第八章消化系统疾病动物模型课件.ppt

1、2022-7-241第八章第八章 消化系统疾病动物模型消化系统疾病动物模型 The animal models of digestives system diseases第一节第一节 急性胃炎动物模型急性胃炎动物模型 急性胃炎动物急性胃炎动物模型模型2022-7-243 WistarWistar大鼠，雄性，大鼠，雄性，300g300g实验动物实验动物一、酸制剂诱发急性胃炎模型一、酸制剂诱发急性胃炎模型急性胃炎动物急性胃炎动物模型模型大鼠禁食大鼠禁食24h，在清醒状态下，用下述试剂或物质灌胃：，在清醒状态下，用下述试剂或物质灌胃：（1）水杨酸制剂水杨酸制剂（如（如20 mmol/L阿司匹林或水杨

2、阿司匹林或水杨 酸溶液）按酸溶液）按100 mg/kg体重灌胃；体重灌胃；（2）2ml 10 mmol/L的的醋酸醋酸或或2ml 不同浓度的不同浓度的盐酸盐酸（1，10，100 mmol/L）；）；（3）2ml 同种动物同种动物胆汁或胆汁或2 mmol/L的的牛磺胆酸牛磺胆酸；（4）15%的的乙醇乙醇；（2）-（4）可单独或几种合用（）可单独或几种合用（2ml左右）灌胃；左右）灌胃；操作方法操作方法急性胃炎动物急性胃炎动物模型模型 4h4h后处死动物，剖检可见胃内发生急性弥后处死动物，剖检可见胃内发生急性弥漫性炎症改变。漫性炎症改变。胃粘膜表面有浅表糜烂、出血，粘膜层胃粘膜表面有浅表糜烂、出血

3、，粘膜层内见中性粒细胞浸润。内见中性粒细胞浸润。结结 果果病病 变变急性胃炎动物急性胃炎动物模型模型2022-7-246 碱性肠液倒流入胃，刺激胃粘膜可引起碱性肠液倒流入胃，刺激胃粘膜可引起炎症，即胆汁反流性胃炎。常见于原发性或炎症，即胆汁反流性胃炎。常见于原发性或继发性幽门功能紊乱或胃切除术后。本法取继发性幽门功能紊乱或胃切除术后。本法取上部小肠的碱性肠液注入已结扎幽门的同种上部小肠的碱性肠液注入已结扎幽门的同种大鼠胃内，使之对胃粘膜产生持续刺激，形大鼠胃内，使之对胃粘膜产生持续刺激，形成胃炎。成胃炎。造模原理造模原理二、胆汁返流性胃炎模型二、胆汁返流性胃炎模型急性胃炎动物急性胃炎动物模型模

4、型2022-7-247WistarWistar大鼠，雄性，大鼠，雄性，180180 220g220g实验动物实验动物二、胆汁返流性胃炎模型二、胆汁返流性胃炎模型急性胃炎动物急性胃炎动物模型模型2022-7-2481.1.制备上部小肠液；制备上部小肠液；2.2.向胃内注入小肠液，向胃内注入小肠液，2 ml/2 ml/只（正常对照组注入只（正常对照组注入2 2 mlml生理盐水）。缝合腹壁，腹腔注射阿托品生理盐水）。缝合腹壁，腹腔注射阿托品5 5 mg/kgmg/kg体重，以抑制胃液分泌，利于胃粘膜损伤体重，以抑制胃液分泌，利于胃粘膜损伤模型的形成；模型的形成；3.3.处死大鼠，开腹，结扎贲门，取

5、出胃，沿胃大弯处死大鼠，开腹，结扎贲门，取出胃，沿胃大弯剪开。用滤纸吸干表面水分，立即称量胃重，以剪开。用滤纸吸干表面水分，立即称量胃重，以胃湿重胃湿重/体重之比（胃系数）表示胃水肿程度。体重之比（胃系数）表示胃水肿程度。4.4.肉眼观察并计数整个胃粘膜出血点数，作为损伤肉眼观察并计数整个胃粘膜出血点数，作为损伤指数。指数。操作方法操作方法急性胃炎动物急性胃炎动物模型模型2022-7-249 模型组动物胃系数和损伤指数明显增模型组动物胃系数和损伤指数明显增加，肉眼观察模型组胃粘膜充血、水肿，加，肉眼观察模型组胃粘膜充血、水肿，皱襞减少，颜色暗红，并有大量散在出血皱襞减少，颜色暗红，并有大量散在

6、出血点。点。结结 果果急性胃炎动物急性胃炎动物模型模型2022-7-2410第二节第二节 慢性胃炎动物模型慢性胃炎动物模型2022-7-2411三、大鼠慢性萎缩性胃炎模型三、大鼠慢性萎缩性胃炎模型o 病因病因:酗酒、用药不当、饮食习惯不良、酗酒、用药不当、饮食习惯不良、幽门螺杆菌感染、自身免疫。幽门螺杆菌感染、自身免疫。o 造模评价：组织病理学是评价造模成功造模评价：组织病理学是评价造模成功的最主要指标，主要观察和测量的最主要指标，主要观察和测量胃粘膜胃粘膜厚度厚度、粘膜肌层厚度、粘膜肌层厚度、腺体数量、壁细腺体数量、壁细胞数量胞数量、固有层炎细胞浸润程度和肠化、固有层炎细胞浸润程度和肠化生发

