大学课程植物组织培养3培养基组培课件.ppt

1、培 养 基引言不同的培养材料对营养的要求不同，因此不同的培养材料对营养的要求不同，因此才有不同的培养基配方。才有不同的培养基配方。只含有化学成分已知的化合物的培养基叫只含有化学成分已知的化合物的培养基叫做做“合成培养基合成培养基”。但是，由于培养基制备过程中可能发生的但是，由于培养基制备过程中可能发生的化学反应，将导致培养基最终成分的变化学反应，将导致培养基最终成分的变化。化。严密的科学分析 经验积累生命是一个非常复杂的体系。培养基成分培养基成分作物必需的营养元素一般应符作物必需的营养元素一般应符合三个条件合三个条件:1 1所有作物都是不可缺少的所有作物都是不可缺少的;2 2其他元素不可代替的

2、其他元素不可代替的;3 3对作物起直接营养作用。对作物起直接营养作用。无机营养成分无机营养成分大量元素：氮、磷、硫、钙、钾、镁；微量元素：铁、锰、铜、锌、硼、钼；它们都是植物的生长所必需的，因植物对其需要的量而得名。国际植物生理协会建议：植物所需要的浓度大于0.5mmol/L的元素为大量元素，反之为微量元素。硝酸盐*无机氮供应当作为唯一氮源时，硝酸盐的作用要比铵盐好得多，但在单独使用硝酸盐时，培养基的PH值会向碱性方向漂移。若同时加入少量铵盐则会阻止这种漂移。注意在培养过程中pH值的变化，使得原本可利用的离子不能被利用。铵盐有机营养成分有机营养成分含氮物质硫胺素、吡哆醇、烟酸、泛酸钙、肌醇成分

3、不明化合物：水解酪蛋白（CH）、椰子汁（CM）等 应尽量避免使用碳源为什么需要碳源？最常用的碳源是蔗糖（2%5%）适合不同材料生长的碳源有所差别。植物激素 植物激素本质上讲属于生长调节物质，对其需求取决于不同的材料的内生激素水平。生长素正常生长的植物中生长素影响到茎和节间的伸长、向性、顶端优势和生根等现象。为什么高山生长的植物比较矮小？组织培养中生长素被用于诱导细胞的分裂和根的分化。常用的有IAA、IBA、NAA 等等细胞分裂素细胞分裂素影响到细胞分裂、顶端优势的变化和茎芽的分化等。（解除顶端优势对腋芽的抑制）组培中细胞分裂素可促进细胞分裂和由愈伤组织或器官上分化不定芽。常用细胞分裂素：BAP

4、（苄氨基嘌呤）、6-BA（苄基腺嘌呤）、激动素（呋喃氨基嘌呤）等。TDZ（棉花落叶剂）细胞分裂素活性物质赤霉素和脱落酸赤霉素（不常使用）低浓度时能促进矮生小植株茎节伸长；培养基中形成的不定胚正常发育成小植株。基于不同材料，脱落酸促进或抑制愈伤组织的生长。其它成分其它成分活性炭特点：功能：促进或抑制有吸附性选择性低硝酸银Ag+竞争性结合于细胞膜上的乙烯受体蛋白，从而起到抑制乙烯活性的作用。低浓度硝酸银可能引起细胞坏死，坏死细胞产生乙烯。不要把培养物长期保存在含硝酸银的培养基上。培养物原基一旦形成，即可丢掉硝酸银。抗生素注意问题应尽量避免使用。针对性结合使用抑制材料的生长发育停用后污染率增高微型花

5、卉琼脂及其它固化剂浓度适当确保培养基硬度适中。研究营养需求时避免使用琼脂（成分不纯）。pH灭菌之前培养基通常调节到5.06.0。通常pH值大于6培养基过硬；低于5则凝固不好。经过高温灭菌后，ph通常会下降0.61.3个单位培养基培养基的选择的选择根据前面所讲内容，请提出构建某种植物根据前面所讲内容，请提出构建某种植物（比如，君子兰）合适培养基的设计思路（比如，君子兰）合适培养基的设计思路。由已被广泛采用的基本培养基开始，经系列梯度实验探索得出。广谱实验法。4大类组分：无机盐、生长素、细胞分裂素和有机营养物质。（3X3X3X3）根据相对近缘物种的已知培养条件，尽可能地缩小选择范围培养基的制备浓缩

6、液的保存用去离子水注意：当培养基为均匀液态时才能分装。保持无菌。做好标记玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗培养基的类型、成分、配方的确定培养基的类型、成分、配方的确定培养基的制备记录培养基的制备记录培养基成分的称取培养基成分的称取培养基各成份的混合和溶化培养基各成份的混合和溶化培养基培养基pHpH的初步调整的初步调整培养基制备流程培养基制备流程培养基的过滤澄清培养基的过滤澄清培养基的分培养基的分装装培养基的灭菌培养基的灭菌培养基的质量测试培养基的质量测试培养基的保存培养基的保存（培养基应存放于冷暗处，最好能放（培养基应存放于冷暗处，最好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周，倾注的平板培养基不宜超过周，倾注的平板培养基不宜超过3 3天。天。每批培养基均必须附有该批培养基制每批培养基均必须附有该批培养基制备记录副页或明显标签。）备记录副页或明显标签。）要求：1 复习讲授内容，熟悉培养基制备的操作规程