水材料即吸取液体向上端移动，流经体向上端移动，流经C C处时使干片上的处时使干片上的免疫免疫金复合物金复合物复溶，并带复溶，并带动其向膜条渗移。动其向膜条渗移。测测 定定p若标本中有待测特异抗若标本中有待测特异抗原，即可与免疫金复合原，即可与免疫金复合物中的抗体结合，此抗物中的抗体结合，此抗原抗体复合物流至测试原抗体复合物流至测试区即被固相抗体捕获，区即被固相抗体捕获，在膜上显出

6、红色在膜上显出红色反应线反应线条条（T T）。）。测测 定定测测 定定p过剩的免疫金复合物过剩的免疫金复合物继续前行，至参照区继续前行，至参照区与固相抗小鼠与固相抗小鼠IgGIgG结合结合（免疫金复合物中的（免疫金复合物中的单 克 隆 抗 体 为 小 鼠单 克 隆 抗 体 为 小 鼠IgGIgG），），而显出红色而显出红色质质控线条控线条（R R）。）。测测 定定p阴性标本则无反应线条，而仅阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条显示质控线条。胶体金快速诊断技术的胶体金快速诊断技术的特点特点 p简捷快速：简捷快速：操作简单，一般只要操作简单，一般只要5 5-10min-10min 就会出结果，而

7、其它方就会出结果，而其它方法如法如ELISAELISA需要需要1 1-2h-2h，PCR PCR 需要需要时间更长。时间更长。p结果易于判定：结果易于判定：阴、阳性呈色很阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。明显，肉眼很容易判断。p特异性好：特异性好：因为该技术大多用单因为该技术大多用单克隆抗体标记，这决定了它具有克隆抗体标记，这决定了它具有很好的特异性。很好的特异性。p病毒性疾病：病毒性疾病：传染性法氏囊病传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬细小病、禽流感、新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。毒、猪瘟等。p寄生虫疾病：寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛血吸虫病、旋毛虫病、囊虫病、恙虫病。虫病、囊虫病、恙虫病。p细菌性疾病：细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻霍乱弧菌、类鼻疽。疽。胶体金快速诊断技术的胶体金快速诊断技术的应用应用H 5 亚 型亚 型AIV尿囊尿囊液阳性结液阳性结果果阴性对阴性对照照阴性对阴性对照照H5IV细胞毒细胞毒阳性结阳性结果果