7、生率等。生发生率等。2022-7-2412 造模方法造模方法n综合法一综合法一 胆汁（去氧胆酸钠）胆汁（去氧胆酸钠）+热水热水+主动免疫主动免疫 n综合法二综合法二 去氧胆酸钠去氧胆酸钠+热糊热糊+主动免疫主动免疫 n综合法三综合法三 去氧胆酸钠去氧胆酸钠+酒精酒精+氨水氨水+吲哚美锌吲哚美锌n氨水单因素法氨水单因素法2022-7-2413 综合法复制伴有幽门螺杆菌感染的慢性萎缩综合法复制伴有幽门螺杆菌感染的慢性萎缩性胃炎模型性胃炎模型:饮用去氧胆酸钠水饮用去氧胆酸钠水;免疫损伤免疫损伤;饮寒凉胆汁饮寒凉胆汁;饮食不洁和饮食不洁和/或肌饱失常；或肌饱失常；HP灌胃。灌胃。2022-7-2414

8、第三节第三节 急性胃溃疡动物模型急性胃溃疡动物模型2022-7-2415溃疡病的病因溃疡病的病因o致溃疡因素致溃疡因素:胃酸、胃蛋白酶、非甾体抗炎胃酸、胃蛋白酶、非甾体抗炎药不合理应用、幽门螺杆菌感染等。药不合理应用、幽门螺杆菌感染等。o防御因素防御因素：粘液：粘液-碳酸氢盐屏障、粘膜屏障、碳酸氢盐屏障、粘膜屏障、粘膜血流量、胃上皮细胞的更新、表皮生长粘膜血流量、胃上皮细胞的更新、表皮生长因子和内生性前列腺素等。因子和内生性前列腺素等。o溃疡的形成主要由于溃疡的形成主要由于防御因素防御因素和和致溃疡因素致溃疡因素的平衡失调所致。的平衡失调所致。2022-7-2416 应激法应激法 幽门结扎法幽

9、门结扎法 药物法药物法 醋酸法醋酸法 常用的方法常用的方法急性胃溃疡动物急性胃溃疡动物模型模型 在抗溃疡药物药效学试验中，水浸应激法、在抗溃疡药物药效学试验中，水浸应激法、幽门结扎法和醋酸法制备的胃溃疡模型为必做实幽门结扎法和醋酸法制备的胃溃疡模型为必做实验，利血平法和乙醇法可任选其一。验，利血平法和乙醇法可任选其一。乙醇乙醇组胺组胺促胃液素促胃液素肾上腺类固醇肾上腺类固醇水杨酸盐水杨酸盐血清素血清素利血平利血平保泰松等保泰松等一、应激性胃溃疡模型一、应激性胃溃疡模型应激性胃溃疡模型应激性胃溃疡模型应激刺激应激刺激 造模机制造模机制血管收缩血管收缩 胃运动亢进胃运动亢进 副交感神经副交感神经-

10、垂体垂体-肾肾 上腺系统兴奋性上腺系统兴奋性应激性溃疡应激性溃疡胃酸、胃蛋白酶和胃酸、胃蛋白酶和 胃泌素分泌胃泌素分泌胃粘膜缺血、缺氧和胃粘膜缺血、缺氧和 抵抗力抵抗力交感神经兴奋性交感神经兴奋性应激性胃溃疡模型应激性胃溃疡模型WistarWistar大鼠，大鼠，160-180g160-180g，雌雄不限。，雌雄不限。实验动物实验动物器器 材材大鼠固定钢板或束缚笼；恒温水浴装置大鼠固定钢板或束缚笼；恒温水浴装置。应激性胃溃疡模型应激性胃溃疡模型2022-7-2420应激束缚笼应激束缚笼应激性胃溃疡模型应激性胃溃疡模型2022-7-2421u禁食（不禁水）禁食（不禁水）24h24h，将动物固定，

11、将动物固定（笼或固定笼或固定器器）。u垂直浸于垂直浸于1818 2020的恒温水浴槽中，水面浸至的恒温水浴槽中，水面浸至剑突水平。剑突水平。u水浸泡水浸泡7h7h后取出，处死动物，立即开腹检查。后取出，处死动物，立即开腹检查。u胃的固定及处理。胃的固定及处理。操作方法操作方法应激性胃溃疡模型应激性胃溃疡模型2022-7-2422水浸水浸3h3h，胃粘膜即发生损伤；，胃粘膜即发生损伤；7-8h7-8h胃粘膜可出现多发性、出血性糜烂小点；胃粘膜可出现多发性、出血性糜烂小点；20h20h胃粘膜病变相当严重，但胃粘膜病变相当严重，但溃疡改变不超过粘膜溃疡改变不超过粘膜肌层肌层，且以，且以*腺胃腺胃（含

12、胃体和胃窦）为重。（含胃体和胃窦）为重。应激性溃疡在腺胃部沿血管走行分布，表面覆应激性溃疡在腺胃部沿血管走行分布，表面覆盖凝血块，去除凝血后可见深褐色条索状溃疡。盖凝血块，去除凝血后可见深褐色条索状溃疡。结结 果果应激性胃溃疡模型应激性胃溃疡模型2022-7-2423长长度（宽度、点数）度（宽度、点数）溃疡程度的评定溃疡程度的评定应激性胃溃疡模型应激性胃溃疡模型1.1.溃疡指数：溃疡指数：p 溃疡的长径大于溃疡的长径大于lmmlmm者，直接测量其长度，每者，直接测量其长度，每lmmlmm为为1 1分；分；p 宽度大于宽度大于l mml mm，则计分加倍，则计分加倍p 长度和宽度都小于长度和宽度

13、都小于l mml mm，按溃疡点数计，每点计，按溃疡点数计，每点计0.50.5分。分。将每只动物的累计总分作为该动物的溃疡指数，在组间进将每只动物的累计总分作为该动物的溃疡指数，在组间进行比较。行比较。2022-7-2424溃疡程度的评定溃疡程度的评定应激性胃溃疡模型应激性胃溃疡模型1.1.溃疡指数：溃疡指数：n 点状淤血为点状淤血为1分；分；n 线状淤血、长度小于线状淤血、长度小于1 mm为为2分；分；n 12 mm为为3分；分；n 34 mm为为4分；分；n 大于大于5 mm为为5分；分；将全胃分数的总和作为该大鼠的溃疡指数。将全胃分数的总和作为该大鼠的溃疡指数。2022-7-2425 溃

