基因工程常规技术-PPTppt课件.ppt

1、学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 1第三章第三章 基因工程的常规技术基因工程的常规技术第一节第一节 凝胶电泳技术凝胶电泳技术第二节第二节 分子杂交技术分子杂交技术第三节第三节 PCR技术技术第四节第四节 生物芯片生物芯片第五节第五节 基因文库构建基因文库构建第六节第六节 酵母双杂交系统酵母双杂交系统第七节第七节 DNA测序测序学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 2第一节第一节 凝胶电泳技术凝胶电泳技术 凝胶电泳 它是一种分析鉴定重组DNA分子及蛋白质与核酸相互作用的重要实验

2、手段，同时也是分子生物学研究方法的技术基础。用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。本节主要介绍琼脂糖凝胶电泳技术。学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 3DNA的琼脂糖凝胶电泳检测的琼脂糖凝胶电泳检测+-仪器仪器 电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、移液枪；电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、移液枪；药品药品 Agarose、TAE buffer、EB（溴化乙锭）（溴化乙锭）上样缓冲液（上样缓冲液（6X）0.25%溴酚蓝、溴酚蓝、0.25%二甲苯氰醇、二甲苯氰醇、40%蔗糖；水溶液蔗糖；水溶液4保存。保存。学习 教程

3、教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 4学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 5琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳基本原理 在电场的作用下，带有负电荷的DNA或RNA核苷酸链，依靠无反应活性的稳定的介质（琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶）和缓冲液，以一定的迁移率从负极移向正极。根据核酸分子大小不同、构型或形状的差异，以及所带电荷的不同，可以通过电泳将其混合物中的不同成分彼此分开。DNA分子的迁移速度与其分子质量的对数值成反比关系。学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,

4、DAY DAY UP 6 当用EB对DNA样品染色时，加入的EB就插入DNA分子中形成荧光结合物，荧光的强度与DNA含量成正比，如果用DNA片段的标准品作电泳对照，就可以估计出待测样品的分子量大小和浓度。学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 7琼脂糖凝胶电泳的影响因素琼脂糖凝胶电泳的影响因素除样品DNA本身的大小外，琼脂糖凝胶电泳的分辨能力与胶的浓度、缓冲液、电压等有很大关系。学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 8琼脂糖凝胶电泳的参数：缓冲液：TAE（醋酸缓冲液）、TBE（硼酸

5、盐缓冲液）凝胶的含量：根据检测的DNA大小 加DNA样品：50%at 95 for 40 min1.110-4 substitutions per cycle0.5mM10mM5 to 3only5 adenosines学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 25PCR的引物 是指与待扩增的靶DNA区段两端序列互补的人工合成的寡核苷酸片断。学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 26引物的设计原则：1.引物碱基GC含量以45%55%为宜。2.其长度通常在1530个核苷酸之间。3.Tm

6、值应高于55。4.PCR扩增的长度一般：腺嘌呤腺嘌呤(A)的的N3 410倍倍 在六氢吡啶的作用下，从脱氧核糖上移去在六氢吡啶的作用下，从脱氧核糖上移去2个个磷酸分子，使磷酸分子，使DNA链在甲基化的鸟嘌呤链在甲基化的鸟嘌呤G位点断位点断裂。裂。学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 64学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 65学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 66化学修饰法的优点：化学修饰法的优点：1.不需要体外酶切

7、；不需要体外酶切；2.只要有末端标记，无论只要有末端标记，无论单双链单双链都可用来测都可用来测序。序。至少能测出至少能测出250个个bp 限制因素：测序胶的分辨率限制因素：测序胶的分辨率学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 67DNA测序分析的自动化测序分析的自动化 用四甲基若丹明（用四甲基若丹明（tetramethylrhodamine）作荧光剂，预先标记作荧光剂，预先标记M13引物引物DNA5-末端，按末端，按标准的双脱氧链终止法同引物进行反应，用聚标准的双脱氧链终止法同引物进行反应，用聚丙烯酰胺电泳分析。在电泳过程中，用激光激丙烯酰胺电泳分析。在电泳过程中，用激光激发电泳的片断产生荧光，被荧光感受器接受，发电泳的片断产生荧光，被荧光感受器接受，最终转换成电信号，被计算机读出，或打印出最终转换成电信号，被计算机读出，或打印出来。来。学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 68学习 教程 教材 多媒体课件【友情分享】GOOD GOOD STUDAY,DAY DAY UP 69