生化基础知识课件.ppt
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1、1生化基础知识斯光明2临床生物化学和生物化学检验h研究健康和疾病时的生物化学过程,测定体液或组织的成分以提供对疾病的诊断、治疗和预防有用信息的一门学科。现在还包括研究治疗效果的检测。h研究领域广泛,与临床医学、计算机等联系密切。3生物化学的研究领域之一h机体代谢稳定态:生物机体是一个开放的稳态系统,它的成分随膳食、运动和生物节律性等因素影响而处于动态平衡状态。某些物质易于交换,而另一些物质可能以贮存形式为主。物质在细胞内同时进行合成代谢和分解代谢,通过进入和排出间的动态平衡维持各成分的恒定,保证机体处于健康状态。4生物化学的研究领域之二h机体稳定态紊乱所引起疾病的生物化学改变。h原因很多:1创
2、伤或入侵因子的破坏,包括病原微生物、病毒和毒素2重要酶的遗传缺陷3一种或多种营养物质如氨基酸、维生素或矿物质的缺乏4血液供应障碍5氧气供应不足6代谢产物堆积7细胞识别某些信号的缺陷8恶性疾病9调节系统紊乱5举例说明h糖尿病主要紊乱是胰岛素活性不足,葡萄糖不断从肝细胞中释放但不能顺利进入肌细胞进行分解代谢。葡萄糖进入血浆的速率大于离开速率,血糖浓度升高。h健康人尿液中排泄的白蛋白量很少,由于肾小球的滤过作用和肾小管的重吸收作用处于平衡状态。肾病综合征时肾小球滤过的白蛋白量增多,远超过肾小管的重吸收能力,出现明显的白蛋白尿。由于机体合成白蛋白能力有限,最终引起血浆白蛋白降低。6临床生化发展的3个阶
3、段h1910-1930年:方法学有重要进展。包括静脉穿刺技术,目视比色计的应用。h1930-1950年:40年代对疾病生化知识的积累。钾钠分析、光电比色计的应用。许多复杂实验室从基础研究学科转到临床实验室,如层析、电泳、同位素技术等。h1950年以后:自动生化分析仪问世,极大提高了工作效率,同时临床医生对实验室工作的依赖性迅速增加,申请的检验项目的种类、数量和频率猛增。7检验科生化室的功能h分析体液中各种成分的组成和浓度。某种物质的浓度明显异常,提示什么地方出现了障碍。h血浆中某种物质的浓度升高原因很多,如摄入过多、合成增加、细胞过多破坏、利用不充分、排泄障碍或严重脱水等。h疾病早期阶段,症状
4、模糊,血液成分的变化很小。此时,要求实验操作有较高的精密度和有效的质量控制(以后的将作专题讲解)来确保结果的准确性。8生化反应原理9生化反应原理h生化分析仪是临床诊断常用的重要仪器。它是通过对血液和其他体液的分析来测定各种生化指标,如胆固醇、葡萄糖、淀粉酶等。同时结合其他临床资料进行综合分析,帮助临床医生诊断疾病,并可鉴别并发因子以及决定以后治疗的基准等。h如何检测:利用光学。10h许多化学物质具有颜色(如高锰酸钾溶液),有些无色的化合物也可以和显色剂作用而生成有色物质。事实证明,当有色溶液的浓度改变时,颜色的深浅也随着改变。因此,可以通过比较溶液颜色深浅来确定有色溶液的浓度,对溶液中所含的物
5、质进行定量分析。11h物理学告诉我们,光具有波动和微粒两种性质,称光的波粒二象性。h光是一种电磁波,可以用振动频率()、波长()、速度(c)、周期(T)来描述它。h在辐射能量时,光是以单个的、一份一份的能量(E=h)的形式辐射的。式中h是普朗克常量。同样光被吸收时,其能量也是一份一份被吸收的。不同波长的光子具有不同的能量。波长越短,即频率越高,能量越大。12各种色光的近似波长范围波长范围颜色10001-1000000远红外线2501-10001中红外线761-2500近红外线621-760红591-620橙561-590黄501-560绿481-500青431-480蓝401-430紫191-
6、400普通紫外线1-191真空紫外线13光的互补及有色溶液的显色原理h我们日常所见的白光是混合而成的复合光。h若把两种颜色的光按一定比例混合,能够得到白光的话,这两种颜色的光就称为互补色。14黄黄橙橙红红紫紫蓝蓝青蓝青蓝青青绿绿白光白光互补色光示意图15h物质颜色与光的吸收、透过、反射有关。透明物质的颜色就是它透过光波的颜色。不透明物质的颜色是其反射光波的颜色。h有色溶液对光的吸收是有选择性的。实践证明,溶液所呈现的颜色是它的主要吸收光的互补色。16举例说明h一束白光通过高锰酸钾溶液时,(绿)光大部分被吸收,其他的光透过溶液。透过的光中除(紫)色外其他颜色的光两两互补,所以高锰酸钾溶液呈(紫)
