一轮复习课件选修1生物技术实践模块-.ppt

1、考纲解读考纲解读n1.微生物的实验室培养n2.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数n3.分解纤维素的微生物的分离n4.细菌的结构和繁殖n5.病毒的结构和增殖n6.微生物需要的营养物质及功能n7.培养基的配制原则n8.培养基的种类 考点考点1 1 微生物的利用微生物的利用（一一）培养基培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质称生长繁殖的营养基质称 培养基培养基一般的培养基均需要碳源、氮一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水等源、无机盐和水等培养基的基本成分培养基的基本成分 液体培养基（一般用锥形瓶盛装）液体培养基（一般用

2、锥形瓶盛装）固体培养基（一般用试管或培养皿盛装），在液体固体培养基（一般用试管或培养皿盛装），在液体培养基的基础上再添加琼脂。培养基的基础上再添加琼脂。培养基的种类培养基的种类2、理解培养基的种类及应用（适当补充）按物理状态不同划分按物理状态不同划分固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基按化学组成不同划分：合成培养基按化学组成不同划分：合成培养基/天然培养基天然培养基按用途不同划分按用途不同划分鉴别培养基鉴别培养基选择培养基选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基 分离金黄

3、色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌只有尿素作为惟一氮源的培养基只有尿素作为惟一氮源的培养基 分离出分解尿素的细菌分离出分解尿素的细菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌分离固氮菌只有纤维只有纤维素素作为惟一碳源的培养基作为惟一碳源的培养基 分离分解纤维素的细菌分离分解纤维素的细菌加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞选择培养基做一些适当的补充（二二）无菌技术无菌技术 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术。所有防止杂菌污染的方法技术。获得纯净培养物的关键是防

4、止外来杂菌的入侵，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术就是防止杂菌污染的操作技术。无菌技术就是防止杂菌污染的操作技术。灭菌方法灭菌方法适用对象适用对象所需条件所需条件灭菌时间灭菌时间灼烧灭菌灼烧灭菌接种金属用具、试管接种金属用具、试管口、瓶口口、瓶口在酒精灯火焰的充在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧分燃烧层灼烧直至烧红直至烧红干热灭菌干热灭菌能耐高温并需要保持能耐高温并需要保持干燥的玻璃器皿、金干燥的玻璃器皿、金属用具等属用具等干热灭菌箱内，干热灭菌箱内，160170OC中中12h高压蒸汽高压蒸汽灭菌灭菌培养基、实验器具等培养基、实验器具等100kPa，121OC1530min消毒消毒

5、 无菌技术的种类无菌技术的种类灭菌灭菌 使用较为温和的方法（酒精、紫外线）来杀使用较为温和的方法（酒精、紫外线）来杀死部分对人体有害的微生物。死部分对人体有害的微生物。对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒；清洁消毒；将培养皿、接种用具进行灭菌；将培养皿、接种用具进行灭菌；接种的过程要在酒精灯附近进行。接种的过程要在酒精灯附近进行。使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。有微生物（包括芽孢和孢子）。（一一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.牛肉膏蛋白胨固体培养

6、基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方物质物质牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaClNaCl琼脂琼脂水水重量重量5g5g10g10g5g5g20g20g定溶至定溶至100mL100mL2.2.基本过程：称量基本过程：称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板 高压锅灭菌高压锅灭菌冷却到冷却到50OC左右时倒左右时倒基本过程：称量基本过程：称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板分离分解尿素的细菌分离分解尿素的细菌：培养基中加入尿素为：培养基中加入尿素为唯一氮源唯一氮源分离分解分离分解纤维素纤维素的的微生物：培养基中加入纤微生物：培养基中加入纤维素为唯一碳源维素为唯一碳源倒平板操作的讨论倒平板操作的讨论 1.1.培养基灭菌后

7、要冷却到培养基灭菌后要冷却到5050O OC C时倒平板。用时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？什么办法来估计培养基的温度？用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。即可开始倒平板。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养

