专题五DNA的粗提取与鉴定课件.pptx

1、第1页，共32页。1.1.通过尝试对植物或动物组织中的通过尝试对植物或动物组织中的DNADNA进行粗提取，了解进行粗提取，了解DNADNA的物理化学的物理化学性质。性质。2.2.理解理解DNADNA粗提取与鉴定的原理。粗提取与鉴定的原理。第2页，共32页。1.提取DNA的方法：（1）DNA的溶解性：的溶解性：【思考【思考1】DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？【思考【思考2】利用什么原理可以来将DNA与蛋白质进一步分离开？第3页，共32页。（2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解 ，但对 没有影响；大多数蛋白质不能忍受 的高温，而DN

2、A在 以上才会变性。能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。（3）DNA的鉴定：的鉴定：如何鉴定DNA？第4页，共32页。DNA在在在NaClNaCl溶液浓度低于溶液浓度低于0.14 mol/L0.14 mol/L时，时，DNADNA的溶的溶解度随解度随NaClNaCl溶液浓度的溶液浓度的增 加 而 逐 渐 降 低；在增 加 而 逐 渐 降 低；在0.14 mol/L0.14 mol/L时，时，DNADNA溶解溶解度最小；当度最小；当NaClNaCl溶液浓溶液浓度继续增加时，度继续增加时，DNADNA的溶的溶解度又逐渐增大。解度又逐渐增大。当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度比

3、较大，浓度为 014 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。第5页，共32页。第6页，共32页。第7页，共32页。第8页，共32页。第9页，共32页。第10页，共32页。1.必修一学习的质壁分离，你还记得方法和原理吗?2.第11页，共32页。第12页，共32页。第13页，共32页。第14页，共32页。第15页，共32页。第16页，共32页。（1）溶解细胞核内的溶解细胞核内的DNADNA在浓度较高的在浓度较高的NaClNaCl溶液中核蛋白容易解聚，游离出的溶液中核蛋白容易解聚，游离出的DNADNA溶解在溶液中。溶解在溶液中。方法方法：在溶液中加入两倍体积

4、的浓度为：在溶液中加入两倍体积的浓度为2 mol/L2 mol/L的的NaClNaCl溶溶液，搅拌液，搅拌1 min1 min。注意应沿一个方向搅拌注意应沿一个方向搅拌，使，使DNADNA充分溶解。充分溶解。（2 2）DNA DNA的析出的析出 加蒸馏水降低加蒸馏水降低NaClNaCl溶液浓度，使溶液浓度，使DNADNA析出。析出。方法方法：实验中应该缓慢贴壁加入：实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水蒸馏水，并轻轻地，并轻轻地沿一个方向不沿一个方向不停地均匀搅拌停地均匀搅拌，以利于，以利于DNADNA分子的附着和缠绕。同时应注意控分子的附着和缠绕。同时应注意控制加水量，使制加水量，使NaClNaCl溶

5、液的终浓度为溶液的终浓度为0.10.10.2 mol/L0.2 mol/L。加水过程。加水过程一般分三次进行，当总加水量为一般分三次进行，当总加水量为300 mL300 mL左右时，左右时，DNADNA已基本析已基本析出。加水太多、溶液过稀，会使出。加水太多、溶液过稀，会使DNADNA分子又重新溶解。分子又重新溶解。用用3 34 4层纱布对层纱布对DNADNA稀释液进行稀释液进行过滤过滤，滤去蛋白质，收集，滤去蛋白质，收集DNADNA的的黏稠物。如果采用离心法，效果更好。用黏稠物。如果采用离心法，效果更好。用4 000 r/min4 000 r/min转速的转速的离心机，离心离心机，离心15

6、min15 min，除去上清液，除去上清液(含有蛋白质含有蛋白质)，留下的沉淀，留下的沉淀物中含有物中含有DNADNA。此时注意观察。此时注意观察DNADNA黏稠物的颜色。黏稠物的颜色。第17页，共32页。（3）将）将DNA黏稠物再溶解，黏稠物再溶解，第18页，共32页。第19页，共32页。第20页，共32页。思考：方案二与方案三的原理有什么不同？方案二方案二利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的的DNA与蛋白质分开与蛋白质分开 方案三方案三利用的是利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与不同，从而使蛋白质变性，与DN

