炭疽检验技术-课件.ppt
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- 炭疽 检验 技术 课件
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1、炭疽检验技术炭疽检验技术辽宁省辽宁省cdc 炭疽是由炭疽杆菌引起的人兽共患急性、热性、败血性传染病。其病理变化的特点是脾脏显著肿大,皮下及浆膜下结缔组织出血浸润,血液凝固不良,呈煤焦油样。人感染后多表现为皮肤炭疽、肺炭疽及肠炭疽,偶有伴发败血症。炭疽炭疽(Anthrax)发病、死亡污染环境 形成芽胞经口 食入食草动物通过直接接触、消化道、呼吸道等途径感染人类食肉动物 偶尔感染 革兰氏染色阳性;长而直的大杆菌,菌体两端平直;大小为1.01.5um35um,致病菌中最大的;无鞭毛,不能运动。一、病原一、病原炭疽杆菌(Bacillus anthracis)荚膜染色在碳酸盐培养基中、厌氧环境下生成荚膜
2、。一、病原一、病原炭疽杆菌(Bacillus anthracis)炭疽杆菌在病人、病畜体内多散在或呈23个短链排列,有荚膜(红色)在活炭疽病畜体或死亡后未经解剖的尸体内,不形成芽胞。一旦体内炭疽杆菌暴露于空气中,接触了游离氧,在一定温度下(12-42)就会形成芽胞。芽胞呈卵圆形或圆形,位于菌体中央或稍偏向一端。一、病原一、病原炭疽杆菌(Bacillus anthracis)A:炭疽芽孢薄片(透射电镜)有致密的胞膜B:炭疽芽孢(扫描电镜)收缩成椭圆形C:炭疽繁殖体薄片(透射电镜)炭疽杆菌为兼性需氧菌,在1244都能生长,最适生长温度为37。最适pH为7.37.6。在普通琼脂平皿培养基上生长成不透
3、明、灰白色、扁平、表面粗糙的菌落,边缘不整齐,能形成几个或数十个菌体相连的长链,低倍显微镜观察呈卷发状。在血液琼脂平皿培养基上,生长出湿润粘稠的菌落,菌落周围不溶血。二、培养特性二、培养特性光镜下炭疽杆菌菌落边缘呈卷发状在血液琼脂平皿培养基上不溶血或微溶血三、致病性与免疫性三、致病性与免疫性致病物质:主要有二种 荚膜:由质粒编码,具有抗吞噬作用 炭疽毒素:由质粒编码(致死主要因素)保护性抗原(protective antigen,PA)水肿因子 (edema factor,EF)致死因子 (lethal factor,LF)四、抵抗力四、抵抗力芽胞抵抗力强 煮沸40min或干热140C 3h灭
4、活;在干燥土壤或皮毛中能存活数年至20年;对化学消毒剂抵抗力强(5%石炭酸5d杀死);对碘及氧化剂较敏感;繁殖体的抵抗力弱 对青霉素、红霉素、氯霉素敏感 u炭疽病原学检查炭疽病原学检查u炭疽血清学检查炭疽血清学检查五、炭疽实验室检查五、炭疽实验室检查u炭疽病原学检查炭疽病原学检查标本采集和样品处理细菌培养涂片、革兰染色、荚膜染色、光镜检查Ascoli试验动力检查噬菌体裂解和青霉素敏感性试验串珠试验生化试验炭疽PCR基因检测五、炭疽实验室检查五、炭疽实验室检查u炭疽血清学检查炭疽血清学检查标本采集和样品处理血清中抗炭疽芽胞和毒素IgG水平检测 (酶联免疫吸附实验ELISA)血清中抗炭疽荚膜抗体胶
5、体金检测 五、炭疽实验室检查五、炭疽实验室检查人间传染的病原微生物名录人间传染的病原微生物名录序号 病原菌名称 危害程度分类 实验活动所需生物安全实验室级别 学名 中文名 大量活菌操作 动物感染实验 样本检测 非感染性材料的实验 1Bacillus anthracis 炭疽芽孢杆菌 第二类 BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 2Brucella spp 布鲁氏菌属 第二类 BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 3Burkholderia mallei 鼻疽伯克菌 第二类 BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 4Coxiella burnetii 伯氏考克斯
