浅谈开展血小板抗体检测项目的体会-PPT精选课件.ppt
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1、浅谈开展血小板抗体浅谈开展血小板抗体检测项目的体会检测项目的体会陈秉宇陈秉宇浙江省人民医院浙江省人民医院 输血科输血科2022-9-19浙江省人民医院浙江省人民医院 输血科输血科2一血小板抗体的简介一血小板抗体的简介二开展血小板抗体检测的目的和意义二开展血小板抗体检测的目的和意义三血小板抗体检测技术的简述三血小板抗体检测技术的简述四四 我院开展血小板抗体检测的简况我院开展血小板抗体检测的简况五五 如何应对血小板抗体检测阳性患者的体会如何应对血小板抗体检测阳性患者的体会六六 血小板抗体检测技术的应用拓展血小板抗体检测技术的应用拓展 六大方面六大方面2022-9-19浙江省人民医院浙江省人民医院
2、输血科输血科3一血小板抗体的简介一血小板抗体的简介(一)(一)血小板抗体的内涵:血小板抗体的内涵:(二)(二)目前杭州省级医院开展情况:目前杭州省级医院开展情况:(三)三点思考:(三)三点思考:(四)我们的观点:(四)我们的观点:2022-9-19浙江省人民医院浙江省人民医院 输血科输血科4一血小板抗体的简介一血小板抗体的简介(一)(一)血小板抗体的内涵:血小板抗体的内涵:1 1白细胞特异性和组织相容性抗体:白细胞特异性和组织相容性抗体:1 1)针对)针对HLA-类抗原(类抗原(HLA-A、HLA-B抗原和少量抗原和少量HLA-C抗原)的抗原)的 HLA-HLA-类抗体(类抗体(50-80%5
3、0-80%)。)。2 2)物价收费目录:编码)物价收费目录:编码260000016 260000016;项目名称;项目名称白细胞特异性和组织白细胞特异性和组织 相容性抗体检测;价格相容性抗体检测;价格9090元元/次。次。3 3)现医保限定支付范围:无限定支付范围;甲乙分类)现医保限定支付范围:无限定支付范围;甲乙分类甲。甲。2 2血小板特异性和组织相容性抗体:血小板特异性和组织相容性抗体:1 1)针对)针对血小板特异性抗原(血小板特异性抗原(HPA抗原)抗原)的的HPAHPA抗体(抗体(17-25%17-25%)。)。2 2)物价收费目录:编码)物价收费目录:编码260000017 2600
4、00017;项目名称;项目名称血小板特异性和组织血小板特异性和组织 相容性抗体检测;价格相容性抗体检测;价格9090元元/次。次。3 3)现医保限定支付范围)现医保限定支付范围限列入支付范围的器官移植;甲乙分类限列入支付范围的器官移植;甲乙分类甲。甲。参考文件:参考文件:浙江省基本医疗保险医疗服务项目名称浙江省基本医疗保险医疗服务项目名称,浙江省劳动和社会保障厅,浙江省劳动和社会保障厅,2019年版,第年版,第65页。页。浙江省医疗服务价格手册浙江省医疗服务价格手册(修订版),浙江省物价局、浙江省卫生厅,(修订版),浙江省物价局、浙江省卫生厅,2019年年12月版,第月版,第44页。页。202
5、2-9-19浙江省人民医院浙江省人民医院 输血科输血科5一血小板抗体的简介一血小板抗体的简介(二)(二)目前杭州省级医院开展情况:目前杭州省级医院开展情况:1)血小板抗体检测试剂注册时间:国家药监局,)血小板抗体检测试剂注册时间:国家药监局,2019年年4月月3日。日。2)我院开展时间:)我院开展时间:2019年年5月月26日;关注和准备时间日;关注和准备时间 约约10年。年。3)现在杭州,浙一医院、浙二医院、邵逸夫医院、浙江省)现在杭州,浙一医院、浙二医院、邵逸夫医院、浙江省中医院、中医院、浙江医院等相继开展。浙江医院等相继开展。2022-9-19浙江省人民医院浙江省人民医院 输血科输血科6
6、一血小板抗体的简介一血小板抗体的简介(三)三点思考:(三)三点思考:思考思考1:血小板特异性和组织相容性抗体:现医保限定支付范围血小板特异性和组织相容性抗体:现医保限定支付范围限列入限列入支付范围的器官移植,合理?支付范围的器官移植,合理?思考思考2:有关血型与配血的收费和有关血型与配血的收费和医保限定支付范围,医保限定支付范围,据了解没有征求医据了解没有征求医院输血科专家的意见,院输血科专家的意见,合理?合理?(据实地了解,浙江省(据实地了解,浙江省血型与配血的收费是上海的血型与配血的收费是上海的1/3,江西,江西1/3,且远低于西部地区,且远低于西部地区,合理?合理?)思考思考3:社会在进
