医学艾滋病实验室检测新技术课件.ppt
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- 医学 艾滋病 实验室 检测 新技术 课件
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1、医学艾滋病实验室检测新技术目的目的方法方法监测监测感染检测感染检测抗体检测抗体检测(EIA/PA/RT)检测策略检测策略窗口期检测窗口期检测抗原检测抗原检测,核酸检测核酸检测pooling RT-PCR诊断诊断感染诊断感染诊断WB检测策略检测策略近期感染诊断近期感染诊断STARSH方法方法治疗评价治疗评价CD4/CD8测定测定流氏仪检测流氏仪检测显微镜法显微镜法病毒载量测定病毒载量测定NASBA,b-DNA,RT-PCR耐药性检测耐药性检测基因型基因型,表型表型窗口期检测窗口期检测抗原检测抗原检测核酸检测核酸检测Pooling RT-PCR方法方法窗口期的范围窗口期的范围定义依据定义依据时间长
2、度时间长度抗体检测抗体检测3-6个月个月新的新的EIA试剂可以缩短至试剂可以缩短至14-21天天抗原检测抗原检测1-2周周第四代抗原抗体检测试剂可以第四代抗原抗体检测试剂可以使窗口期比第三代抗体试剂缩使窗口期比第三代抗体试剂缩短短4-5天天核酸检测核酸检测5-11天天抗原检测抗原检测P24试剂盒试剂盒,第四代第四代EIA试剂试剂(1997年在欧洲正式批年在欧洲正式批准用于血液筛查准用于血液筛查)每一个每一个HIV粒子含有粒子含有1200个个p24抗原分子抗原分子=0.048fg每一个每一个HIV粒子含有粒子含有2个个RNA拷贝拷贝,如果病毒载量测如果病毒载量测定结果为定结果为400拷贝拷贝/m
3、l,即等于有即等于有2.4X105个分子个分子=0.0096pg p24抗原抗原/ml,800拷贝拷贝/ml,即等于有即等于有4.8X105个分子个分子=0.019pg p24抗原抗原/ml目前最敏感的抗原检测试剂盒的检测阈值为目前最敏感的抗原检测试剂盒的检测阈值为0.01pg/ml抗原在血清抗体阳转前抗原在血清抗体阳转前2-18天既可以检测到天既可以检测到样本样本(血清血清/浆浆)中的中的p24抗原包括游离的抗原和病毒粒子中抗原包括游离的抗原和病毒粒子中的抗原的抗原EIA测定的抗原浓度测定的抗原浓度(F):病毒病毒RNA拷贝数推算的抗原浓度拷贝数推算的抗原浓度(A)=0.16:2900样本号
4、样本号EIA(Cutoff)EIA(pg/ml)RNA拷贝拷贝/mlp24pg/ml F/A13.1 0.1 1,4000.033.124.7 0.16 37000.091.8345 1.5 11000.03564320 11 800001.95.6568 2.3 400000.962.4622 0.73 1900004.50.16样本经过预处理样本经过预处理,破碎病毒粒子后将有利于破碎病毒粒子后将有利于p24抗原的检测抗原的检测病毒病毒RNA检测检测第一次病毒学症高峰时间大约在感染后第一次病毒学症高峰时间大约在感染后4-11天天病毒病毒RNA检测方法检测方法:NASBA,RT-PCR,b-D
5、NA在高度怀疑有原发感染时在高度怀疑有原发感染时,且经抗体检测之后且经抗体检测之后抗体检测阴性或不确定抗体检测阴性或不确定,有高危行为史或暴露有高危行为史或暴露史史,特别是伴有相应的临床表现时特别是伴有相应的临床表现时,用核酸检用核酸检测进行辅助诊断。测进行辅助诊断。早期诊断应用早期诊断应用:个体检测、血液筛查、性病个体检测、血液筛查、性病门诊病人筛查、门诊病人筛查、PMTCTPooling RT-PCR由于核酸检测的成本很高由于核酸检测的成本很高,方法费时方法费时,不可能作为血不可能作为血液筛查的方法液筛查的方法,目前在欧洲用目前在欧洲用pooled血液的方法进行核酸血液的方法进行核酸检测检