14、疡程度的评定溃疡程度的评定应激性胃溃疡模型应激性胃溃疡模型.根据溃疡指数推算：根据溃疡指数推算：2022-7-2426n胃溃疡发生率高，重复性较好。中枢抑胃溃疡发生率高，重复性较好。中枢抑制剂、抗胆碱药、制酸药对其有明显对制剂、抗胆碱药、制酸药对其有明显对抗作用。方法简单，结果可靠，迄今仍抗作用。方法简单，结果可靠，迄今仍是研究抗溃疡药物的常用模型。是研究抗溃疡药物的常用模型。n水温应保持恒定。水温应保持恒定。n动物禁食期间动物禁食期间，如如自食粪便自食粪便会影响实验会影响实验结果。结果。模型评价与注意事项模型评价与注意事项应激性胃溃疡模型应激性胃溃疡模型2022-7-2427n应激束缚笼的大

15、小应与动物匹配，松紧度应激束缚笼的大小应与动物匹配，松紧度合适。合适。n雌性大鼠更易引起应激性溃疡。雌性大鼠更易引起应激性溃疡。n受试药物一般在应激前受试药物一般在应激前3060 min给予。给予。p雷尼替丁雷尼替丁0.135 g/kgp西咪替丁（甲氰咪胍）西咪替丁（甲氰咪胍）1.0 g/kg体重体重模型评价与注意事项模型评价与注意事项应激性胃溃疡模型应激性胃溃疡模型二、幽门结扎法胃溃疡模型二、幽门结扎法胃溃疡模型 幽门结扎法胃溃疡模型幽门结扎法胃溃疡模型 通过手术结扎幽门，使胃内胃酸、胃蛋白通过手术结扎幽门，使胃内胃酸、胃蛋白酶潴留，对胃粘膜造成侵蚀而形成溃疡。酶潴留，对胃粘膜造成侵蚀而形成

16、溃疡。造模机制造模机制实验动物实验动物幽门结扎法胃溃疡模型幽门结扎法胃溃疡模型2022-7-24301.给药给药3天。实验前大鼠禁食天。实验前大鼠禁食(24h)不禁水不禁水。2.自胸骨剑突下沿腹中线切开腹壁，切口约自胸骨剑突下沿腹中线切开腹壁，切口约2-3cm。在左侧肋缘部位用手指轻轻上推暴露胃。在左侧肋缘部位用手指轻轻上推暴露胃。3.在胃幽门下穿结扎线（勿伤及血管）将幽门结在胃幽门下穿结扎线（勿伤及血管）将幽门结扎，注意勿将邻近的其他器官、血管结扎。同扎，注意勿将邻近的其他器官、血管结扎。同时经十二指肠给予受试药。缝合腹壁切口，用时经十二指肠给予受试药。缝合腹壁切口，用纱布包扎切口。纱布包扎

17、切口。操作方法操作方法幽门结扎法胃溃疡模型幽门结扎法胃溃疡模型2022-7-2431幽门结扎法胃溃疡模型幽门结扎法胃溃疡模型2022-7-24324.幽门结扎后幽门结扎后，停止供水供食停止供水供食，术后，术后18h处死大处死大鼠，取胃固定、剖检鼠，取胃固定、剖检。5.沿胃大弯剪开胃壁，洗净胃内容物，将胃壁展沿胃大弯剪开胃壁，洗净胃内容物，将胃壁展开，胃粘膜面向上用大头钉固定在蜡板上。开，胃粘膜面向上用大头钉固定在蜡板上。6.用肉眼或放大镜观察胃粘膜面，记录每只动物用肉眼或放大镜观察胃粘膜面，记录每只动物产生的溃疡数、溃疡程度、溃疡面积（或溃产生的溃疡数、溃疡程度、溃疡面积（或溃疡指数）及病变的

18、情况。疡指数）及病变的情况。幽门结扎法胃溃疡模型幽门结扎法胃溃疡模型2022-7-2433幽门结扎法胃溃疡模型幽门结扎法胃溃疡模型2022-7-2434结果结果 形成的溃疡主要发生在对胃液抵抗力较弱的形成的溃疡主要发生在对胃液抵抗力较弱的前胃部（瘤胃），前胃部（瘤胃），多为圆形或椭圆形。但病变较多为圆形或椭圆形。但病变较表浅，属于表浅，属于胃粘膜急性出血性糜烂胃粘膜急性出血性糜烂，与人类胃溃，与人类胃溃疡的典型病变差距较大。疡的典型病变差距较大。幽门结扎法胃溃疡模型幽门结扎法胃溃疡模型2022-7-2435病变病变评价评价 1.溃疡面积溃疡面积 通过溃疡中心量取的最大纵径和横径通过溃疡中心量取

19、的最大纵径和横径S=（d1/2）（）（d2/2）式中式中S为溃疡面积，为溃疡面积，d1为通过溃疡中心量取的最大为通过溃疡中心量取的最大纵径，纵径，d2为通过溃疡中心量取的最大横径。为通过溃疡中心量取的最大横径。可计数可计数*前胃前胃部溃疡面积，以其总和作为溃疡指数部溃疡面积，以其总和作为溃疡指数。幽门结扎法胃溃疡模型幽门结扎法胃溃疡模型2022-7-2436病变评价病变评价2.溃疡程度（溃疡程度（Okabe法）法）在解剖显微镜下测量溃疡面积，将每只在解剖显微镜下测量溃疡面积，将每只 鼠溃疡面积鼠溃疡面积的综合分为的综合分为5个等级作为溃疡指数：个等级作为溃疡指数：溃疡面积总和溃疡面积总和(mm

