常用免疫学检查课件.ppt

1、常用免疫学检查 目 录概述第一节 免疫功能紊乱的检查第二节 感染性疾病的免疫检查第三节 超敏反应的免疫检查第四节 自身免疫疾病的检查第五节 免疫增殖及免疫缺陷病的免疫检查第六节 肿瘤标志物的检查第七节 移植免疫检查概述 临床免疫学检查常用于免疫相关疾病（如感染性疾病、自身免疫性疾病、免疫缺陷病等多种疾病）的诊断、病情监测、疗效监测与发病机制研究。第一节 免疫功能紊乱的常规检查 标本采集与送检 早晨空腹用黄色不抗凝的生化真空采血管采集静脉血，分离血清。在采血与送检中要注意：重度脂血、溶血、黄疸、微小凝块等对免疫球蛋白、补体测定产生的影响。一、免疫球蛋白测定 免疫球蛋白（Immunoglobuli

2、n，Ig）分为5种，即IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。其中IgG含量最多，占血液Ig的70%80%，IgA占Ig的10%15%，居第二位。IgM占血清Ig的5%10%，IgD占Ig的1%以下，IgE仅占Ig的0.002%。免疫球蛋白的检测方法主要有单向免疫扩散法、ELISA法和免疫透射（散射）比浊法及化学发光法。【参考区间】免疫比浊法 ；IgA 0.7；ELISA法 【临床意义】（一）免疫球蛋白增高 1.单克隆性免疫球蛋白增高 见于免疫增殖性疾病，如多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等。2.多克隆性免疫球蛋白增高 见于各种慢性感染、自身免疫病、慢性肝病、肝硬化、淋巴瘤及某些自身免疫性疾病

3、。3.IgD升高 可见于甲状腺炎、流行性出血热等，妊娠末期、大量吸烟者中IgD也可出现生理性升高。4.IgE增高 常见于变态反应、寄生虫感染等，亦可见于肝炎、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等。（二）免疫球蛋白减低 见于各类先天性或获得性体液免疫缺陷病，亦可见于长期使用免疫抑制剂的患者。二、补体测定 补体（Complement,C）是 由传统途径的9种成分C1C9、旁路途径的3种成分（B因子、D因子及P因子）及其衍生物组成。补体系统活化后可促进机体的防御功能，有利于机体清除病原微生物。病理情况下，补体参与破坏自身组织和自身细胞而造成免疫损伤。补体活性与含量的检测对某些疾病的辅助诊断、鉴别诊断及发

4、病机制的研究具有重要意义。（一）总补体溶血活性测定 血清总补体活性亦称50总补体溶血活性（complement hemolysis 50%，CH50）。【参考区间】CH50为50100kU/L 【临床意义】1.CH50活性增高：见于急性炎症、组织损伤和某些恶性肿瘤。2.CH50活性降低：主要见于急性肾小球肾炎、自身免疫性疾病活动期、感染性疾病、慢性肝病、肝硬化等。（二）补体C3含量测定 【参考区间 【临床意义】1.C3增高：见于急性时相反应。2.C3降低 （1）补体合成原料不足 （2）补体合成能力降低 （3）补体消耗过多 （4）补体丢失太多 （5）先天性补体缺乏 （三）补体C4含量测定 【参考

5、区间 【临床意义】1.C4增高：见于各种炎症、组织损伤和各种传染病。2.C4降低：见于自身免疫性肝炎、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、IgA型肾病、型糖尿病、胰腺癌、多发性硬化等。第二节 感染性疾病的免疫检查 标本采集与送检 血清检测，一般适宜早晨空腹抽取样本，禁忌暴饮暴食后和剧烈运动后检测。收取到的标本要及时送去检测，避免被污染，造成假阳性。（一）抗链球菌溶血素“O”测定 【参考区间】胶乳法1：400；免疫比浊法:0200IU/L 【临床意义】ASO滴度增高 常见于急性上呼吸道感染、皮肤及软组织化脓性感染、活动性风湿热、风湿性心肌炎、风湿性关节炎和急性肾小球肾炎等。（二）伤寒和副伤寒沙门菌免