8、基表表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。养基，造成污染。4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。（二二）纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌 微生物接种

9、方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。1.1.平板划线法平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面（操作如教将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面（操作如教材材1818页图示）。页图示）。在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称眼可见的子细胞群体称菌落菌落。优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离缺点：不能计数缺点：不能计数一般用于分离微

10、生物的纯种一般用于分离微生物的纯种 1、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通

11、过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后仍然要灼烧接种环，渐减少，以便得到菌落。划线结束后仍然要灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。感染操作者。平板划线法的讨论平板划线法的讨论 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从

12、上一次划线的末端开始划线？是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。而来的菌落。2.2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里

13、，聚集在一起的微生物将分在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操作和涂布平板操作。作和涂布平板操作。优点：可以计数，可以观察菌落特征。优点：可以计数，可以观察菌落特征。缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。效果不好，容易蔓延。一般用于平板培养基的回收率计数一般用于平板培养基的回收率计数 系列稀释操作系列稀释操作101102103104105106(1

14、)(1)将分别盛有将分别盛有9mL9mL水的试管灭菌并编号。水的试管灭菌并编号。(2)(2)用移液管吸取用移液管吸取1mL1mL培养的菌液，注入第二支试管中，培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。(3)(3)从从10101 1倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1mL1mL稀释液，注入第三支试稀释液，注入第三支试管中，重复步骤管中，重复步骤2 2，直至到第六支试管。，直至到第六支试管。涂布平板操作涂布平板操作(1)(1)将涂布器浸在盛有将涂布器浸在盛有7070的酒精的烧杯中。的酒精的烧杯中。(2)(2)取少量菌液（不超取少量菌液（不超

15、0.1mL0.1mL），滴加到培养基表），滴加到培养基表面。面。(3)(3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷却却8 810s10s。(4)(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布平板操作讨论涂布平板操作讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2 2步应如何步应如何进行无菌操作？进行无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与。例

16、如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。管要在酒精灯火焰周围；等等。将接种后和未接种（作为对照组）的培养基均将接种后和未接种（作为对照组）的培养基均放到放到37370 0C C的恒温箱中，培养的恒温箱中，培养121224h24h后进行观察并后进行观察并记录结果。记录结果。1.1.未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？落生长，说明了什么？未接种的培养基在恒温箱中保温未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落生长，后无菌落

17、生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。2.2.在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独立的在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独立的菌落？它们的大小、形状、颜色相似？菌落？它们的大小、形状、颜色相似？如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、形状、颜色相似的菌落。形状、颜色相似的菌落。3.3.培养培养12h12h和和24h24h后，观察到的实验结果相同吗？如后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？果不同，请分析产生差异的原因？培养培养12 h12 h与与24 h24 h后

18、的大肠杆菌菌落的大小会有明显不后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。4.4.如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。其可能的原因。无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。污染。1.1.试管低温临时保存试管低温临时保存 将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，培养成菌落将菌种接种到试管的固体

19、斜面培养基上，培养成菌落后，置于后，置于4 4OC C的冰箱中保存（每隔的冰箱中保存（每隔3 36 6个月要重新接种培个月要重新接种培养后再保存）。养后再保存）。2.2.甘油管长期保存甘油管长期保存 在在3mL3mL的甘油瓶中加入的甘油瓶中加入1mL1mL的甘油，高压灭菌。将的甘油，高压灭菌。将1mL1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，置于培养的菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，置于2020OC C的的冷冻箱中保存。冷冻箱中保存。（一一）筛筛 选选 菌菌 株株原理原理 人为提供有利于目的菌株的条件（包括营养、温度、人为提供有利于目的菌株的条件（包括营养、温度、pHpH等），同时抑制或阻止