7、步,医学在发展,管理部门和管理者的理念是否应该更社会在进步,医学在发展,管理部门和管理者的理念是否应该更新和创新?以适应社会和医学发展的需要。新和创新?以适应社会和医学发展的需要。2022-9-19浙江省人民医院浙江省人民医院 输血科输血科7一血小板抗体的简介一血小板抗体的简介(四)我们的观点:(四)我们的观点:1 患者和医院的输血安全重于泰山!患者和医院的输血安全重于泰山!2 输注血小板是临床治疗的重要手段,今后输注血小板是临床治疗的重要手段,今后 必将有更大发展。必将有更大发展。3 大行何不做小微?大行何不做小微?2022-9-19浙江省人民医院浙江省人民医院 输血科输血科8二开展血小板抗
8、体检测的目的和意义二开展血小板抗体检测的目的和意义 关于血小板抗体检测项目的说明关于血小板抗体检测项目的说明(2019-11-21)院医保办:院医保办:因血小板抗体引起的临床问题和疾病已引起全社会的严重因血小板抗体引起的临床问题和疾病已引起全社会的严重关注,成为临床亟待解决的问题。关注,成为临床亟待解决的问题。血小板抗体检测(或筛选)包括白细胞特异性和组织相容血小板抗体检测(或筛选)包括白细胞特异性和组织相容性抗体和血小板特异性和组织相容性抗体。性抗体和血小板特异性和组织相容性抗体。血小板抗体是引起临床非溶血性发热性输血反应的最主要血小板抗体是引起临床非溶血性发热性输血反应的最主要原因,非溶血
9、性发热性输血反应是临床很常见的输血不良反应,原因,非溶血性发热性输血反应是临床很常见的输血不良反应,文献报道输注红细胞为文献报道输注红细胞为26%,输注血小板为,输注血小板为2030%,多次,多次输血患者高达输血患者高达 2763,而非溶血性发热性输血反应与血,而非溶血性发热性输血反应与血小板抗体密切相关,是影响临床安全输血的严重因素。血小板小板抗体密切相关,是影响临床安全输血的严重因素。血小板抗体的检测对于预防和减少非溶血性发热性输血反应非常有意抗体的检测对于预防和减少非溶血性发热性输血反应非常有意义。义。2022-9-19浙江省人民医院浙江省人民医院 输血科输血科9二开展开展血小板抗体检测
10、的目的和意义二开展开展血小板抗体检测的目的和意义 血小板抗体是临床引起免疫性血小板输注无效的最血小板抗体是临床引起免疫性血小板输注无效的最主要原因,文献报道主要原因,文献报道2080%多次输血的患者出现免疫性多次输血的患者出现免疫性血小板输注无效,血小板输注无效会导致昂贵的血液和医血小板输注无效,血小板输注无效会导致昂贵的血液和医疗资源的极大浪费,同时给患者造成较大的经济损失和身疗资源的极大浪费,同时给患者造成较大的经济损失和身体损害。体损害。血小板抗体的检测是临床诊断和治疗与血小板抗体血小板抗体的检测是临床诊断和治疗与血小板抗体有关的疾病的重要依据。有关的疾病的重要依据。鉴于血小板抗体对临床
11、的重要价值,为此该项目得鉴于血小板抗体对临床的重要价值,为此该项目得到今年到今年11月月1日卫生厅质量检查组的充分肯定。目前我省日卫生厅质量检查组的充分肯定。目前我省兄弟医院已相继开展。兄弟医院已相继开展。输血科输血科 2019年年11月月21日日2022-9-19浙江省人民医院浙江省人民医院 输血科输血科10三血小板抗体检测技术的简述三血小板抗体检测技术的简述(一)原理(一)原理(二)试剂组成(二)试剂组成(三)实验前准备(三)实验前准备(四)操作(四)操作2022-9-19浙江省人民医院浙江省人民医院 输血科输血科11三血小板抗体检测技术的简述三血小板抗体检测技术的简述(一)原理(一)原理
12、 1、基于固相红细胞粘附实验(、基于固相红细胞粘附实验(SPRCA)原理。)原理。2、反应板中已包被抗血小板单克隆抗体,血小板悬液经、反应板中已包被抗血小板单克隆抗体,血小板悬液经 离心洗涤后可在反应孔底部形成血小板单层。离心洗涤后可在反应孔底部形成血小板单层。3、加入血清或血浆,在孔中经过孵育后,若该血清或血浆、加入血清或血浆,在孔中经过孵育后,若该血清或血浆中含有血小板抗体,则该抗体与反应孔中的血小板单层结中含有血小板抗体,则该抗体与反应孔中的血小板单层结合,未结合的成分通过洗涤被去除。合,未结合的成分通过洗涤被去除。4、加入抗人、加入抗人IgG及人及人IgG致敏红细胞(指示红细胞),经离