7、色。17h对于任何一种有色溶液,在某一特定波长下会有一个最大吸收值。h浓度不同的同一种溶液,其吸收光谱的形状和最大吸收波长是一样的。即不同的物质都具有特定的吸收光谱。h由于有色溶液对光的吸收有原则性,在进行比色测定时,要用只能被有色溶液吸收的光,也就是说要用单色光。(以后讲到的滤光片就是起这个作用)1819h当一束平行光照射到均匀的溶液时,光的一部分被吸收(I a),一部分反射Ir,一部分透过It。假设入射光的强度为Io,那么Io=I a+Ir+Ith实际比色分析时,所有比色皿都是同质料、同规格的,因此Ir定值。h比色分析中,常把透过光的强度占入射光的强度的百分比It/Io)%称为透过率。20
8、21仪器反应原理22单色器单色器(Lambert-Beer)朗伯-比尔定律比色皿比色皿检测器检测器放大放大显示显示光源光源A=KbcA:吸光度 c:物质浓度 K:吸收系数 b:液层厚度 吸光度与该物质在特定波长下的溶液厚度与浓度变化成正比23h光源:常用的是卤素灯。最好的是贝克曼仪器的氙灯。h单色器:即滤光片。常用干涉滤光片。h比色皿:常用石英。要有良好的透光性和较强的耐腐蚀性。h光电检测器:将光能转化为电能。应具有灵敏度高,响应速度快,产生的电信号易于检测和放大,噪音低等特点。242526IgA/M、C3、C427b:后分光(现在)a、前分光(过去)光栅检测器光源计算机反应池比色池反射镜反射
9、镜狭缝比色池反应池光源计算机检测器光栅28h后分光的优点:可同时选用双波长进行测定,大大降低了躁声;通过双波长可以有效地抑制混浊、溶血、黄疸对实验测定的影响;双波长可有效地补偿由于电源变动造成的影响;使生化分析仪器多项目同时测定变为现实。29自动生化分析仪器的基本构成h样本/试剂系统:自动液面探针(增加速度和减少污染);防堵塞功能;防碰撞保护功能h搅拌和冲洗系统:h恒温系统:h反应盘:h光路系统:全息光栅h操作系统:30样品样品+试剂试剂1、流动式、流动式混混 合合计计 算算检检 测测流动比色池流动比色池排排 出出 特点:样品试剂在同一管道中,在流动中进行。2、分立式、分立式试剂试剂样品样品排
10、排 出出检检 测测计计 算算独立反应比色杯独立反应比色杯 特点:样品、试剂分别进入某个项目的独立比色杯内,完成测试。31h离心式分析仪:将样本和试剂放在特制的圆盘上,圆盘装在离心机上作为转头。受离心力作用而相互混合。反应速度快。缺点同一时间只能做同一项目测定。h干式生化:价格昂贵,适合急诊。32试剂反应原理33比色法(仪器上一般设置为终点法)酶法;连续监测法(速率法)免疫比浊法34 35361.终点法 举例:血糖(Glu)测定原理:葡萄糖+O2+H2O 葡萄糖酸+H2O2H2O2+4-AA+酚 醌亚胺+4H2O醌亚胺在480550nm有吸收峰PODGOD反应曲线单试剂t双试剂t样品加入后一段时
11、间后吸光度达样品加入后一段时间后吸光度达到最大而且不再变化,说明反应到最大而且不再变化,说明反应完成,这样的项目为终点法。完成,这样的项目为终点法。372.速率法举例:谷丙转氨酶(ALT)测定原理:L-丙氨酸+-酮戊二酸 丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸+NADP+H L-乳酸+NAD+NADH在340nm波长下吸收峰下降ALTLDH反应进行时的某特定时间间隙内,进行一系列测定记录。在某时间间隔内有效测定其吸光度变化速率是分析浓度的函数。特别是在测定时间间隙内,记录下表现出反应中最佳线性部分的吸光度读数。38反应曲线单试剂At双试剂At双试剂At393.免疫比浊反应原理透射比浊法透射比浊法:是根据抗原
12、、抗体结合形成的抗原抗体复合物能引起液体介质出现浊度的原理。当抗体过量存在时,与抗原形成复合物。颗粒增强免疫比浊法颗粒增强免疫比浊法:选择一种大小适中,均匀一致的胶乳颗粒,吸附或交联抗体后,透过光减少,这种减少与胶乳凝集成正比。反应曲线At40反应过程:抗体:病原体产生的蛋白质。抗原:机体体液免疫反应的产物,是一种特性的蛋白。复合物(不溶)抗原抗体平衡平衡复合物(溶解)抗原抗体抗体过量:抗体过量:复合物(溶解)抗体抗原抗原过量:抗原过量:前带现象前带现象:当抗原过量,抗体不足反应超限导致沉淀增加,浊度下降的现象41举例:载脂蛋白AI(APOAI)测定原理:血清中的APOA与试剂中的特异性抗人A
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