6、体 第二类 BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 大量活菌操作:实验操作涉及大量活菌操作:实验操作涉及“大量大量”病原菌的制备,或易产生气溶胶的实验操病原菌的制备,或易产生气溶胶的实验操作(如病原菌离心、冻干等)。作(如病原菌离心、冻干等)。动物感染实验:特指以活菌感染的动物实验。动物感染实验:特指以活菌感染的动物实验。样本检测:包括样本的病原菌分离纯化、药物敏感性实验、生化鉴定、免疫学实样本检测:包括样本的病原菌分离纯化、药物敏感性实验、生化鉴定、免疫学实验、验、PCR核酸提取、涂片、显微观察等初步检测活动。核酸提取、涂片、显微观察等初步检测活动。非感染性材料的实验:如不含致病性
7、活菌材料的分子生物学、免疫学等实验。非感染性材料的实验:如不含致病性活菌材料的分子生物学、免疫学等实验。炭疽病原检验程序炭疽病原检验程序标本标本处理(方法根据标本情况选择)处理(方法根据标本情况选择)直接涂片、直接涂片、革兰染色、革兰染色、荚膜染色、荚膜染色、光镜检查光镜检查接种培养接种培养(可用选择性培养基、血培养基)(可用选择性培养基、血培养基)37,1648 hAscoli试验试验基因检测可疑菌落(形态)可疑菌落(形态)初检初检培养性鉴定试验培养性鉴定试验深入鉴定深入鉴定涂片、革兰涂片、革兰染色、荚膜染色、荚膜染色、染色、光镜检查光镜检查动动力力检检查查液液体体培培养养噬菌体裂解噬菌体裂
8、解和青霉素敏和青霉素敏感性试验感性试验产荚膜培产荚膜培养及光镜养及光镜检查检查串串珠珠试试验验生化试验基因检测酶免疫法测外毒素动物毒性测定采取标本时必须遵循的两条原则采取标本时必须遵循的两条原则1、尽可能的在抗生素治疗前采取标本;2、除必要时并在具备条件的实验室内,不得用解剖的方式获取标本,所需的血液与组织标本,均应以穿刺方式取得。(一)炭疽病原学检查(一)炭疽病原学检查 标本采集和样品处理标本采集和样品处理 1、血液标本、血液标本 所有的疑似病例和病畜,都应采取血液标本5-10ml,标本量至少应满足下列检查的需要:涂片进行显微镜检查;接种培养基进行细菌分离培养;分离血清检查抗体;常规血液检查
9、。荧光定量PCR检测2、皮肤溃疡标本、皮肤溃疡标本 在皮肤炭疽病人溃疡边缘用棉拭子擦拭,沾取分泌物。(一)炭疽病原学检查(一)炭疽病原学检查 标本采集和样品处理标本采集和样品处理 3、粪便与呕吐物标本、粪便与呕吐物标本 表现消化道症状的可疑病人收集粪便或呕吐物标本,特别注意选取其中混有血液的部分,置无菌的容器中。4、痰与咳碟标本、痰与咳碟标本 表现为呼吸道症状的可疑病人应收集其痰液标本,无痰液者,应取供细菌分离培养用的培养基,打开平皿盖置病人口鼻10cm处;令病人对平皿咳嗽,然后迅速盖上平皿。(一)炭疽病原学检查(一)炭疽病原学检查 标本采集和样品处理标本采集和样品处理 5、脑脊液标本、脑脊液
10、标本 表现为脑膜刺激症状的病人,腰椎穿刺获取脑脊液。6、尸体标本、尸体标本 食草动物死于炭疽时,通常会从口、鼻、肛门等腔道开口流出血液,这种血液应是首先采取的标本。如果血液已渗入土壤,则应收集混有血液的土壤作为标本。没有血液流出,或已不可能获取血液标本时,可通过穿刺心脏获得血液或穿刺肝脏等实质性脏器获得组织标本。(一)炭疽病原学检查(一)炭疽病原学检查 标本采集和样品处理标本采集和样品处理 7、肉类标本、肉类标本 如果怀疑罹患炭疽的牲畜已被宰杀,或对商品肉类进行常规检查时,可剪取小块肉类标本。如有可能,特别应剪取肝脏、脾脏等富含血以及含有淋巴组织的标本。8、毛皮或其他可疑污染物品标本、毛皮或其
11、他可疑污染物品标本 剪取小块毛皮或其他可疑物品,剪碎置无菌试管内,加适量的无菌生理盐水浸泡。(一)炭疽病原学检查(一)炭疽病原学检查 标本采集和样品处理标本采集和样品处理 9、水标本、水标本 检查水体污染时,用广口瓶收集水样。10、土壤标本、土壤标本 在牲畜死亡或宰杀的地点,应取土壤标本以供检查。一般要采集表层土壤(10cm内),每份150g左右。(一)炭疽病原学检查(一)炭疽病原学检查 标本采集和样品处理标本采集和样品处理 所有来自病人、病畜、尸体的标本都应首先进行直接涂片镜检。步骤:步骤:涂片、革兰染色及荚膜染色、显微镜检查涂片、革兰染色及荚膜染色、显微镜检查 镜检:取末稍血液或其他材料制
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