临床免疫组织化学基础课件.ppt
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- 关 键 词:
- 临床 免疫 组织化学 基础 课件
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1、 1 1、临床免疫组织化学概述、临床免疫组织化学概述2 2、临床免疫组织化学的标准化及质、临床免疫组织化学的标准化及质量量控制控制3 3、临床免疫组织化学的应用、临床免疫组织化学的应用1 1、临床免疫组织化学概述、临床免疫组织化学概述 免疫组织化学的概念免疫组织化学的概念底物底物抗原抗原一抗一抗酶酶 免疫组织化学技术的发展历史免疫组织化学技术的发展历史19401940年,年,CoonsCoons免疫荧光技术,冰冻切片免疫荧光技术,冰冻切片19741974年,年,TaylorTaylor石蜡组织免疫组化技术石蜡组织免疫组化技术2020世纪世纪9090年代,年代,AvrameasAvrameas建
2、立酶标技术,建立酶标技术,即辣根过氧化物酶标记即辣根过氧化物酶标记 常用的免疫组织化学技术方法常用的免疫组织化学技术方法免疫荧光技术免疫荧光技术(免疫荧光法)(免疫荧光法)免疫酶技术(酶标抗体法、免疫酶技术(酶标抗体法、桥法、桥法、ABCABC法等法等)免疫金属技术免疫金属技术(免疫铁蛋白法、免疫金染(免疫铁蛋白法、免疫金染色法等)色法等)酶标抗体法酶标抗体法间接法染色示意图间接法染色示意图SPSP法法抗原抗原酶标二抗酶标二抗一抗一抗底物底物Envision法法2 2、临床免疫组织化学的标、临床免疫组织化学的标准化及质量控制准化及质量控制分析前分析前(1 1)标本的固定和组织处理)标本的固定和
3、组织处理 固定液、固定时间:固定液、固定时间:10%10%中性福尔马林;固定时间中性福尔马林;固定时间6-48H6-48H,细针,细针 穿刺标本大于穿刺标本大于1H1H 组织处理条件:浸蜡、烤片温度不能高于组织处理条件:浸蜡、烤片温度不能高于 65 65(2 2)实验室内部的实验方法学验证)实验室内部的实验方法学验证 抗原修复:柠檬酸盐、抗原修复:柠檬酸盐、EDTAEDTA 内源性过氧化物酶阻断内源性过氧化物酶阻断 缓冲液及校准:缓冲液及校准:PBSPBS及及PHPH值值 抗体滴度及孵育时间抗体滴度及孵育时间 底物显色及衬染时间底物显色及衬染时间 实验稳定性:人员、不同批次试剂实验稳定性:人员
4、、不同批次试剂 抗体特异性、敏感性验证抗体特异性、敏感性验证 全自动染色条件全自动染色条件针对每一种抗体的针对每一种抗体的SOPSOP分析中分析中(1 1)技术部分)技术部分 每一种新抗体在应用于临床之前必须进行每一种新抗体在应用于临床之前必须进行 实验验证实验验证 严格执行实验室的严格执行实验室的SOPSOP 日常质控:抗原修复液的日常质控:抗原修复液的PHPH、抗原修复温、抗原修复温 度等实验条件的质控度等实验条件的质控 实验对照:阳性、阴性组织对照及阴性试实验对照:阳性、阴性组织对照及阴性试 剂对照剂对照(2 2)结果解释)结果解释 在不同的观察者之间甚至专家之间所判断在不同的观察者之间
5、甚至专家之间所判断 的结果有差异这一现象已有所报道的结果有差异这一现象已有所报道 然而,仔细和准确的染色评估是免疫组化然而,仔细和准确的染色评估是免疫组化 质量保证的重要因素质量保证的重要因素 病理医生必须知道结果解释中的陷阱包括病理医生必须知道结果解释中的陷阱包括 假阳性、假阴性结果的原因假阳性、假阴性结果的原因 避免错误结果解释的原则避免错误结果解释的原则a a、观察每一种抗体的阳性和阴性组织对照、观察每一种抗体的阳性和阴性组织对照,确保无非特异性染色存在,确保无非特异性染色存在b b、仔细观察阴性试剂对照,确保无染色,以、仔细观察阴性试剂对照,确保无染色,以识别内源性生物素、色素等非特异
6、性染色识别内源性生物素、色素等非特异性染色c c、只有保存好的组织的结果解释可靠,要注、只有保存好的组织的结果解释可靠,要注意组织干片、标本边缘电灼效应、大块组织意组织干片、标本边缘电灼效应、大块组织中央处理不好、坏死自溶等对染色的影响中央处理不好、坏死自溶等对染色的影响d d、阳性染色要注意判断预期的染色模式、阳性染色要注意判断预期的染色模式预期的抗体染色模式预期的抗体染色模式 Homogeneous:S100 Filamentous:Cytokeratins Granular:Chromogranin A Uniform:TTF-1 Focal:GCDFP-15核染色的抗体核染色的抗体 细
7、胞周期相关蛋白细胞周期相关蛋白(Ki67)细胞核转录因子细胞核转录因子 (TTF-1)肿瘤抑制基因产物肿瘤抑制基因产物(p53、BcL-2)细胞核相关的酶细胞核相关的酶(TdT,HMLH1)类固醇激素受体类固醇激素受体(ER(ER,PRPR,AR)AR)钙修饰蛋白钙修饰蛋白 (S100)细胞膜染色的抗原细胞膜染色的抗原 细胞粘附分子细胞粘附分子(E-cadherin)和细胞骨架连和细胞骨架连 接分子接分子(B-catenin)跨膜受体跨膜受体(HER2/neu)大多数的白血病抗原大多数的白血病抗原(CDs)乳腺浸润性微乳头状癌乳腺浸润性微乳头状癌EMAEMA表达表达对非预期的染色模式应视为结果
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