6、疫测定 临床上可通过肥达反应（Widal reaction，WR）、伤寒和副伤寒沙门菌抗原及IgM抗体进行测定。【参考区间】肥达反应直接凝集法 伤寒H1:160；O1:80，副伤寒甲、乙、丙均1:80。伤寒和副伤寒沙门菌抗原胶乳凝集法 阴性。伤寒和副伤寒沙门菌IgM抗体ELISA法 阴性或滴度140为阳性。【临床意义】1ANA是自身免疫性疾病的筛选试验。2服用抗心律失常药物可出现假阳性。（二）抗脱氧核糖核酸抗体测定 抗脱氧核糖核酸抗体（anti DNA antibody）主有抗双链DNA（double stranded DNA，ds-DNA）抗体和抗单链DNA(single stranded

7、DNA，ss-DNA)抗体二种。【参考区间】阴性 【临床意义】1抗ds-DNA抗体阳性 可用于区分SLE和其他自身免疫性疾病。2抗ss-DNA抗体阳性 见于多种自身免疫性疾病，特异性较差。（三）抗可提取性核抗原多肽抗体谱测定 【参考区间】免疫印迹法 阴性 【临床意义】1抗RNP抗体：RNP即核糖核蛋白（ribonucleoprotein,RNP）。抗RNP抗体主要与混合性结缔组织病相关，也是该病的诊断指标之一。2抗Sm抗体：抗Sm抗体是SLE的特异性标志之一。3抗SS-A和抗SS-B抗体：抗SS-A和抗SS-B是干燥综合征诊断标准中特有的两项自身抗体指标。抗SS-A对干燥综合征诊断敏感性高，而

8、抗SS-B对干燥综合征的特异性高。4其他：抗Scl-70抗体是系统性硬化症的标记抗体。抗JO-1抗体为多发性肌炎及皮肌炎的标记抗体。抗组蛋白抗体可见于5070的SLE及95%以上的药物诱导性狼疮。（四）类风湿因子测定 【参考区间】阴性 【临床意义】1RF检测主要用于类风湿性关节炎的辅助诊断。2本试验对类风湿性关节炎特异性不高，其它的自身免疫性疾病，亦可阳性。3在某些感染性疾病 可有不同程度的阳性率。（五）抗线粒体抗体测定 【参考区间】免疫荧光法 阴性（或效价在1:10以下）。【临床意义】1.许多肝脏疾病可检出AMA。2.AMA为原发性胆汁性肝硬化的一项诊断指。3.胆总管阻塞性肝硬化和肝外胆管阻

9、塞时均为阴性。（六）抗甲状腺球蛋白及微粒体抗体测定 【参考区间】免疫荧光法 阴性 【临床意义】1抗TG抗体阳性 见于桥本甲状腺炎、甲状腺功能亢进和甲状腺癌。2抗TM阳性 见于桥本甲状腺炎、甲状腺功能亢进、原发性甲状腺功能低下，二者联合检查，可提高阳性检出率。（七）抗乙酰胆碱受体抗体测定 【参考区间】ELISA法 正常人多为阴性 【临床意义】抗乙酰胆碱受体抗体的测定对重症肌无力具有诊断意义，敏感性和特异性均较高，同时还可监测重症肌无力的疗效。（八）抗平滑肌抗体 【参考区间】间接荧光抗体法：阴性。【临床意义】抗平滑肌抗体主要见于自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、急性病毒性肝炎。（九）循环免疫复合

