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类型临床免疫组织化学基础课件.ppt

  • 上传人(卖家):晟晟文业
  • 文档编号:3654646
  • 上传时间:2022-10-01
  • 格式:PPT
  • 页数:46
  • 大小:10.06MB
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    关 键  词:
    临床 免疫 组织化学 基础 课件
    资源描述:

    1、 1 1、临床免疫组织化学概述、临床免疫组织化学概述2 2、临床免疫组织化学的标准化及质、临床免疫组织化学的标准化及质量量控制控制3 3、临床免疫组织化学的应用、临床免疫组织化学的应用1 1、临床免疫组织化学概述、临床免疫组织化学概述 免疫组织化学的概念免疫组织化学的概念底物底物抗原抗原一抗一抗酶酶 免疫组织化学技术的发展历史免疫组织化学技术的发展历史19401940年,年,CoonsCoons免疫荧光技术,冰冻切片免疫荧光技术,冰冻切片19741974年,年,TaylorTaylor石蜡组织免疫组化技术石蜡组织免疫组化技术2020世纪世纪9090年代,年代,AvrameasAvrameas建

    2、立酶标技术,建立酶标技术,即辣根过氧化物酶标记即辣根过氧化物酶标记 常用的免疫组织化学技术方法常用的免疫组织化学技术方法免疫荧光技术免疫荧光技术(免疫荧光法)(免疫荧光法)免疫酶技术(酶标抗体法、免疫酶技术(酶标抗体法、桥法、桥法、ABCABC法等法等)免疫金属技术免疫金属技术(免疫铁蛋白法、免疫金染(免疫铁蛋白法、免疫金染色法等)色法等)酶标抗体法酶标抗体法间接法染色示意图间接法染色示意图SPSP法法抗原抗原酶标二抗酶标二抗一抗一抗底物底物Envision法法2 2、临床免疫组织化学的标、临床免疫组织化学的标准化及质量控制准化及质量控制分析前分析前(1 1)标本的固定和组织处理)标本的固定和

    3、组织处理 固定液、固定时间:固定液、固定时间:10%10%中性福尔马林;固定时间中性福尔马林;固定时间6-48H6-48H,细针,细针 穿刺标本大于穿刺标本大于1H1H 组织处理条件:浸蜡、烤片温度不能高于组织处理条件:浸蜡、烤片温度不能高于 65 65(2 2)实验室内部的实验方法学验证)实验室内部的实验方法学验证 抗原修复:柠檬酸盐、抗原修复:柠檬酸盐、EDTAEDTA 内源性过氧化物酶阻断内源性过氧化物酶阻断 缓冲液及校准:缓冲液及校准:PBSPBS及及PHPH值值 抗体滴度及孵育时间抗体滴度及孵育时间 底物显色及衬染时间底物显色及衬染时间 实验稳定性:人员、不同批次试剂实验稳定性:人员

    4、、不同批次试剂 抗体特异性、敏感性验证抗体特异性、敏感性验证 全自动染色条件全自动染色条件针对每一种抗体的针对每一种抗体的SOPSOP分析中分析中(1 1)技术部分)技术部分 每一种新抗体在应用于临床之前必须进行每一种新抗体在应用于临床之前必须进行 实验验证实验验证 严格执行实验室的严格执行实验室的SOPSOP 日常质控:抗原修复液的日常质控:抗原修复液的PHPH、抗原修复温、抗原修复温 度等实验条件的质控度等实验条件的质控 实验对照:阳性、阴性组织对照及阴性试实验对照:阳性、阴性组织对照及阴性试 剂对照剂对照(2 2)结果解释)结果解释 在不同的观察者之间甚至专家之间所判断在不同的观察者之间

    5、甚至专家之间所判断 的结果有差异这一现象已有所报道的结果有差异这一现象已有所报道 然而,仔细和准确的染色评估是免疫组化然而,仔细和准确的染色评估是免疫组化 质量保证的重要因素质量保证的重要因素 病理医生必须知道结果解释中的陷阱包括病理医生必须知道结果解释中的陷阱包括 假阳性、假阴性结果的原因假阳性、假阴性结果的原因 避免错误结果解释的原则避免错误结果解释的原则a a、观察每一种抗体的阳性和阴性组织对照、观察每一种抗体的阳性和阴性组织对照,确保无非特异性染色存在,确保无非特异性染色存在b b、仔细观察阴性试剂对照,确保无染色,以、仔细观察阴性试剂对照,确保无染色,以识别内源性生物素、色素等非特异