20、2)：1-12 13-25 26-37 38-50 50mm2或穿孔或穿孔溃疡指数溃疡指数:1级级 2级级 3级级 4级级 5级级幽门结扎法胃溃疡模型幽门结扎法胃溃疡模型2022-7-2437病变评价病变评价根据溃疡指数可进一步计算：根据溃疡指数可进一步计算：溃疡抑制百分率溃疡抑制百分率=100%100%溃疡发生百分率溃疡发生百分率=100%100%幽门结扎法胃溃疡模型幽门结扎法胃溃疡模型2022-7-2438n造模方法简单，溃疡发生快，成功率可达造模方法简单，溃疡发生快，成功率可达85%100%；用于观察药物对溃疡形成的预防作用。用于观察药物对溃疡形成的预防作用。n本本法规定大鼠禁食法规定大

21、鼠禁食4872 h。如大鼠体重小于。如大鼠体重小于180 g，禁食，禁食2448 h，这样动物可以耐受手术；若大鼠体重超过，这样动物可以耐受手术；若大鼠体重超过180 g，禁食禁食4872 h，可提高胃溃疡发生率。，可提高胃溃疡发生率。n在实验过程中，大鼠单笼饲养，笼底网眼应足以使粪便在实验过程中，大鼠单笼饲养，笼底网眼应足以使粪便容易漏下，防止动物因自食粪便而影响溃疡形成。容易漏下，防止动物因自食粪便而影响溃疡形成。评价和注意事项评价和注意事项幽门结扎法胃溃疡模型幽门结扎法胃溃疡模型2022-7-2439n在幽门结扎时，勿影响胃壁血管，勿牵扯幽门和用器械在幽门结扎时，勿影响胃壁血管，勿牵扯幽

22、门和用器械钳夹胃壁，干扰实验结果。结扎时间的长短、室温可直接影钳夹胃壁，干扰实验结果。结扎时间的长短、室温可直接影响溃疡的形成。响溃疡的形成。n观察药物对溃疡的影响时，动物应预先给药或同时给药，观察药物对溃疡的影响时，动物应预先给药或同时给药，若粗制剂可采用灌胃给药，应确认胃内药物已排空后方能结若粗制剂可采用灌胃给药，应确认胃内药物已排空后方能结扎幽门。粗制剂可在结扎幽门的同时采用十二指肠内注入给扎幽门。粗制剂可在结扎幽门的同时采用十二指肠内注入给药较好。药较好。n给药方法也可以连续给药给药方法也可以连续给药5 d，每天，每天1次，第次，第3天给药后开天给药后开始禁食，末次给药后始禁食，末次给

23、药后3 h手术结扎幽门。手术结扎幽门。评价和注意事项评价和注意事项幽门结扎法胃溃疡模型幽门结扎法胃溃疡模型三、乙醇诱发胃损伤模型三、乙醇诱发胃损伤模型急性胃溃疡急性胃溃疡乙醇法乙醇法2022-7-24411.1.破坏胃粘膜屏障的完整性破坏胃粘膜屏障的完整性n减少胃粘膜中前列腺素、氨基己糖含量减少胃粘膜中前列腺素、氨基己糖含量；n降低胃粘膜血流量降低胃粘膜血流量；n减小胃粘膜跨膜电位差减小胃粘膜跨膜电位差；n破坏主细胞减少粘液分泌破坏主细胞减少粘液分泌；n引起胃粘膜微循环障碍等。引起胃粘膜微循环障碍等。2.2.细胞内钙超载和细胞凋亡。细胞内钙超载和细胞凋亡。急性胃溃疡急性胃溃疡乙醇法乙醇法造模机

24、制造模机制成年大鼠，性别不拘。成年大鼠，性别不拘。n大鼠禁食不禁水大鼠禁食不禁水24 h24 h；n最后最后1 1次给予受试药（次给予受试药（给药体积为给药体积为1.0 ml/100g1.0 ml/100g体重体重）后）后3 3 h h，灌服无水乙醇，灌服无水乙醇1 ml/1 ml/只；只；n1h1h后开腹取胃，以后开腹取胃，以10%10%甲醛液胃腔内固定后检查胃粘膜损甲醛液胃腔内固定后检查胃粘膜损伤程度。伤程度。n评价损伤程度以各组动物的溃疡指数进行组间比较。评价损伤程度以各组动物的溃疡指数进行组间比较。n阳性对照药可选用雷尼替丁，剂量阳性对照药可选用雷尼替丁，剂量0.135 g/kg0.1

25、35 g/kg体重，灌体重，灌胃给予。胃给予。急性胃溃疡急性胃溃疡乙醇法乙醇法实验动物实验动物操作步骤操作步骤2022-7-2443 1515分钟即可造成明显的胃粘膜损伤，且分钟即可造成明显的胃粘膜损伤，且时间越长损伤越严重。损伤主要发生在时间越长损伤越严重。损伤主要发生在*腺胃腺胃部部表现为粘膜充血、水肿、细胞坏死，伴有表现为粘膜充血、水肿、细胞坏死，伴有糜烂、出血及纵行的条索状出血坏死。糜烂、出血及纵行的条索状出血坏死。急性胃溃疡急性胃溃疡乙醇法乙醇法结结 果果2022-7-2444p乙醇性胃溃疡的程度与乙醇的浓度成正比，一乙醇性胃溃疡的程度与乙醇的浓度成正比，一般乙醇浓度般乙醇浓度40以

