免疫细胞功能检测技术医学课件.ppt
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1、第十五章第十五章 免疫细胞功能检测技术免疫细胞功能检测技术第一节第一节 淋巴细胞的功能检测淋巴细胞的功能检测 淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应;体抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应;体外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定细胞分泌产物的测定 淋巴细胞淋巴细胞T T细胞(负责细胞免疫功能)细胞(负责细胞免疫功能)B B
2、细胞(执行体液免疫功能)细胞(执行体液免疫功能)NKNK细胞(非特异性免疫作用)细胞(非特异性免疫作用)一、一、T细胞功能的检测细胞功能的检测T T细胞增殖试验细胞增殖试验T T细胞分泌功能测定细胞分泌功能测定T T细胞介导的细胞毒试验细胞介导的细胞毒试验体内试验体内试验(一)(一)T T淋巴细胞增殖试验淋巴细胞增殖试验1.1.原理:原理:淋巴细胞淋巴细胞DNADNA合成合成分化分化母细胞母细胞刺激物刺激物细胞变大细胞变大细胞浆扩大细胞浆扩大空泡空泡核仁明显核仁明显核染色质疏松核染色质疏松2.2.淋巴细胞转化的刺激物淋巴细胞转化的刺激物非特异性刺激物:非特异性刺激物:PHA -TPHA -T细
3、胞细胞 ConA-TConA-T细胞细胞 PWM-TPWM-T、B B细细胞胞 LPS -BLPS -B细胞细胞特异性刺激物:特异性刺激物:异种抗原异种抗原 同种组织抗原同种组织抗原 3.3.检测方法检测方法 形态法:刺激物形态法:刺激物 淋巴细胞(淋巴细胞(4-64-6天)天)母细胞母细胞化化 同位素法:同位素法:PHA PHA 淋巴细胞(淋巴细胞(54h54h)DNADNA合成期合成期 +3 3HTdRHTdR掺入掺入 收集细胞收集细胞 检测检测射线射线 测定细胞内的测定细胞内的3H3HTdRTdR(1 1)形态学检查法)形态学检查法%100胞数转化和未转化的淋巴细转化的淋巴细胞数转化率方
4、法学评价:方法学评价:优点:形态学方法简便易行,普通光优点:形态学方法简便易行,普通光学显微镜便能观察结果,适于基层实验学显微镜便能观察结果,适于基层实验室应用。室应用。缺点:是依靠肉眼观察形态学变化,缺点:是依靠肉眼观察形态学变化,判断结果易受主观因素影响,重复性和判断结果易受主观因素影响,重复性和准确性较差。准确性较差。培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性(2 2)3H-TdR3H-TdR掺入法掺入法优点:优点:3H-TdR3H-TdR掺入法敏感性高,客观性掺入法敏感性高,客观性强,重复性好。强,重复性好。缺点:但需一定设备条件,同时还存在缺点:但需一定设备条件,同
5、时还存在放射性核素污染问题。放射性核素污染问题。均值对照孔A均值试验孔A570nm570nmSI 培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性MTT测吸光度(3)MTT(3)MTT 比色法比色法(二二)T)T细胞分泌功能测定细胞分泌功能测定 体外培养的体外培养的T T细胞经各种丝裂原或抗原刺细胞经各种丝裂原或抗原刺激后激后,分泌各种细胞因子分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平,以反映量、生物学活性或基因表达水平,以反映T T细细胞功能。胞功能。(三)(三
6、)T T细胞介导的细胞毒试验细胞介导的细胞毒试验1.1.原理:原理:靶细胞抗原靶细胞抗原T T细胞细胞观察杀伤活力观察杀伤活力致敏致敏CTLCTL靶细胞靶细胞形态学方法:淋巴细胞形态学方法:淋巴细胞+肿瘤细胞肿瘤细胞 计数计数残留肿瘤细胞残留肿瘤细胞2.2.方法方法意义:意义:肿瘤患者肿瘤患者CTLCTL杀伤肿瘤细胞的能力杀伤肿瘤细胞的能力 靶细胞51Cr洗涤去除游离的51Cr效应细胞测量上清液中释放的51Cr混合培养4-6小时5151CrCr释放法释放法(四四)体内试验体内试验特异性抗原皮肤试验特异性抗原皮肤试验PHAPHA皮肤试验皮肤试验 二、二、B细胞功能检测细胞功能检测B B细胞增殖能
7、力的试验细胞增殖能力的试验溶血空斑试验溶血空斑试验B B细胞抗体形成功能的检测细胞抗体形成功能的检测体内试验体内试验(一一)B)B细胞增殖能力的试验细胞增殖能力的试验抗抗IgMIgM细菌脂多糖细菌脂多糖SACSAC的的SPASPAB B细胞增殖细胞增殖形态学形态学3 3H HTdRTdR掺入法掺入法(二二)溶血空斑试验溶血空斑试验1.1.原理:原理:2.2.方法学:方法学:经典溶血空斑形成试验经典溶血空斑形成试验被动溶血空斑试验被动溶血空斑试验 3 3临床应用与评价临床应用与评价溶血空斑试验主要用于测定药物和溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响手术等因素对体液免疫功能的
8、影响评价免疫治疗或免疫重建后机体产评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。生抗体的能力。(三三)B B细胞抗体形成功能的检测细胞抗体形成功能的检测 酶联免疫斑点法酶联免疫斑点法1.原理:原理:2 2应用与方法学评价:应用与方法学评价:该方法既可检测抗体分泌细胞,又可检该方法既可检测抗体分泌细胞,又可检测抗体分泌量。测抗体分泌量。优点:优点:稳定、特异、抗原用量少;稳定、特异、抗原用量少;可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌,并可定可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌,并可定量;可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。量;可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。(四四)体内试验体内试验体内抗体产生的
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