    6、性染色识别内源性生物素、色素等非特异性染色c c、只有保存好的组织的结果解释可靠,要注、只有保存好的组织的结果解释可靠,要注意组织干片、标本边缘电灼效应、大块组织意组织干片、标本边缘电灼效应、大块组织中央处理不好、坏死自溶等对染色的影响中央处理不好、坏死自溶等对染色的影响d d、阳性染色要注意判断预期的染色模式、阳性染色要注意判断预期的染色模式预期的抗体染色模式预期的抗体染色模式 Homogeneous:S100 Filamentous:Cytokeratins Granular:Chromogranin A Uniform:TTF-1 Focal:GCDFP-15核染色的抗体核染色的抗体 细

    7、胞周期相关蛋白细胞周期相关蛋白(Ki67)细胞核转录因子细胞核转录因子 (TTF-1)肿瘤抑制基因产物肿瘤抑制基因产物(p53、BcL-2)细胞核相关的酶细胞核相关的酶(TdT,HMLH1)类固醇激素受体类固醇激素受体(ER(ER,PRPR,AR)AR)钙修饰蛋白钙修饰蛋白 (S100)细胞膜染色的抗原细胞膜染色的抗原 细胞粘附分子细胞粘附分子(E-cadherin)和细胞骨架连和细胞骨架连 接分子接分子(B-catenin)跨膜受体跨膜受体(HER2/neu)大多数的白血病抗原大多数的白血病抗原(CDs)乳腺浸润性微乳头状癌乳腺浸润性微乳头状癌EMAEMA表达表达对非预期的染色模式应视为结果

    8、不确定,相对非预期的染色模式应视为结果不确定,相比之下由内源性生物素引起的非特异性染色比之下由内源性生物素引起的非特异性染色表现为典型的弥漫性分布,可能强染色而且表现为典型的弥漫性分布,可能强染色而且无细胞与细胞之间的染色变化无细胞与细胞之间的染色变化e e、对无阳性内对照的阴性结果要怀疑,如、对无阳性内对照的阴性结果要怀疑,如ERER,对无阳性内对照(如,对无阳性内对照(如P53P53)或无肿瘤组织)或无肿瘤组织的标本要重新染色或更换蜡块,尤其在非预的标本要重新染色或更换蜡块,尤其在非预期的阴性结果的时候期的阴性结果的时候f f、注意任何一个非预期的结果:、注意任何一个非预期的结果:抗原异常

    9、表达、非预期的染色模式的常见原抗原异常表达、非预期的染色模式的常见原因是免疫组化做错,应更换蜡块重染;抗体因是免疫组化做错,应更换蜡块重染;抗体组合应用与鉴别诊断组合应用与鉴别诊断常见问题的处理常见问题的处理分析后分析后 免疫组化报告免疫组化报告报告指南报告指南a a、所有的免疫组化染色资料不管对诊断重要、所有的免疫组化染色资料不管对诊断重要与否都必须报告与否都必须报告b b、报告还应该包括标本的类型及所用试剂,、报告还应该包括标本的类型及所用试剂,如抗体的克隆号等如抗体的克隆号等c c、免疫组化报告要包括所有的染色结果,、免疫组化报告要包括所有的染色结果,并解释所有的染色信息,如染色强度、面

    10、积并解释所有的染色信息,如染色强度、面积及亚细胞分布即染色定位。及亚细胞分布即染色定位。现行染色强度的报告标准:现行染色强度的报告标准:强染色强染色-4X-4X或或10X10X视野可见明显的阳性染色;视野可见明显的阳性染色;弱染色弱染色-只在只在40X40X视野可见染色信号;视野可见染色信号;染色阳性细胞百分数,以染色阳性细胞百分数,以0-4+0-4+计数:计数:除除ERER、PRPR、HER2HER2、P53P53、Ki67Ki67外其他抗体适用外其他抗体适用0 0:即阴性,无阳性染色细胞存在;:即阴性,无阳性染色细胞存在;1+1+:阳性染色细胞:阳性染色细胞1-25%1-25%;2+2+:

    11、阳性染色细胞:阳性染色细胞26-50%26-50%;3+3+:阳性染色细胞:阳性染色细胞51-75%51-75%;4+4+:阳性染色细胞:阳性染色细胞76-100%76-100%。HER2HER2对乳腺癌患者适用:对乳腺癌患者适用:0 0:无阳性染色细胞,为阴性;:无阳性染色细胞,为阴性;1+1+:10%10%的浸润性癌细胞出现弱的一致性的完整的浸润性癌细胞出现弱的一致性的完整的的细胞膜染色,或任何比例弱的、不完整的细胞膜染细胞膜染色,或任何比例弱的、不完整的细胞膜染色,为阴性;色,为阴性;2+2+:10%10%的浸润性癌细胞不一致性完整的、弱的的浸润性癌细胞不一致性完整的、弱的细细胞膜染色,

    12、或胞膜染色,或30%30%的细胞强的、完整的细胞膜染色的细胞强的、完整的细胞膜染色,为不确定;,为不确定;3+3+:30%30%的浸润性癌细胞一致性的强的完整的细的浸润性癌细胞一致性的强的完整的细胞胞膜染色,为阳性。膜染色,为阳性。P53P53、Ki67Ki67适用:适用:0 0:即阴性,无阳性染色细胞存在;:即阴性,无阳性染色细胞存在;1+1+:阳性染色细胞:阳性染色细胞5%5%;2+2+:阳性染色细胞:阳性染色细胞5-9%5-9%;3+3+:阳性染色细胞:阳性染色细胞10-49%10-49%;4+4+:阳性染色细胞:阳性染色细胞50%50%。以上分级标准参考以上分级标准参考CAPImmun

    13、ohistochemisty Survey MKCAPImmunohistochemisty Survey MK中的计分系统中的计分系统ERER、PRPR适用适用Allred scoring:TS2Allred scoring:TS2为阳性为阳性d d、免疫组化报告应结合最初的外科病理报、免疫组化报告应结合最初的外科病理报告,并将染色结果整合到最终的诊断报告中告,并将染色结果整合到最终的诊断报告中3 3、免疫组化的临床应用、免疫组化的临床应用a a、疾病诊断与鉴别诊断、疾病诊断与鉴别诊断b b、预后判断、预后判断c c、指导治疗、指导治疗 应用原则应用原则a a:HEHE形态学为基础形态学为基

    14、础b b:应用抗体做辅助诊断时尽可能应用抗体组:应用抗体做辅助诊断时尽可能应用抗体组合避免错误诊断合避免错误诊断c c:注意人为的陷阱:注意人为的陷阱d d:抗体组合要合理,在解释结果时,要对每:抗体组合要合理,在解释结果时,要对每一种抗体的染色结果做出合理、科学的解释一种抗体的染色结果做出合理、科学的解释e e:免疫组化结果与:免疫组化结果与HEHE形态学相矛盾时,应形态学相矛盾时,应结合形态学结果综合判断,不能只应用免疫结合形态学结果综合判断,不能只应用免疫组化做诊断组化做诊断 未知原发部位转移癌的诊断未知原发部位转移癌的诊断 CKCK:有用的上皮性标记:有用的上皮性标记 但可表达于以下肿瘤但可表达于以下肿瘤 肉瘤肉瘤-SS-SS、ESES、MHFMHF 生殖细胞肿瘤生殖细胞肿瘤-胚胎性癌、绒毛膜癌胚胎性癌、绒毛膜癌 黑色素瘤黑色素瘤-特别是转移性特别是转移性 淋巴瘤淋巴瘤CK7/CK20CK7/CK20CK+/Vimentin+CK+/Vimentin+的癌的癌未分化恶性肿瘤的主要筛选抗体未分化恶性肿瘤的主要筛选抗体+:几乎总是阳性;:几乎总是阳性;S:S:有时阳性;有时阳性;N N:阴性;:阴性;R R:很少阳性:很少阳性Thank you for your attention

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