6、测,其敏感性取决于其敏感性取决于pooped样本大小及检测的预值样本大小及检测的预值(用特用特殊的殊的RT-PCR试剂盒检测试剂盒检测,以提高敏感性以提高敏感性)。可能低于抗原。可能低于抗原检测检测,但在个体献血者核酸检测可能比抗原检测更具成本但在个体献血者核酸检测可能比抗原检测更具成本效益。效益。131 份 EIA+1342 份 EIA-1230 份抗体EIA-Pooled 1230 份抗原抗体联合 1473 份样本 65 份量不足 47 份溶血 1 份 HIV RNA+HIVEIA-WB-ab/abag(-)-PA(-)6 份抗原抗体联合+6EIA-1gp160 p17 6P24-HIV
7、RNA-1473份样本处理过程份样本处理过程 HIV RNA(copies/ml)HIV RNA(copies/ml)HIV Ab WB P24 HIV Ag/Ab 一级一级 Pool 251-300#1.65*103 NT NT NT NT NT 二级二级 Pool 251-260#1.40*104 NT NT NT NT NT 单样本单样本256#6.74*104 NT-新近感染检测新近感染检测抗体检测抗体检测EIA,PA,RTWB试验试验阴性阴性抗原检测抗原检测/核酸检测核酸检测阳性阳性STARSH新近感染新近感染STARHS法法1998年开始年开始,美国美国Janssen RS等专家推
8、出一种新的等专家推出一种新的实验室方法用于新感染病例的监测实验室方法用于新感染病例的监测,即敏感的酶联免疫检即敏感的酶联免疫检测法测法(3A11)和非敏感的酶联免疫检测法和非敏感的酶联免疫检测法(3A11LS):原理原理:利用感染早期抗体滴度低的特征利用感染早期抗体滴度低的特征,以敏感以敏感ELISA试剂试剂(3A11)和非敏感和非敏感ELISA试剂试剂(3A11-LS)对经过对经过一定程度稀释的同一样品进行测定一定程度稀释的同一样品进行测定,3A11检测呈阳性而检测呈阳性而3A11LS检测呈阴性反应者为新发感染检测呈阴性反应者为新发感染,与以往感染的病与以往感染的病例区分开来例区分开来,可以
9、确切地估测新感染人数。近几年可以确切地估测新感染人数。近几年,该方法该方法已在一些国家得到了应用已在一些国家得到了应用,为这些国家制定艾滋病预防控为这些国家制定艾滋病预防控制策略提供了准确和重要的技术支持。制策略提供了准确和重要的技术支持。检测新发或新近检测新发或新近HIV感染的目的感染的目的l l无须耗时并昂贵的前瞻性队列研究来识别早期感染。无须耗时并昂贵的前瞻性队列研究来识别早期感染。l l由单一的患病样本来估计人群发病率。由单一的患病样本来估计人群发病率。l l以新发感染的个体为研究或干预对象。以新发感染的个体为研究或干预对象。l l识别早期感染以进行早期治疗和临床关怀识别早期感染以进行
10、早期治疗和临床关怀l l评估预防措施和目标评估预防措施和目标l l监测亚型和药物抵抗株的传播监测亚型和药物抵抗株的传播l l找出适合疫苗实验的高危人群找出适合疫苗实验的高危人群 TARHS:新发新发HIV血清转换的血清转换的血清检测运算法则血清检测运算法则 暴露暴露 HIV+AIDS (1)敏感性试验敏感性试验 +(2)STARHS试验试验 _ +在同一时间应用两种不同试验分析血样来检测新发感染在同一时间应用两种不同试验分析血样来检测新发感染(1)敏感性试验敏感性试验(EIA)血清转换早期即可出现阳性血清转换早期即可出现阳性(2)非敏感性试验非敏感性试验(改调的改调的EIA:STARHS)血清
