21微生物的基本培养技术课件.pptx

1、微生物的类群微生物的类群原生生物：原生生物：原核生物原核生物:真菌真菌:病毒病毒:如酵母菌如酵母菌单细胞的动植物单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等如草履虫、单细胞藻类等无细胞结构无细胞结构真核细胞真核细胞细菌、蓝藻细菌、蓝藻原核细胞原核细胞SARS病毒病毒 禽流感病毒禽流感病毒细菌细胞，通常用适当染料后显微镜观察 细菌典型形态葡萄球菌大肠杆菌霍乱弧菌结构：原核细胞分支状的菌丝（营养（基内）菌丝、气生菌丝）链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素 应用:真菌是一种真核生物，通常又分为三类，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）是动物界中最低等的一类真核单细胞动物，个体由单个细胞组成。原生动物

2、草履虫变形虫一、培养基的配置一、培养基的配置基本成分：碳源、氮源、水、无机盐碳源无机：有机：CO2、CO32-、HCO3-糖类，牛肉膏、蛋白胨等自养微生物自养微生物异养微生物氮源无机：有机：N2（固氮菌）、NH3（硝化细菌）、NH4、NO3-等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源消毒消毒灭菌灭菌定义定义方法方法较为较为温和温和理化方法，理化方法，杀死杀死部分有害菌体部分有害菌体（不不包括芽孢、孢子）包括芽孢、孢子）强烈强烈的理化方法，的理化方法，杀死杀死所有微生物所有微生物（包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子）煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏

3、消毒法化学药剂化学药剂紫外线紫外线灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌1.1.消毒与灭菌：消毒与灭菌：2.2.无菌范围：无菌范围：实验操作空间消毒实验操作空间消毒操作者的手、衣着消毒操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验用具灭菌实验操作过程实验操作过程无菌技术无菌技术：防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染1.1.消毒与灭菌：消毒与灭菌：酒精灯旁操作酒精灯旁操作超净工作台超净工作台分散成单个细胞分散成单个细胞,形成单个菌落形成单个菌落3.3.功能：功能：单个单个或少数菌体或少数菌体2.2.特征：特征：大小、形状、光泽度、大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。颜色、透明度等。鉴定菌

4、种鉴定菌种的重要依据的重要依据固体固体培养基上培养基上大量繁殖大量繁殖子细胞群体子细胞群体1.1.定义：定义：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算：计算：2.2.称量：称量：3.3.溶化：溶化：牛肉膏、称量纸牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解、少量水加热溶解 取纸取纸蛋白胨、蛋白胨、NaClNaCl琼脂琼脂 补水定容补水定容4.4.调调pHpH、分装、封口：、分装、封口：5.5.灭菌：灭菌：6.6.倒平板：倒平板：培养基、培养皿培养基、培养皿约约50防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基防

5、止瓶口的微生物污染培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化酵母菌：纯化酵母菌：平板划线法：平板划线法：菌种菌种划划3 3个平板个平板1 1个不划线个不划线1.1.接种：接种：接种环接种环防止划破培养基防止划破培养基（重复实验）（重复实验）（空白对照）（空白对照）平板划线时不能划破培养基，为什么？平板划线时不能划破培养基，为什么？一旦划破，会造成划线不均匀一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个沿着划破处生

6、长，会形成一个条状的菌落。条状的菌落。1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物可能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐线次数的增加，使每次划

7、线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。环境和感染操作者。6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：菌液菌液微量微量 移移液器液器稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：b.b.涂布平板：涂布平板：不超过不超过0.1ml0.1ml各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板1 1个不涂布作空白对照个不涂布作空白对照滴滴灼灼试试涂涂微生物的实验室培养微生物的实验室培养培养基培养基无菌技术无菌技术制备牛肉蛋白胨固制备牛肉蛋白胨固体培养基体培养基纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌结果分析与评价结果分析与评价培养基的类型培养基的类型培养基的营养物质培养基的营养物质避免杂菌污染的方法避免杂菌污染的方法实验室常用的消毒方法实验室常用的消毒方法实验室常用的灭菌方法实验室常用的灭菌方法平板划线法平板划线法稀释涂布法稀释涂布法（步骤）（步骤）