26、上可引起胃黏膜明显损伤，以上可引起胃黏膜明显损伤，80以上时出现明显破溃、坏死，因此制备胃以上时出现明显破溃、坏死，因此制备胃溃疡模型时多采用溃疡模型时多采用75以上乙醇或无水乙醇。以上乙醇或无水乙醇。p也可用盐酸也可用盐酸-乙醇乙醇(50%乙醇乙醇-O.15mmol/L盐酸盐酸)给大鼠灌胃给大鼠灌胃(1ml/100mg)造成溃疡，称为造成溃疡，称为酸乙醇酸乙醇性溃疡性溃疡。急性胃溃疡急性胃溃疡乙醇法乙醇法模型评价及注意事项模型评价及注意事项四、利血平诱发胃溃疡模型四、利血平诱发胃溃疡模型急性胃溃疡急性胃溃疡利血平法利血平法2022-7-2446 利血平是外周交感神经阻滞药，能耗竭肾上腺素能神

27、利血平是外周交感神经阻滞药，能耗竭肾上腺素能神经末梢内儿茶酚胺类递质，引起胃粘膜损伤。经末梢内儿茶酚胺类递质，引起胃粘膜损伤。p可减弱肾上腺素能神经的功能，使迷走神经兴奋性相对升可减弱肾上腺素能神经的功能，使迷走神经兴奋性相对升高，胃酸分泌增加，胃及血管平滑肌收缩加强；高，胃酸分泌增加，胃及血管平滑肌收缩加强；p可耗竭中枢及外周神经以及其他组织的多巴胺，使多巴胺可耗竭中枢及外周神经以及其他组织的多巴胺，使多巴胺的细胞保护作用减弱；的细胞保护作用减弱；p可减少胃粘膜可减少胃粘膜NONO含量，降低胃粘膜的抗损伤能力，从而引含量，降低胃粘膜的抗损伤能力，从而引起胃溃疡。起胃溃疡。急性胃溃疡急性胃溃疡

28、利血平法利血平法造模机制造模机制成年小鼠，雄雌均可。成年小鼠，雄雌均可。动物禁食不禁水动物禁食不禁水24 h后，灌胃给予受试药后后，灌胃给予受试药后1 h，腹腔注射利血平，腹腔注射利血平5 mg/kg体重，体重，18 h后处死后处死动物，取胃按上述方法用动物，取胃按上述方法用10%甲醛液固定，沿甲醛液固定，沿胃大弯剪开胃，平铺于白纸上，观察溃疡发生胃大弯剪开胃，平铺于白纸上，观察溃疡发生情况。情况。急性胃溃疡急性胃溃疡利血平法利血平法实验动物实验动物操作步骤操作步骤2022-7-2448n损伤主要发生在损伤主要发生在腺胃部腺胃部，可呈现条索状出血点、瘀血，可呈现条索状出血点、瘀血斑或糜烂灶。斑

29、或糜烂灶。n利血平的剂量不宜过大，否则动物容易死亡。利血平的剂量不宜过大，否则动物容易死亡。n给利血平后处死动物的最佳时间，可根据预实验结果给利血平后处死动物的最佳时间，可根据预实验结果确定。确定。n该模型的稳定性与动物体质、禁食时间、利血平剂量、该模型的稳定性与动物体质、禁食时间、利血平剂量、室温等因素有关，应尽量控制实验条件一致。室温等因素有关，应尽量控制实验条件一致。n阳性药对照可以选用雷尼替丁阳性药对照可以选用雷尼替丁0.135 g/kg体重，或西咪体重，或西咪替丁（甲氰咪胍）替丁（甲氰咪胍）1.0 g/kg体重，均灌胃给予。体重，均灌胃给予。急性胃溃疡急性胃溃疡利血平法利血平法结果及

30、评价结果及评价2022-7-2449五、吲哚美辛诱发胃溃疡模型五、吲哚美辛诱发胃溃疡模型 急性胃溃疡急性胃溃疡利血平法利血平法2022-7-2450 造模原理造模原理 n环氧合酶是花生四烯酸合成前列腺素的关键限速酶。环氧合酶是花生四烯酸合成前列腺素的关键限速酶。n前列腺素前列腺素E通过增加粘液和碳酸氢盐分泌、促进粘膜血通过增加粘液和碳酸氢盐分泌、促进粘膜血流增加、细胞保护等机制，在维持胃粘膜防御和修复功流增加、细胞保护等机制，在维持胃粘膜防御和修复功能中起重要作用。能中起重要作用。n环氧合酶受抑制，可使胃粘膜生理性前列腺素环氧合酶受抑制，可使胃粘膜生理性前列腺素E合成减合成减少。少。n大剂量吲

31、哚美辛显著抑制环氧合酶活性，致使胃粘膜防大剂量吲哚美辛显著抑制环氧合酶活性，致使胃粘膜防御因素减弱而形成溃疡。御因素减弱而形成溃疡。实验动物实验动物体重体重160180 g大鼠，雌雄各半。大鼠，雌雄各半。操作方法操作方法n大鼠禁食不禁水大鼠禁食不禁水24h，皮下注射吲哚美辛，皮下注射吲哚美辛2030mg/kg体体重；重；7h后处死动物，观察溃疡情况并测量溃疡指数。后处死动物，观察溃疡情况并测量溃疡指数。溃疡主要位于溃疡主要位于腺胃部腺胃部，表现为与长轴平行的线状、点状，表现为与长轴平行的线状、点状淤血。淤血。n阳性对照药可选雷尼替丁，灌胃给予。阳性对照药可选雷尼替丁，灌胃给予。n吲哚美辛粉用吲