13、致敏红细胞(指示红细胞),经离心后指示红细胞通过抗人心后指示红细胞通过抗人IgG的桥连与血小板单层上的血的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合,因此阳性反应为指示红细胞平铺在反应孔小板抗体结合,因此阳性反应为指示红细胞平铺在反应孔底部表面。而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚底部表面。而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。集于反应孔底部中央。2022-9-19浙江省人民医院浙江省人民医院 输血科输血科12三血小板抗体检测技术的简述三血小板抗体检测技术的简述(二)试剂组成(二)试剂组成1 低离子溶液(低离子溶液(L.I.M)2 反应版:在加入干燥剂的自封袋中密封保存;保存
14、温度为反应版:在加入干燥剂的自封袋中密封保存;保存温度为28。3 25*浓缩洗涤液浓缩洗涤液4 抗人抗人IgG5 阳性对照阳性对照6 阴性对照阴性对照7 指示红细胞指示红细胞2022-9-19浙江省人民医院浙江省人民医院 输血科输血科13(三)实验前准备(三)实验前准备(7)1 所有试剂平衡至室温。所有试剂平衡至室温。2 25*浓缩洗涤液:使用前用蒸馏水以浓缩洗涤液:使用前用蒸馏水以1:24稀释成洗涤工作液。稀释成洗涤工作液。3 血小板抗体筛检细胞:血小板抗体筛检细胞:1)为多人份)为多人份O型健康者血小板,经冷冻干燥制成。型健康者血小板,经冷冻干燥制成。2)使用前每支加生理盐水)使用前每支加
15、生理盐水500 l,室温(,室温(1825)静置)静置5分钟分钟 3)溶解后的浓度为)溶解后的浓度为10020109个个/L 4)使用前应充分溶解和混匀)使用前应充分溶解和混匀 5)溶解后室温可保存)溶解后室温可保存24小时,但不可小时,但不可4保存保存4 指示红细胞:指示红细胞:1)指示红细胞的表面已致敏人)指示红细胞的表面已致敏人IgG抗体抗体 2)使用前平衡至室温()使用前平衡至室温(1825)3)加样时应充分摇匀)加样时应充分摇匀 4)若指示红细胞出现溶血、细菌污染、过期则不能使用)若指示红细胞出现溶血、细菌污染、过期则不能使用 5)加样时没有充分摇匀或离心不充分,可导致假阳性结果)加
16、样时没有充分摇匀或离心不充分,可导致假阳性结果 三血小板抗体检测技术的简述三血小板抗体检测技术的简述2022-9-19浙江省人民医院浙江省人民医院 输血科输血科145 制备血小板悬液:制备血小板悬液:1)抗体检测采用)抗体检测采用3人份等比例混合人份等比例混合O型血小板悬液型血小板悬液 2)机采血小板需用生理盐水进行)机采血小板需用生理盐水进行5-10倍稀释后混合倍稀释后混合 3)血小板悬液浓度约为血小板悬液浓度约为50150109个个/L 4)当天采血)当天采血8小时内小时内EDTA或枸橼酸钠抗凝血经或枸橼酸钠抗凝血经200 g离心离心10分钟分钟 后,取上层后,取上层2/3富血小板血浆富血
17、小板血浆(PRP)可直接使用可直接使用 5)交叉配血直接采用供者血小板)交叉配血直接采用供者血小板 6)血小板悬液应贮存于塑料容器中,室温可保存)血小板悬液应贮存于塑料容器中,室温可保存24小时,但不可小时,但不可 4保存保存6 待检样本:血清或血浆样本应新鲜,待检样本:血清或血浆样本应新鲜,3000rpm离心离心5min以去除析出的以去除析出的纤维蛋白及其它有形成份,取上清进行检测。纤维蛋白及其它有形成份,取上清进行检测。7 打开水浴箱,将湿盒平衡至打开水浴箱,将湿盒平衡至37。(三)实验前准备(三)实验前准备(7)三血小板抗体检测技术的简述三血小板抗体检测技术的简述2022-9-19浙江省
18、人民医院浙江省人民医院 输血科输血科15(四)操作(四)操作1 依据检测量取出反应板条,标记阳性对照、阴性对照及待检样品孔,依据检测量取出反应板条,标记阳性对照、阴性对照及待检样品孔,未使用的板条应封好储存于配有干燥剂的试剂盒中。未使用的板条应封好储存于配有干燥剂的试剂盒中。2 向反应孔中加入向反应孔中加入1滴(滴(50 l)上述血小板悬液,轻摇反应板)上述血小板悬液,轻摇反应板10 秒钟,秒钟,使反应孔中的保护剂充分溶解。使反应孔中的保护剂充分溶解。3 用平板离心机将反应板以用平板离心机将反应板以50g(650rpm)离心)离心5分钟,使血小板固定分钟,使血小板固定在微孔底部表面。在微孔底部
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