20、其他微生物生长。等），同时抑制或阻止其他微生物生长。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养选择培养基。基。1.1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是什么物质？氮源的分别是是什么物质？碳源是葡萄糖，氮源是尿素。碳源是葡萄糖，氮源是尿素。2.2.分析该配方的培养基对微生物是否具有筛选作用？分析该配方的培养基对微生物是否具有筛选作用？如果有，又是如何进行筛选的？如果有，又是如何进行筛选的？能分

21、解尿素的细菌的筛选能分解尿素的细菌的筛选 阅读教材阅读教材2222页第一大段相关内容，并思考回答下列页第一大段相关内容，并思考回答下列问题：问题：有筛选作用，它的氮源只含有尿素，只有能合成分有筛选作用，它的氮源只含有尿素，只有能合成分解尿素的脲酶的细菌才能生长。解尿素的脲酶的细菌才能生长。（二二）统计菌落数目统计菌落数目原理原理 运用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。运用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够高统计菌落数目的理论依据是：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液

22、中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30 30 300300的平板进的平板进行计数。行计数。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学设置了重复组，涂布了不具有说服力。第二位同学设置了重复组，涂布了3 3个平板，但是，个平板，但是，其中其中1 1个平板的计数结果与另个平板的计数

23、结果与另 2 2个相差太远，说明在操作过程中可个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将能出现了错误，因此，不能简单地将3 3个平板的计数值用来求平均个平板的计数值用来求平均值。值。在设计实验时，一定要涂布至少在设计实验时，一定要涂布至少3 3个平板，作为重个平板，作为重 复组，才复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否基本一致，结果不一致，意味着操作有误，设置的重复组的结果是否基本一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。需要重新实验。阅读教材阅读教材2222页

24、页“（二）统计菌落数目（二）统计菌落数目”一段，并讨一段，并讨论教材中提出的问题。论教材中提出的问题。（三三）设设 置置 对对 照照 A A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。一是由于同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。一是由于土样不同，二是由于培养基污染或培养基混有其它氮源。究竟是土样不同，二是由于培养基污染或培养基混有其它氮源。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。一种方案是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。一种方案是可以接种其它菌种，看是否有菌落的出现，验证培养基是否混有可以接种其它菌种，看是否有菌落的出现，验证培养基是否混有其它氮源。另一种方案

25、是将其它氮源。另一种方案是将A A同学配制的培养基在不加土样的情况同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。所以，在实验中一般都应设置对照组，使实验更有说服力。所以，在实验中一般都应设置对照组，使实验更有说服力。阅读教材阅读教材22222323页页“（三）设置对照（三）设置对照”一段，并讨论一段，并讨论教材中提出的问题。教材中提出的问题。阅读教材阅读教材23232525页页“实验设计实验设计”和和“操作提操作提示示”等两个内容，请根据教材提供的三个资料、等两个内容，请根据教材提供的三个资料、样品的稀释

26、和稀释液的取样培养流程示意图及样品的稀释和稀释液的取样培养流程示意图及“操作提示操作提示”的有关问题，自行设计一个的有关问题，自行设计一个土壤土壤中分解尿素的细菌的分离与计数中分解尿素的细菌的分离与计数这样的一个实这样的一个实验。验。实验设计实验设计1.1.实验名称实验名称土壤中某样品细菌的分离与计数2.2.实验目的（略）实验目的（略）3.3.材料用具（略）材料用具（略）4.4.操作步骤操作步骤 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去（铲已经过消从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去（铲已经过消毒处理）表层土毒处理）表层土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先消毒左右，再取样，将样品装入事先消毒过的信封

27、中。过的信封中。（1 1）土壤取样）土壤取样 准备牛肉膏蛋白胨培养基（作为对照组）和选择培养准备牛肉膏蛋白胨培养基（作为对照组）和选择培养基。将菌液稀释相同的倍数（见教材基。将菌液稀释相同的倍数（见教材2323页页“样品稀释流程样品稀释流程示意图示意图”）。稀释倍数为）。稀释倍数为 10103 3 10107 7。每个稀释度均用。每个稀释度均用3 3个个选择培养基，选择培养基，1 1个牛肉膏蛋白胨培养基，共需要个牛肉膏蛋白胨培养基，共需要1515个选择个选择培养基，培养基，5 5个牛肉膏蛋白胨培养基（都作好标记）。个牛肉膏蛋白胨培养基（都作好标记）。（2 2）制备培养基）制备培养基（3 3）高