32、哚美辛粉用5%碳酸氢钠溶液配（碳酸氢钠溶液配（10 mg/ml），再用），再用蒸馏水稀释成蒸馏水稀释成2mg/ml。此溶液为等张，。此溶液为等张，pH（7.58.0）。）。2022-7-2452 模型评价与注意事项模型评价与注意事项 n本模型胃溃疡发生率高，重复性好，缺点是溃疡比较表本模型胃溃疡发生率高，重复性好，缺点是溃疡比较表浅。浅。n胃损伤程度与动物体质、禁食时间、吲哚美辛剂量、给胃损伤程度与动物体质、禁食时间、吲哚美辛剂量、给予后的时间等有关。予后的时间等有关。n观察药物的抗溃疡效果一般应预先给药，给药后观察药物的抗溃疡效果一般应预先给药，给药后3060 min再给吲哚美辛。再给吲哚美

33、辛。n可采用阿司匹林口服或腹腔注射（可采用阿司匹林口服或腹腔注射（150 mg/kg体重）复体重）复制类似的胃溃疡模型。制类似的胃溃疡模型。2022-7-2453第四节第四节慢性胃溃疡动物模型慢性胃溃疡动物模型慢性胃溃疡动物慢性胃溃疡动物模型模型一、醋酸诱发慢性胃溃疡模型一、醋酸诱发慢性胃溃疡模型慢性胃溃疡动物慢性胃溃疡动物模型模型 在大鼠胃浆膜面浸渍或在浆膜下注射一定量的醋酸，在大鼠胃浆膜面浸渍或在浆膜下注射一定量的醋酸，由于醋酸的腐蚀作用使胃粘膜损伤而造成溃疡。由于醋酸的腐蚀作用使胃粘膜损伤而造成溃疡。溃疡呈溃疡呈圆形或卵圆形，深常可累及胃壁各层，造成穿透性溃疡。圆形或卵圆形，深常可累及胃

34、壁各层，造成穿透性溃疡。溃疡的形状、部位及组织学上胃壁组织的坏死和修复情溃疡的形状、部位及组织学上胃壁组织的坏死和修复情况均与人类溃疡类似。溃疡愈合过程缓慢，常出现反复，况均与人类溃疡类似。溃疡愈合过程缓慢，常出现反复，是一种慢性顽固性溃疡。该溃疡模型多用于研究药物对是一种慢性顽固性溃疡。该溃疡模型多用于研究药物对慢性溃疡愈合过程的影响。慢性溃疡愈合过程的影响。成成年大鼠，性别不限。年大鼠，性别不限。慢性胃溃疡动物慢性胃溃疡动物模型模型造模机制造模机制实验动物实验动物2022-7-24561 1.胃粘膜注射胃粘膜注射法法2 2.胃浆膜浸蚀胃浆膜浸蚀法法 慢性胃溃疡动物慢性胃溃疡动物模型模型操作

35、操作方法方法2022-7-24571 1.胃粘膜注射胃粘膜注射法法p大鼠禁食大鼠禁食24h24h，自由饮水，乙醚麻醉，常规消毒开腹，暴露胃。，自由饮水，乙醚麻醉，常规消毒开腹，暴露胃。p在腺胃部前壁的窦体交界处，用小号注射针在浆膜下注入在腺胃部前壁的窦体交界处，用小号注射针在浆膜下注入30%30%醋酸醋酸0.03ml0.03ml，然后缓慢出针，勿使醋酸溢出。，然后缓慢出针，勿使醋酸溢出。用生理盐水清洗胃壁创用生理盐水清洗胃壁创面，将胃送回腹腔，缝合腹壁创口。面，将胃送回腹腔，缝合腹壁创口。p手术后常规喂养，术后手术后常规喂养，术后24h24h按体重随机分组，模型组灌胃给予蒸馏按体重随机分组，模

36、型组灌胃给予蒸馏水，给药组给予不同剂量受试药物，每天水，给药组给予不同剂量受试药物，每天1 1次，连续给予次，连续给予10 d10 d。p术后第术后第1111天处死动物，剖腹，天处死动物，剖腹，结扎幽门及贲门，胃内注入结扎幽门及贲门，胃内注入10%10%甲醛甲醛液液10ml10ml，将胃放入同一浓度甲醛液中再固定，将胃放入同一浓度甲醛液中再固定10min10min，使胃的内外层，使胃的内外层固定以便测量。固定以便测量。慢性胃溃疡动物慢性胃溃疡动物模型模型操作操作方法方法2022-7-24582 2.胃浆膜浸蚀胃浆膜浸蚀法法p用直径用直径5.5 m5.5 m的圆形滤纸片蘸满冰醋酸，贴在腺胃部前的

37、圆形滤纸片蘸满冰醋酸，贴在腺胃部前壁浆膜面壁浆膜面30 s30 s，同法重复，同法重复1 1次，然后用适量生理盐水清次，然后用适量生理盐水清洗掉冰醋酸，将胃送回腹腔，缝合腹壁创口。洗掉冰醋酸，将胃送回腹腔，缝合腹壁创口。p也可在腺胃部前壁的窦体交界处将内直径也可在腺胃部前壁的窦体交界处将内直径5mm5mm、长、长30mm30mm的玻璃管垂直放置于浆膜面上，向管腔内加入冰醋酸的玻璃管垂直放置于浆膜面上，向管腔内加入冰醋酸0.2ml0.2ml，使其接触浆膜面，使其接触浆膜面1.5min1.5min，然后用生理盐水棉签，然后用生理盐水棉签蘸去冰醋酸。蘸去冰醋酸。慢性胃溃疡动物慢性胃溃疡动物模型模型操