11、转换晚期才可出现阳性血清转换晚期才可出现阳性新发感染血清转换新发感染血清转换=EIA+&STARHS-STARHS试验的窗口期试验的窗口期 暴露暴露 EIA+Detuned EIA+AIDS 窗口期窗口期=从从EIA+到到detuned的的EIA+之间的时间之间的时间 在血清转换者有所不同在血清转换者有所不同,依赖于依赖于HIV的亚型和试验的亚型和试验 Organo Tekniaka,对亚型对亚型B,估计值为估计值为:90 3.3个月个月 75 4.0 50 5.1 25 6.4 10 8.2 Antibody titerDetection limit-less sensitiveDetect
12、ion limit-sensitiveWindowTime from infectionDetuned serologyPossible Effect of Non-B InfectionsT STARHS的应用条件的应用条件 非非AIDS病人病人AIDS病人有很低的抗体病人有很低的抗体水平水平,象血清阳转象血清阳转 非非HAART治疗治疗HAART治疗病人有治疗病人有很低的抗体水平很低的抗体水平,象血清阳转象血清阳转 抗体检测策略抗体检测策略监测监测:初筛初筛-复合复合-确认策略确认策略 EIA-EIA替代策略替代策略诊断诊断:初筛初筛-复合复合-确认策略确认策略 EIA-EIA-PA/RT
13、替代策略替代策略(VCT)WHO和和UNAIDS推荐的利用几种快速检测方法推荐的利用几种快速检测方法,在在HIV流行率不同的地区针流行率不同的地区针对对不同的目的而进行的不同的目的而进行的HIV诊断方法诊断方法目的目的 流行率流行率 策略策略血液筛查血液筛查 任何情况下任何情况下 1监测监测 10 110 2诊断诊断 征兆征兆/症状症状 30 1 30 2诊断诊断 症状症状 10 2 10 3策略策略1:用一种筛选试剂。出现阳性反应时可被认为是用一种筛选试剂。出现阳性反应时可被认为是HIV阳性。阳性。策略策略2:用两种筛选试剂。如果第一次检测出现阳性反应则用第二种试剂重复用两种筛选试剂。如果第
14、一次检测出现阳性反应则用第二种试剂重复,两种试剂检测结果均出现阳性反应时可被认为是两种试剂检测结果均出现阳性反应时可被认为是HIV阳性。阳性。策略策略3:用三种筛选试剂。三种试剂检测结果均为阳性时才可被认为是用三种筛选试剂。三种试剂检测结果均为阳性时才可被认为是HIV阳阳性。性。表表 5 5 卫生九卫生九 4 4 省替代策略与省替代策略与 WBWB 结果对比(结果对比(827827 份样本)份样本)进口第进口第 3 3 代代 ELISAELISA 试剂复测试剂复测 WBWB 结果结果 S/COS/CO 分布分布 例数例数 构成比构成比(%)阳性(符合率)阳性(符合率)不确定不确定 阴性阴性 1
15、.0=6/PA+1S/CO6PA+WB+127 4 WB-3 127 7 表表 4,12 个非高发省临床样本(个非高发省临床样本(145 份)替代策略和份)替代策略和 WB 检测的结果检测的结果 确认试验确认试验 筛查试验筛查试验(EIA+RT)阳性阳性 可疑可疑 阴性阴性+/+53 例例 45(84.91%)6(11.32%)2(3.77%)+/-92 例例 1(1.09%)4(15.22%)77(83.70%)诊断替代策略诊断替代策略1、HIV感染高流行地区的高危人群感染高流行地区的高危人群2、EIA-1+EIA-2+,且且2次检测次检测S/CO大于等于大于等于63、在、在2检测结果的基础