28、温消毒）高温消毒 将准备好的培养基和将准备好的培养基和8 8支试管、一支移液管（用纸包支试管、一支移液管（用纸包好）放到高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌处理。好）放到高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌处理。将将10 g10 g土样加入盛有土样加入盛有90 mL90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中无菌生理盐水的锥形瓶中（锥形瓶体积为（锥形瓶体积为250 mL250 mL），充分摇匀，吸取上清液），充分摇匀，吸取上清液1mL1mL，转移至盛有转移至盛有9 mL9 mL的生理盐水的无菌大试管中，依次等比的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至稀释至10107 7稀释度，并按照由稀释度，并按照由10107 710103 3

29、稀释度的顺序分别稀释度的顺序分别吸取吸取0.1mL0.1mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板。涂布平板。（4 4）微生物的培养与观察）微生物的培养与观察 将涂布好的培养皿放在将涂布好的培养皿放在3030温度下培养。随着培养时温度下培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。比较牛肉膏培养基和选间的延长，会有不同的菌落产生。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否产生如

30、课本中图基的斜面中，观察能否产生如课本中图2-102-10的颜色反应。的颜色反应。（5 5）细菌的计数）细菌的计数 选取菌落数在选取菌落数在3030300300的平板进行计数。在同一稀释度的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对下，至少对3 3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。1.1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落是否筛选出菌落 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明

31、培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。养基已筛选出一些菌落。2.2.样品的稀释操作是否成功样品的稀释操作是否成功 如果得到了如果得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在3030300300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。菌落的计数。3.3.重复组的结果是否一致重复组的结果是否一致 如果各位同学选取的是同一种土样，统计的如果各位同学选取的是同一种土样，统计的结果应该接近

32、。如果结果相差太远，则需要从各结果应该接近。如果结果相差太远，则需要从各项操作过程中去分析、寻找可能的原因。项操作过程中去分析、寻找可能的原因。能分解尿素的细菌的鉴定能分解尿素的细菌的鉴定鉴定的原理：鉴定的原理：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，会使培养基的pHpH升升高。高。鉴定方法：鉴定方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，利在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，利用此培养基进行细菌培养，观察培养基的颜色变化。用此培养基进行细菌培养，观察培养基的颜色变化。分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离（一一）纤维素与纤维素酶纤维素与

33、纤维素酶：一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，广泛地存在于植物的根、茎、叶等器官中。广泛地存在于植物的根、茎、叶等器官中。：由微生物分泌的一种复合酶，包括由微生物分泌的一种复合酶，包括酶酶、酶和葡萄糖苷酶，由于它们的协同作用，最终将纤维素分酶和葡萄糖苷酶，由于它们的协同作用，最终将纤维素分解成葡萄糖。解成葡萄糖。纤维素纤维素酶酶酶酶纤维二糖纤维二糖葡萄糖葡萄糖苷苷 酶酶葡萄糖葡萄糖取二支取二支20mL20mL的试管的试管实验：实验：纤维素酶分解纤维素的实验纤维素酶分解纤维素的实验各加入一张滤纸条各加入一张滤纸条各加入各加入10mL0.1mol/L10

34、mL0.1mol/L的醋酸的醋酸 醋酸钠缓冲液醋酸钠缓冲液甲甲 乙乙在甲试管中加入在甲试管中加入1mL1mL蒸馏水，蒸馏水，乙试管加入乙试管加入1mL1mL纤维素酶纤维素酶将试管放在将试管放在140r/min140r/min的摇床上振荡的摇床上振荡1h1h结果：乙试管的滤纸条消失结果：乙试管的滤纸条消失 讨论讨论：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？什么？刚果红能与纤维素形成红色复合物，而不与刚果红能与纤维素形成红色复合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。（二二）纤维素分解菌的筛选纤维素分解