7、A分离分离 第21页，共32页。第22页，共32页。思考：为什么加入预冷的酒精？预冷的乙醇溶液具有以下优点。预冷的乙醇溶液具有以下优点。1.1.抑制核酸水解酶活性，防止抑制核酸水解酶活性，防止DNADNA降解降解2.2.降低分子运动，易于形成沉淀析出降低分子运动，易于形成沉淀析出3.3.低温有利于增加低温有利于增加DNADNA分子柔韧性，减少断裂分子柔韧性，减少断裂二苯胺法二苯胺法在沸水浴的条件下，在沸水浴的条件下，DNADNA遇二苯胺变蓝。遇二苯胺变蓝。第23页，共32页。DNADNA的鉴定的鉴定第24页，共32页。方法步骤方法步骤 加入物质加入物质 目的目的 1.制备鸡血细胞液制备鸡血细胞

8、液 柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液 2.提取鸡血细胞细胞核物质提取鸡血细胞细胞核物质 20 m120 m1蒸馏水蒸馏水 3.溶解细胞核内的溶解细胞核内的DNADNA 2 mo12 mo1 L 的 NaCl 溶液 40 mL 4.析出含DNA的黏稠物 蒸馏水 5.滤取含DNA的黏稠物 6.将DNA的黏稠物再溶解 2 molL 的NaCl溶液20 mL 7.过滤含DNA的NaCl 溶液 8.提取含有杂质较少的 DNA 冷却的95的酒精50 mL A:(1)向试管中加入2molL 的NaCl溶液5mL(2)加入DNA(3)4 mL二苯胺试剂 9.DNA 的鉴定 B:(1)向试管中加入 2molL 的NaC

9、l溶液5mL (2)4 mL二苯胺试剂 第25页，共32页。加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加速血细胞破裂加速血细胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mol/L的的NaCl溶液稀释至溶液稀释至0.14mol/L使得使得DNA最大限最大限度地释出度地释出 使含使含DNA的黏稠物被留在纱布上的黏稠物被留在纱布上使含使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中除去含除去含DNA的滤液中的杂质的滤液中的杂质提取提取DNA A出现蓝色出现蓝色 B无变化无变化第26页，共32页。真题练习（2012.18）下列关于“DNA粗提取与鉴定实验”的叙述，正确

10、的是A洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度B将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝C常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNA的提取D用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNA获得量减少第27页，共32页。（2011.19）在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是A用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol/L，滤去析出物B调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质C将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色D用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同第28页，共32页。第29页，共32页。（2010.322010

11、.32）(7(7分分)某生物兴趣小组开展某生物兴趣小组开展DNADNA粗提取粗提取的相关探究活动。具体步骤如下：的相关探究活动。具体步骤如下：材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2 2份每份份每份l0 gl0 g。剪碎后分成两组，一组置于剪碎后分成两组，一组置于2020、另一组置于一、另一组置于一2020条件条件下保存下保存24 h24 h。DNADNA粗提取：粗提取：第一步第一步：将上述材料分别放人研钵中，各加入：将上述材料分别放人研钵中，各加入l5 mLl5 mL研研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤取滤液备用。磨液，充分研磨。用两层纱布过滤取滤液备用。

12、第二步第二步：先向：先向6 6只小烧杯中分别注人只小烧杯中分别注人10mL10mL滤液，再加人滤液，再加人20 mL20 mL体积分数为体积分数为9595的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。第30页，共32页。第三步：取第三步：取6 6支试管，分别加入支试管，分别加入等量的等量的2mol2molL NaClL NaCl溶液溶液溶解上述絮状物。溶解上述絮状物。DNADNA检测检测：在上述试管中各加入：在上述试管中各加入4 mL4 mL二苯胺试剂。混合均二苯胺试剂。混合均匀后，置于沸水中加热

13、匀后，置于沸水中加热5 min5 min，待试管冷却后比较溶液，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅的颜色深浅,结果如下表。结果如下表。分析上述实验过程，回答下列问题：分析上述实验过程，回答下列问题：(1)(1)该探究性实验课题名称是该探究性实验课题名称是 。(2)(2)第二步中第二步中”缓缓地缓缓地”搅拌，这是为了减少搅拌，这是为了减少 。(3)(3)根据实验结果，得出结论并分析。根据实验结果，得出结论并分析。结论结论1 1：与：与2020相比，相同实验材料在相比，相同实验材料在-20-20条件下保存，条件下保存，DNADNA的提取量较多。的提取量较多。结论结论2 2：。针对结论针对结论I I请提出合理的解释：请提出合理的解释：。(4)(4)氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNADNA均均不相溶，且对不相溶，且对DNADNA影响极小。为了进一步提高影响极小。为了进一步提高DNADNA纯度，纯度，依据氯仿的特性在依据氯仿的特性在DNADNA粗提取第三步的基础上继续操粗提取第三步的基础上继续操作的步骤是：作的步骤是：。然后用体积分数为。然后用体积分数为9595的冷的冷酒精溶液使酒精溶液使DNADNA析出析出。第31页，共32页。第32页，共32页。