10、物测定 【参考区间】阴性 【临床意义】1.CIC阳性常见于某些自身免疫性疾病。2.CIC阳性也可见于链球菌感染后肾小球肾炎、膜增殖性肾炎、恶性肿瘤、血清病等。（十）自身抗体选择和应用 1在临床诊断中不能把单一项目的结果绝对化，而要结合临床表现及有关检查结果，并根据疾病的诊断标准综合分析。2对怀疑患有器官特异性自身免疫性疾病者，应同时选用抗核抗体和器官特异性自身抗体检测。3对自身抗体阳性标本，可继续做效价或定量检测，有利于对疾病病程和疗效观察。4正常人血清也可出现自身抗体，并随年龄增大而阳性率增高，但抗体的效价和亲和力均较低。第五节 免疫增殖及免疫缺陷疾病的免疫检查 标本采集与送检 早晨空腹抽取

11、静脉血样本，避免溶血，分离血清。血清标本要及时送检，避免被污染。要注意饮食、运动和药物量等因素的影响。（一）血清M蛋白测定 【参考区间】蛋白电泳法、免疫电泳法 阴性 【临床意义】M蛋白增高见于:1多发性骨髓瘤（包括轻链病）。2巨球蛋白血症（又称Waldenstrm病）。3其他：如恶性淋巴瘤、重链病等。（二）人获得性免疫缺陷病毒抗体及RNA测定 【参考区间】筛查试验和确认试验均阴性，RT-PCR检查HIV-RNA为阴性。【临床意义】1.HIV抗体筛查试验敏感性高，易出现假阳性，因此，必须做确认试验，只有确认试验阳性才能确定为HIV感染。2.HIV核酸定性检测可用于HIV感染的辅助诊断。（三）T细

12、胞测定 1.T细胞花结形成试验 【参考区间】ERFT （）%【临床意义】（1）降低：主要见于免疫缺陷性疾病。（2）升高：见于甲状腺功能亢进、甲状腺炎、重症肌无力、慢性活动性肝炎、SLE活动期和移植排斥反应等。2.T细胞分化抗原测定 【参考区间】流式细胞术 CD3+6185；CD4+2858；CD8+1948；CD4+。【临床意义】（1）CD3+降低 见于自身免疫性疾病。（2）CD3+/CD4+降低 见于遗传性免疫缺限症、AIDS、恶性肿瘤及应有免疫抑制剂者。（3）CD4+CD8+增高 见于自身免疫性疾病、变态反应、器官移植后排斥反应等。（4）CD4+CD8+降低 见于AIDS、恶性肿瘤、传染性

13、单核细胞增多症、巨细胞病毒感染等。3.B细胞分化抗原测定 【参考区间】流式细胞术 CD19+（）【临床意义】（1）升高 见于急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和Burkitt淋巴瘤等。（2）降低 见于无丙种球蛋白血症、使用化疗或免疫抑制剂后。4.自然杀伤细胞活性测定 【参考区间】51Cr释放法：自然杀伤率为47.6%76.8%；流式细胞术法：。【临床意义】1.自然杀伤细胞活性测定活性降低 见于血液系统肿瘤、实体瘤、免疫缺陷病，艾滋病和免疫抑制剂使用者等。2.自然杀伤细胞活性升高 见于宿主抗移植物反应，病毒感染早期，以及使用干扰素等免疫增强剂的患者。小结小结 1.各种病原体感染后，刺激机

14、体免疫系统产生相应的抗体或释放某些抗原成分，利用免疫学检测手段进行检测，对感染性疾病的诊断具有重要意义。2.多数自身免疫性疾病血清中存在自身抗体，对自身抗体的检测对自身免疫性疾病的诊断、疗效及预后判断意义重大。3.特异性IgE测定有助于型超敏反应性疾病的诊断，抗人球蛋白试验是自身免疫性溶血性贫血的重要辅助指标。4.免疫球蛋白测定有助于诊断体液免疫缺限病、免疫增殖病。5.补体测定有助于诊断补体缺限，免疫细胞的鉴定、计数及功能试验有助于诊断免疫细胞缺限。第六节 肿瘤标志物检查 肿瘤标志物（tumor marker,TM）检测在肿瘤普查、辅助诊断、疗效观察和预后判断中有重要意义。标本采集与送检 血液