35、菌的筛选 用加入刚果红的纤维素培养基去培养微生物用加入刚果红的纤维素培养基去培养微生物时，如果培养基中出现以菌落为中心的透明圈时，时，如果培养基中出现以菌落为中心的透明圈时，可说明该菌落是纤维素分解菌，因为它已将被刚可说明该菌落是纤维素分解菌，因为它已将被刚 果红果红 染成红色的纤维素分解了。染成红色的纤维素分解了。请你根据实验流程图和提供的三个资料以及请你根据实验流程图和提供的三个资料以及“操作操作提示提示”，在思考有关问题的基础上，设计出一个详细的，在思考有关问题的基础上，设计出一个详细的实验方案。实验方案。土壤取样土壤取样选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释 将样品涂布在鉴别纤将样品涂布在鉴

36、别纤 维素分解菌的培养基上维素分解菌的培养基上 筛选产生透筛选产生透 明圈的菌落明圈的菌落阅读与思考阅读与思考阅读教材阅读教材28282929页页“资料一资料一”“资料资料三三”，并思考相关问题。，并思考相关问题。问题一问题一：是液体培养基，因为没有添加琼脂。是液体培养基，因为没有添加琼脂。问题二问题二：具有筛选作用，因为培养基中的碳源是纤维素，具有筛选作用，因为培养基中的碳源是纤维素，该培养基只有能分泌纤维素酶的纤维素分解菌才能生长。该培养基只有能分泌纤维素酶的纤维素分解菌才能生长。问题三问题三：“资料三资料三”中的两种方法各有哪些优点和不足，中的两种方法各有哪些优点和不足，你打算选哪一种？

37、你打算选哪一种？土壤中纤维素分解菌的分离土壤中纤维素分解菌的分离 1.1.土样采集土样采集：土样采集的方法与本专题课题土样采集的方法与本专题课题 2 2类似。类似。土样的采集要选择富含纤维素的环境，这是因为在纤维土样的采集要选择富含纤维素的环境，这是因为在纤维素含量丰富的环境，通常会聚集较多的分解纤维素的微素含量丰富的环境，通常会聚集较多的分解纤维素的微生物。如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，生物。如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，过一个月左右也会有能分解纤维素的微生物生长。过一个月左右也会有能分解纤维素的微生物生长。2.2.选择培养选择培养：选择培养需要的仪器有：选择培养

38、需要的仪器有：250 mL250 mL锥形锥形瓶、无菌称量瓶、药匙、瓶、无菌称量瓶、药匙、1 mL1 mL和和10 mL10 mL的移液管、天平、的移液管、天平、摇床、温度计等。摇床、温度计等。在在250 mL250 mL锥形瓶中装入锥形瓶中装入30 mL30 mL选择培养基，用选择培养基，用8 8层纱层纱布做成瓶塞，将瓶口塞紧，再在瓶塞外包裹两层包装纸，布做成瓶塞，将瓶口塞紧，再在瓶塞外包裹两层包装纸，用线绳扎紧，在用线绳扎紧，在121 121 下高压蒸汽灭菌下高压蒸汽灭菌20 min20 min。选择培养的操作：称取土样选择培养的操作：称取土样20 g20 g，在无菌条件下加，在无菌条件下

39、加入装有入装有30 mL30 mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在30 30 下振荡培养下振荡培养1 12 d2 d，至培养基变混浊，重复上述方法，至培养基变混浊，重复上述方法再培养一次，然后再进行梯度稀释和涂布平板。再培养一次，然后再进行梯度稀释和涂布平板。高考总复习高考总复习生物生物 3.3.刚果红染色法分离：刚果红染色法分离：纤维素分解菌这一步所需要的纤维素分解菌这一步所需要的仪器有：无菌培养皿、涂布器、仪器有：无菌培养皿、涂布器、1 mL1 mL移液管，装有移液管，装有9mL9mL无无菌水的菌水的20 mL20 mL大试管，温箱等。大试管，温箱等