38、作操作方法方法2022-7-2459n术后术后35 d可形成溃疡，溃疡一般呈圆形、卵圆形或不可形成溃疡，溃疡一般呈圆形、卵圆形或不规则形，中心凹陷，四周微隆起，密布毛细血管。规则形，中心凹陷，四周微隆起，密布毛细血管。n已愈合的溃疡，周围稍有隆起，表面红润，可见愈合的已愈合的溃疡，周围稍有隆起，表面红润，可见愈合的痕迹。痕迹。n一般术后第一般术后第5日溃疡形成最为严重，以后缓慢愈合，但日溃疡形成最为严重，以后缓慢愈合，但病变有反复。病变有反复。n直径直径6mm以下的溃疡以下的溃疡40天可完全愈合天可完全愈合;n大的溃疡可残留大的溃疡可残留80-200天。天。慢性胃溃疡动物慢性胃溃疡动物模型模型

39、病病 变变大鼠慢性胃溃疡模型大鼠慢性胃溃疡模型慢性胃溃疡模型慢性胃溃疡模型2022-7-2462p成功率高，重现性好，溃疡深而大，成功率高，重现性好，溃疡深而大，*与人类的与人类的慢性溃疡极为相似，因而可作为筛选治疗慢性慢性溃疡极为相似，因而可作为筛选治疗慢性胃溃疡药物的实验模型。胃溃疡药物的实验模型。一般促进粘膜修复药、一般促进粘膜修复药、抗胃蛋白酶药对醋酸性溃疡有明显的促进愈合抗胃蛋白酶药对醋酸性溃疡有明显的促进愈合作用；制酸药、抗胆碱药也具有促进溃疡愈合作用；制酸药、抗胆碱药也具有促进溃疡愈合效果。效果。慢性胃溃疡动物慢性胃溃疡动物模型模型评价和注意事项评价和注意事项2022-7-246

40、3o 操作过程应严格消毒，笼具也应消毒，以免术操作过程应严格消毒，笼具也应消毒，以免术后感染影响药物的观察治疗。后感染影响药物的观察治疗。o 注射的部位要求一致，必需将醋酸注入到浆膜注射的部位要求一致，必需将醋酸注入到浆膜下，切勿穿透粘膜注入胃腔内，发现有误者应下，切勿穿透粘膜注入胃腔内，发现有误者应弃去以免影响结果。弃去以免影响结果。o 溃疡灶的大小与注射醋酸的量有关，醋酸的量溃疡灶的大小与注射醋酸的量有关，醋酸的量要准确，否则形成的溃疡差异较大。要准确，否则形成的溃疡差异较大。慢性胃溃疡动物慢性胃溃疡动物模型模型评价和注意事项评价和注意事项2022-7-2464二、幽门螺杆菌感染性胃溃疡模

41、型二、幽门螺杆菌感染性胃溃疡模型 慢性胃溃疡动物慢性胃溃疡动物模型模型2022-7-2465 造模原理造模原理 oHp含有大量尿素酶，能迅速分解食物中尿素产生氨，含有大量尿素酶，能迅速分解食物中尿素产生氨，氨中和胃酸使局部氨中和胃酸使局部pH值增高，使细菌不被胃酸杀灭。值增高，使细菌不被胃酸杀灭。oHp能分泌产生细胞毒素，引起细胞损伤，使细胞空泡能分泌产生细胞毒素，引起细胞损伤，使细胞空泡化，导致胃粘膜完整性破坏，从而形成胃炎及胃、十二化，导致胃粘膜完整性破坏，从而形成胃炎及胃、十二指肠溃疡。指肠溃疡。o单纯单纯给动物灌服一定量的给动物灌服一定量的Hp菌液，只能在感染动物的菌液，只能在感染动物

42、的胃粘膜造成炎症反应，很少引起胃粘膜破损、溃疡。因胃粘膜造成炎症反应，很少引起胃粘膜破损、溃疡。因此，多在动物胃溃疡模型的基础上，使动物感染此，多在动物胃溃疡模型的基础上，使动物感染Hp。o常用常用动物有小鼠、大鼠、沙土鼠等。动物有小鼠、大鼠、沙土鼠等。2022-7-2466 操作方法操作方法 oBALB/c小鼠：小鼠：在胃大弯窦部粘膜挂上带有腐蚀性药物在胃大弯窦部粘膜挂上带有腐蚀性药物的棉线，造成胃溃疡，在此基础上感染幽门螺杆菌，加的棉线，造成胃溃疡，在此基础上感染幽门螺杆菌，加重病变程度。重病变程度。oSD大鼠大鼠：先用热烙法复制胃溃疡，在此基础上灌胃给：先用热烙法复制胃溃疡，在此基础上灌

43、胃给予予Hp菌液。菌液。o沙土鼠沙土鼠：动物禁食禁水动物禁食禁水1 d，第，第2天灌胃给予天灌胃给予50%乙醇乙醇0.3 ml。之后继续禁食禁水。之后继续禁食禁水，第，第2天灌胃给予天灌胃给予HP菌液上、菌液上、下午各下午各1次，隔日上午再灌胃给予菌液次，隔日上午再灌胃给予菌液1次。次。2022-7-2467第五节第五节急性和慢性肝损伤动物模型急性和慢性肝损伤动物模型2022-7-2468常用的肝损伤物质常用的肝损伤物质o四氯化碳四氯化碳oD-D-半乳糖胺半乳糖胺 o硫代乙酰胺硫代乙酰胺 o刀豆蛋白刀豆蛋白A A 2022-7-2469一、四氯化碳急性肝损伤模型一、四氯化碳急性肝损伤模型202