15、标本采集后应及时离心，分离血清，避免溶血，保存于4冰箱中。如果在23个月内测定，则应于-20保存。酶类和激素类肿瘤标志物不稳定，易溶解，应及时送检测定或低温保存。（一）甲胎蛋白测定 【参考区间】RIA、ELISA法 25g/L 【临床意义】1AFP主要用于原发性肝癌的辅助诊断，是原发性肝癌最特异的肿瘤标志物。2生殖腺胚胎癌（睾丸癌、卵巢癌、畸胎瘤）、胃癌、胰腺癌等患者血清AFP含量可以升高。3某些非恶性肝脏病变，AFP水平亦可不同程度升高。4孕妇血清中AFP异常增高，应考虑有胎儿神经管缺陷、双胎及先兆流产的可能性。（二）癌胚抗原测定 【参考区间】RIA、ELISA法 5g/L 【临床意义】1

16、结肠癌和直肠癌患者血清CEA测定的敏感性高于其他肿瘤标志物，常作为首选指标。2动态观察血清CEA，用于恶性肿瘤术后治疗监测和预后判断。3结肠炎、直肠息肉、胰腺炎、肝硬化、肝炎、肺气肿、支气管哮喘、良性乳腺疾病等也可CEA轻度升高。4少数吸烟者可见血清CEA轻度升高。（三）前列腺特异抗原测定 【参考区间】RIA、ELISA法 ，【临床意义】1前列腺癌 患者血清PSA明显升高。2良性前列腺瘤、前列腺增生和前列腺炎也会引起PSA的轻度升高。3前列腺按摩、前列腺穿刺、导尿和直肠镜检查后，血清 PSA可升高。（四）前列腺酸性磷酸酶测定 【参考区间】RIA法 【临床意义】1前列腺癌时，血清PAP浓度明显升

17、高，升高程度与肿瘤发展基本平行。PAP对诊断前列腺癌的特异性高于PSA，但敏感性较PSA低。2前列腺增生、前列腺炎和泌尿生殖系统疾病等也可见血清PAP的升高。（五）组织多肽抗原测定 【参考区间】ELISA法 130U/L 【临床意义】1血清TPA水平 升高，主要见于膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌和消化道恶性肿瘤。2血清TPA和CEA联合检测有助于恶性与非恶性乳腺肿瘤的鉴别诊断。3急性肝炎、胰腺炎、肺炎、妊娠3个月后血清TPA水平均可见升高。（六）-L-岩藻糖苷酶测定 【参考区间】ELISA法、连续监测法 234414mol/L 【临床意义】1AFU 是原发性肝癌新的诊断标志物，与AFP联合检

18、测可提高原发性肝癌诊断阳性率。2血清AFU升高可见于某些转移性肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌或子宫癌等。（七）鳞状上皮细胞癌抗原测定 【参考区间】RIA、ELISA法 【临床意义】1SCCA是较好的鳞癌肿瘤标志物，其浓度随病情的加重而升高。2SCCA升高还可见于肝炎、肝硬化、胰腺炎、特异性皮炎等皮肤病、上呼吸道感染性疾病等。（八）神经元特异性烯醇化酶测定 【参考区间】RIA、ELISA法 15g/L 【临床意义】1 NSE可作为小细胞肺癌高灵敏性、高特异性的肿瘤标志物。2NSE作为神经母细胞瘤的标志物，其敏感性达90%以上，对该病的早期诊断具有较高的临床价值。3红细胞中存在NSE，样本溶血可使血清