40、。培养基的制备参照课本旁栏中的比例配制。在培养基的制备参照课本旁栏中的比例配制。在500 500 mLmL三角瓶中装入三角瓶中装入200 mL200 mL培养基，在培养基，在121 121 下高压蒸汽灭菌下高压蒸汽灭菌20 min20 min。倒平板操作：将灭菌后的固体培养基熔化，按无菌倒平板操作：将灭菌后的固体培养基熔化，按无菌操作的要求，在无菌的培养皿中倒入操作的要求，在无菌的培养皿中倒入151520 mL20 mL培养基，培养基，凝固后待用。凝固后待用。涂布平板：涂布平板：将稀释度为将稀释度为104104106106的菌悬液各取的菌悬液各取0.1 mL0.1 mL，滴加在平板培养基上，用

41、涂布器将菌液，滴加在平板培养基上，用涂布器将菌液涂布均匀，在涂布均匀，在3030倒置培养，至菌落长出。每个倒置培养，至菌落长出。每个稀释度下需涂布稀释度下需涂布3 3个平板，并注意设置对照。刚果个平板，并注意设置对照。刚果红染色的具体操作步骤参照课本资料三。红染色的具体操作步骤参照课本资料三。制备菌悬液：制备菌悬液：按照本专题课题按照本专题课题1 1的稀释操作方的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数至最大倍数至106106。1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落菌落 对照

42、的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维合格。如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。素的微生物。2.分离的结果是否一致分离的结果是否一致 由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌的数量，因由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌的数量，因此最容易分离得到的是细菌。但由于所取土样的环境不同，不同同此最容易分离得到的是细菌。但由于所取土样的环境不同，不同同学也可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。学也可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。n1、微生物的

43、实验室培养n2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数n3、分解纤维素的微生物的分离DNA重组技术重组技术下列不属于微生物的是 ()A蓝藻和蘑菇 B葫芦藓和铁线蕨 C噬菌体和黄曲霉 D放线菌和变形虫【解析】病毒、原核生物(例如细菌、放线菌、支原体、蓝藻)、真核类的藻类和真菌及原生动物都是微生物。而一般多细胞的植物与动物不属于微生物，如葫芦藓是苔藓植物，铁线蕨是蕨类植物，都属于多细胞高等植物。【答案】B微生物营养物质微生物营养物质有关微生物营养物质的叙述中，正确的是（）A是碳源的物质不可能同时是氮源 B凡碳源都提供能量C除水以外的无机物只提供无机盐 D无机氮源也能提供能量【解析】不同的微生物，所需营养

44、物质有较大差别，要针对微生物的具体情况具体分析。对于A、B选项，它的表述是不完整的。有的碳源只能是碳源，如CO2；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，还是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如CO2可作自养型微生物的碳源；NaHCO3可作自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。【答案】D微生物与病毒的关系微生物与病毒的关系关于病毒增殖的叙述中，正确的是（）A病毒侵入宿主细胞后，合成一种蛋白质 B病毒的繁殖只在宿主的

45、活细胞中进行C病毒的繁殖以核衣壳为单位 D在普通的培养基上能培养病毒【解析】解答此题需从以下几方面入手分析：首先，病毒是营寄生方式生活，必须生活在活的细胞内，不能独立生活，所以在普通的培养基上不能生活。第二，繁殖时，病毒的核酸进入宿主细胞，利用宿生的成分合成子代个体，除了核衣壳，还应包括该病毒的其他结构。合成的蛋白质不只是一种，应该是多种，包括多种结构蛋白质及物质合成时所需的多种酶。【答案】B培养基的种类培养基的种类要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用（）A加入青霉素的培养基 B加入高浓度食盐的培养基 C固体培养基 D液体培养基【解析】微生物的分离需使用固体培养基，由于某种细菌的种类不明，所