44、2-7-2470pCCl4是无色透明液体，不溶于水。是无色透明液体，不溶于水。p在肝内在肝内CCl4经经NADPH和肝微粒体细胞色素和肝微粒体细胞色素P450混合功能氧化酶的作混合功能氧化酶的作用，生成活泼的三氯甲基自由基（用，生成活泼的三氯甲基自由基（CCl3）和氯自由基。）和氯自由基。p这些自由基能与细胞内和细胞膜上大分子发生共价结合，引起富含不这些自由基能与细胞内和细胞膜上大分子发生共价结合，引起富含不饱和脂肪酸的生物膜发生脂质过氧化，导致膜结构和功能完整性的破饱和脂肪酸的生物膜发生脂质过氧化，导致膜结构和功能完整性的破坏，肝细胞损伤坏死。坏，肝细胞损伤坏死。p三氯甲基自由基还能抑制细胞

45、膜和微粒体膜上钙泵的活性，使三氯甲基自由基还能抑制细胞膜和微粒体膜上钙泵的活性，使Ca2+内内流增加，从而引起细胞中毒死亡；流增加，从而引起细胞中毒死亡；p三氯甲基自由基能与蛋白质形成共价键，损害线粒体使三氯甲基自由基能与蛋白质形成共价键，损害线粒体使NADH及及ATP在肝内生成减少，脂肪酸氧化受抑制，影响肝脏能量生成障碍，并使在肝内生成减少，脂肪酸氧化受抑制，影响肝脏能量生成障碍，并使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积。三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积。造模机制造模机制大鼠大鼠1.用用CCl4 0.2ml/100g体重做皮下注射；体重做皮下注射；2.用用CCl4 0.5ml/kg体重一次性口服。体

46、重一次性口服。1.根据所用根据所用CCl4剂量和时间的不同，肝脏的损伤程度不剂量和时间的不同，肝脏的损伤程度不同同；2.一般在给予一般在给予CCl4后后1624 h血清丙氨酸氨基转移酶血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性升高，）活性升高，并能反映肝损伤的程度并能反映肝损伤的程度；3.形态学上表现为肝小叶中央区坏死和脂肪变性。形态学上表现为肝小叶中央区坏死和脂肪变性。操作步骤操作步骤结结 果果 2022-7-24751 1CClCCl4 4肝损伤模型是最常用的急性肝损伤模型，造模方法肝损伤模型是最常用的急性肝损伤模型，造模方法简单，成功率高

47、，重复性好，价格低廉。简单，成功率高，重复性好，价格低廉。2 2CClCCl4 4剂量不宜过大，以免造成动物中毒死亡。剂量不宜过大，以免造成动物中毒死亡。3 3CClCCl4 4是无色澄清的有毒液体，难溶于水，一般用花生油、是无色澄清的有毒液体，难溶于水，一般用花生油、橄榄油、豆油等植物油混合成所需浓度。橄榄油、豆油等植物油混合成所需浓度。4 4用用CClCCl4 4复制肝损伤模型的主要缺点是，不同动物个体肝复制肝损伤模型的主要缺点是，不同动物个体肝损伤的程度差异较大。小鼠接受损伤的程度差异较大。小鼠接受CClCCl4 4后肝脏病理学改变后肝脏病理学改变与血清与血清ALTALT等生化指标改变的

48、相关性不如大鼠好。等生化指标改变的相关性不如大鼠好。5 5CClCCl4 4可从呼吸道、皮肤吸收，对人体有毒性，注意防护。可从呼吸道、皮肤吸收，对人体有毒性，注意防护。注意事项与模型评价注意事项与模型评价2022-7-2476二、二、D-D-半乳糖胺急性肝损伤模型半乳糖胺急性肝损伤模型nD-半乳糖胺本身并无毒性，也不直接损伤肝细胞。半乳糖胺本身并无毒性，也不直接损伤肝细胞。nD-半乳糖胺是肝细胞磷酸尿嘧啶核苷的干扰剂，进入体内后半乳糖胺是肝细胞磷酸尿嘧啶核苷的干扰剂，进入体内后与磷酸尿苷结合，形成磷酸尿苷与磷酸尿苷结合，形成磷酸尿苷-半乳糖胺复合物，致使磷半乳糖胺复合物，致使磷酸尿苷耗竭，从而

49、使依赖其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖酸尿苷耗竭，从而使依赖其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物质的合成受抑制，限制了细胞器及酶的生成和补充，细等物质的合成受抑制，限制了细胞器及酶的生成和补充，细胞器、生物膜受损、钙离子内流，从而造成肝细胞损伤。胞器、生物膜受损、钙离子内流，从而造成肝细胞损伤。nD-半乳糖胺引起细胞膜损伤可能与细胞膜中糖成分的改变有半乳糖胺引起细胞膜损伤可能与细胞膜中糖成分的改变有关，即已糖代替了中性糖介入细胞膜，导致膜分子结构发生关，即已糖代替了中性糖介入细胞膜，导致膜分子结构发生变化。变化。2022-7-2477二、二、D-D-半乳糖胺急性肝损伤模型半乳糖胺急性肝损伤模型nD

50、-半乳糖胺致急性肝损伤的剂量取决于动物状态等因半乳糖胺致急性肝损伤的剂量取决于动物状态等因素，剂量一般按素，剂量一般按500850 mg/kg体重，也有用体重，也有用200400 mg/kg体重，一次性腹腔注射，体重，一次性腹腔注射，224 h出现不同程度的出现不同程度的肝损伤。如剂量超过肝损伤。如剂量超过1000 mg/kg体重时，常造成广泛性体重时，常造成广泛性肝坏死或动物中毒死亡肝坏死或动物中毒死亡。n一般于注射一般于注射D-半乳糖胺后半乳糖胺后2436 h血清血清ALT、AST活性活性升高，血清胆红素总量增加，血清总蛋白和清蛋白含量升高，血清胆红素总量增加，血清总蛋白和清蛋白含量明显降