19、NSE浓度升高。（九）糖脂类肿瘤标志物测定 1.癌抗原15-3测定 【参考区间】RIA、ELISA法 万U/L 【临床意义】（1）CA15-3主要用于乳腺癌的辅助诊断和疗效观察，也是监测乳腺癌患者术后复发的最佳指标。（2）CA15-3升高还可见于肺癌、肾癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、原发性肝癌等。（3）肝脏、肺、乳腺等非恶性肿瘤性疾病，也可见CA15-3升高。2.糖链抗原19-9测定 【参考区间】CLIA、RIA、ELISA法 万U/L 【临床意义】（1）血清CA19-9对诊断胰腺癌有较高的敏感性和特异性，是胰腺癌首选的肿瘤标志物。（2）血清CA19-9升高还可见于结肠癌、原发

20、性肝癌、胃癌、直肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌等。（3）急性胰腺炎、胆汁淤积型胆管炎、胆囊炎、胆石症、急性肝炎、肝硬化等，血清CA19-9水平也有不同程度升高。3.癌抗原125测定 【参考区间】RIA、ELISA法 万U/L 【临床意义】（1）血清CA125检查主要用于早期辅助诊断卵巢癌，也是卵巢癌疗效观察及判断复发转移的指标。（2）CA125也可见于子宫内膜癌、宫颈癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌和肺癌等。（3）非恶性肿瘤 也有不同程度升高，但多数不超过10万U/L。4.糖链抗原72-4测定 【参考区间】RIA、ELISA法 4 000U/L 【临床意义】（1）CA72-4对胃癌的检测特异性明显

21、优于CA19-9和CEA。CA72-4如与CA19-9或CEA联合检测，可提高胃癌检出率。（2）卵巢癌时CA72-4含量也明显增加。CA72-4与CA125联合检测可提高卵巢癌的检出率。（3）CA72-4升高还可见于结肠癌、胰腺癌、乳腺癌等。5.癌抗原242测定 【参考区间】ELISA法 2.0 万U/L 【临床意义】（1）CA242增高见于 胰腺癌、结肠癌、胃癌，（2）CA242增高也见于卵巢癌、子宫癌和肺癌等。（3）良性疾病 CA242也可升高。（十）肿瘤标志物的选择与应用肿瘤首选指标补充指标食道癌SCC CEA胃癌CA72-4CEA、CA19-9原发性肝癌AFP AFU、-GT胆道癌CA

22、19-9胰腺癌CA19-9CA242、CA125、CEA膀胱癌TPA、CEA结肠癌 CEACA19-9、CA242、CA72-4乳腺癌CA15-3CEA卵巢癌CA125CA72-4、AFP宫颈癌SCCCEA、CA125前列腺癌PSAPAP肺癌NSE、CEATPA、SCC第七节 移植免疫检查 移植的成败主要取决于供者和受者的组织相容性，其中人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）配型是否相符起关键作用。受者接受供者的移植物后，受者的免疫系统与供者的移植物相互作用而发生的免疫应答，称为移植免疫。通过研究移植免疫，可以了解移植排斥反应发生的机制，预防和控制排斥反应，从

23、而使移植物在受者体内长期存活。（一）HLA配型 在组织或器官移植前，不仅要进行ABO血血型配型，同时要做HLA配型。供体和受体之间的HLA位点及碱基顺序是否一致，决定着移植器官是否能长期存活。临床用于HLA配型的方法主要是分子生物学技术。近年来，流式细胞术在HLA配型中应用也越来越广泛，在保证了 敏感性、特异性及准确性的优点的同时，大大简化了操作程序，降低了成本。（二）淋巴细胞毒交叉配型试验 将分离纯化的供者淋巴细胞，加入受体的血清及正常兔血清，在补体的参与下破坏供者淋巴细胞膜或引起淋巴细胞溶解，通过显微镜观察淋巴细胞死亡率，从而判断供受者之间的组织相容性。正常供者淋巴细胞的死亡率少于15%，如果高于15%，移植后可能出现急性排斥反应。