46、以难以使用选择培养基，如加入青霉素的培养基可以分离到酵母菌和霉菌，加入高浓度食盐的培养基可以分离到金黄色葡萄球菌。【答案】C微生物的计数微生物的计数产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是（）A一个细菌，液体培养基 B许多细菌，液体培养基C一个细菌，固体培养基 D许多细菌，固体培养基【解析】菌落是一个或几个细菌的子细胞群体，在固体培养基上，有一定的形态结构，肉眼可见，菌落可作为菌种鉴别的重要依据，而多种细菌形成的菌落，就不可能有比较标准的形态。【答案】C 考点考点2 2 植物组织培养与酶的研究植物组织培养与酶的研究考纲解读考纲解读n1.植物组织培养技术n2.菊花的组织培养n3.月季的花药培养

47、n4.酶活力测定的一般原理和方法n5.酶在食品制造和洗涤等方面的应用n6.制备和应用固定化酶，理解固定化酶和固定化 细胞的原理和方法n7.测定酶活力的简单方法n8.能够研究酶活性的因素n9.酶在生产生活中的应用 考向指南考向指南n本讲内容主要考查植物组织培养技术和生产过程中应用果胶酶的原理，注重事项及最适用量的探究；固定化酶、固定化细胞的制备及在生产中的应用。（1）植物组织培养的原理是细胞的全能性；（2）酶已广泛应用于食品、环保和化工等各个行业，取得了良好的经济效益。在必修课的基础上，通过实验研究影响酶活性的因素以及酶在日常生活和工业生产上的应用。考查有关酶的特性、酶的作用的条件等。如2008

48、年广东卷、天津卷、江苏卷、海南卷都有相关的考题出现。基础知识基础知识（一）植物组织培养的基本过程一）植物组织培养的基本过程 离体器官、组织或细胞 脱分化 愈伤组织 再分化 根、芽 植物体 植物的组织培养技术植物的组织培养技术n不同的植物组织不同的植物组织n同一植物的不同材料同一植物的不同材料n营养、环境条件营养、环境条件n植物激素植物激素（二）影响植物组织培养的因素（二）影响植物组织培养的因素n制备制备MS固体培养基固体培养基 1 1、配制母液、配制母液 2 2、配制培养基、配制培养基 3 3、灭菌、灭菌n外植体消毒外植体消毒n接种接种n培养培养n移栽移栽n栽培栽培实验操作实验操作结果分析与评

49、价结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（一）对接种操作中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再 分分化化（三）是否进行了统计、对照与记录（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格（四）生根苗的移栽是否合格基础知识基础知识 （一）被子植物的花粉发育（一）被子植物的花粉发育1、被子植物的花的结构是怎样的？、被子植物的花的结构是怎样的？2、观察下图，和减数分裂比较，你能指出对应的时期吗？、观察下图，和减数分裂比较，你能指出对应的时期吗？又有何特点？又有何特点？月季的花药培养月季的花药培养（二）产生花粉植株的两种途径（二）产

50、生花粉植株的两种途径有哪两种途径？原因是什么？有哪两种途径？原因是什么？花药中花药中的花粉的花粉花药中花药中的花粉的花粉胚状体胚状体愈伤组织愈伤组织丛芽丛芽丛芽丛芽生根生根移栽移栽花药培养产生花粉植株的两种途径花药培养产生花粉植株的两种途径（三）影响花药培养的因素（三）影响花药培养的因素1 1、材料的选择、材料的选择 不同植物不同植物 同一植物的不同生理状况同一植物的不同生理状况（花期早期初花期）（花期早期初花期）合适的花粉发育期合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间）（单核居中期与靠边期之间）此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等度等2 2