16、上检测结果的基础上+高特异性试剂检测高特异性试剂检测+衷心感谢参与本课题的研究人员和研究生衷心感谢参与本课题的研究人员和研究生参比室工作人员参比室工作人员:强来英强来英,肖瑶肖瑶,张桂云张桂云,裴丽健裴丽健,张辉张辉研究生研究生/进修生进修生:张棋张棋,左合拉左合拉,刘波刘波,冯基刚冯基刚现今医学分为传统医学、基于“生物-医学模式”近代发展起来的西医,20世纪西医又发展到“社会-心理-生物医学”或综合医学模式,后基因组时代系统生物学的兴起,形成了系统医学在全球的迅速发展,成为继传统医学、西医学之后中、西医学汇通的未来医学。当代中国医学类专业比较优秀的学校有北京大学、华中科技大学、郑州大学等学校
17、。中医即中国传统医药学,是现今医学分为传统医学、基于“生物-医学模式”近代发展起来的西医,20世纪西医又发展到“社会-心理-生物医学”(高血压心脏病糖尿病)或综合医学模式,后基因组时代系统生物学的兴起,(传染病丙肝乙肝甲肝)形成了系统医学在全球的迅速发展,成为继传统医学、西医学之后中、西医学汇通的未来医学。当代中国医学类专业比较优秀的学校有北京大学、(肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌)华中科技大学、郑州大学等学校。(肺血液血小板红血球白血球)中医即中国传统医药学,是形成于数千年前的中国,是建立在人们与疾病长期斗争的经验总结及阴阳五行、八纲脏腑辨证基础上,运用朴素辩证法及思辨推理方法,认识机体、自然、疾病三
18、者关系,发展起来的(传染病丙肝乙肝甲肝)一门以“功能人”包括功能脏器为概念的独特的医学哲学理论体系。(肺炎青霉素肝炎)在治疗上,除了药物外,还有针灸、推拿气功、(高血压心脏病糖尿病)耳针等特殊疗法,它是世界传统医学中最完善的一种医学理论体系。它为人类尤其为中国人民(肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌)健康和民族繁衍做出了巨大贡献。(肺血液血小板红血球白血球)西医学是最近三四百年来建立在解剖学、生物学及现代科学技术基础上、发展起来的一门以“解剖人、肉体人”为概念的、新兴的现代医学科学理论体系。主要采用科学实验方法,从宏观到微观,直至目前的分子基因层次水平,发展极为迅速,超过其它任何一门医学科学,成为世界医学史
19、上的主流。可见中西医学,一个是以“功能人”为概念的独特的哲学医学理论体系,一个是以“解剖人、肉体人”为概念的新兴的现代医学科学理论体系,二者都不是以完整人为研究对象的科学,从理论讲二者都不是科学的,势必影响各自发展。事实也证明这一切,(高血压心脏病糖尿病)中医长期停滞不前、(高血压心脏病糖尿病)疗效也不确实。西医尽管发展到目前的基因分子层次,但疾病发病率居高不下,对绝大部分疾病发病原因认识不清、发病机理弄不明白,治疗受到制约,在小小SARS、禽流感面前竟束手无策,在糖尿病、癌症、心脑血管疾病、尿毒症等相当多疾病面前更是不得不求助或借助中医治疗。一个是疗效不确实,一个是有些甚至相当多疾病无法治疗
20、,这就是中西医学结合的缘由。然而,由于二者是两套理论、两股道上跑的车(肺血液血小板红血球白血球),风马牛不相及,从理论上讲就没有结合的可能,只是形式上的融合罢了。(肺炎青霉素肝炎)故出现西医对治疗不了的疾病只好求助中医,而中医则往往采用西医诊断中医治疗,以及中西治疗法一块用的局面。(高血压心脏病糖尿病)至于(传染病丙肝乙肝甲肝)循证医学、比较医学、后现代医学、行为医学等所谓“医学”,都称不上一门独立的医学科学,关于这一点在灵魂医学有关章节中将有相关点评。总之,目前以中西医学为主的世界各种医学科学都存在不完整性的瑕疵,即都是以不完整的人为研究对象的医学科学,故不能解决目前存在于中西医学甚至人文社
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