胶体金免疫分析技术课件.ppt

1、胶体金免疫分析技术李会强天津医科大学引言引言v 胶体金电镜技术v 胶体金免疫分析 胶体金免疫渗滤试验 胶体金免疫层析试验胶体金免疫分析技术胶体金免疫分析技术v以胶体金（colloidal gold）作为示踪物质，以硝酸纤维膜（NC）作为固相载体，通过渗滤作用或层析作用，利用抗原-抗体特异性反应的原理，实现对待测抗原（或抗体）的快速检测技术。colloidal gold immunoassay胶体金免疫层析胶体金免疫层析v 胶体金（颗粒）显色性（紫色）v 抗原-抗体特异性结合v 层析（毛细管作用）结合 富集 分离POCTPOCTPoint of care testing即时检验床边检验POCTP

2、OCT金免疫层析试验即时检验的重要类型之一重点内容重点内容v 胶体金与免疫金v 胶体金免疫渗滤试验v 胶体金免疫层析试验v 技术评价与临床应用重点内容重点内容v 胶体金与免疫金v 胶体金免疫渗滤试验v 胶体金免疫层析试验v 技术评价与临床应用胶体金与免疫金胶体金与免疫金v 胶体金 colloidal gold or gold solution 胶体溶液v 免疫金 金标记抗原（抗体）胶体金（胶体金（colloidal gold）v 氯金酸(HAuCl4)在还原剂（柠檬酸钠）作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并形成带负电的疏水胶溶液。此颗粒由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金胶体金的结构模

3、式图胶体金的结构模式图AuAuCl2-AuCl2-AuCl2-AuCl2-H+H+H+H+H+H+H+H+胶体金的特性胶体金的特性v胶体性质 单一金颗粒均匀分散于溶液中v呈色性 随颗粒大小不同，呈现不同色泽v光吸收性 最大吸收波长与颗粒大小相关如何制备胶体金如何制备胶体金煮沸氯金酸滴加柠檬酸钠灰色黑色红色冷却回复体积高质量胶体金高质量胶体金金颗粒大小金颗粒均一性免疫金免疫金金标记抗体（抗原）金标记抗体（抗原）v 标记方法 物理吸附（电荷）v 核心环节 抗体量 酸碱度金标记抗体金标记抗体v 赖氨酸v 色氨酸v 半胱氨酸金标记抗体金标记抗体v 胶体金-IgG金标记抗体金标记抗体v 纯化 高速离心v

4、 储存 中性磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液 重点内容重点内容v 胶体金与免疫金v 胶体金免疫渗滤试验v 胶体金免疫层析试验v 技术评价与临床应用金免疫渗滤试验金免疫渗滤试验v 斑点金免疫渗滤 dot immunogold filtration assay,DIGFA 渗滤膜（NC）在渗滤过程中 结合并富集，分离游离标记物结构示意图结构示意图结构示意图结构示意图金免疫渗滤试验金免疫渗滤试验v 分析模式 夹心法 间接法双抗体夹心分析模式（原理）双抗体夹心分析模式（原理）AB双抗体夹心分析模式（结果）双抗体夹心分析模式（结果）实例实例:HIV-1+2:HIV-1+2 抗体检测抗体检测v NC膜 质控区

5、（重组抗原）测试区（兔抗鼠IgG）v 金标记抗体v 缓冲液实例实例:HIV-1+2:HIV-1+2 抗体检测抗体检测重点内容重点内容v 胶体金与免疫金v 胶体金免疫渗滤试验v 胶体金免疫层析试验v 技术评价与临床应用金免疫层析试验金免疫层析试验v 斑点金免疫层析试验 dot immunogold chromatographic assay,DICA v 金免疫层析试验 immunogold chromatographic assay,ICA 金免疫层析试验金免疫层析试验v 固定位置预先放置反应试剂v 在层析过程中实现：特异性结合 免疫复合物富集 游离标记物分离检测板（条）结构检测板（条）结构v

6、 样品区v 金标记抗体区v NC膜 检测线（区）质控线（区）v 吸水区分析模式分析模式-双抗体夹心双抗体夹心图：分析原理示意图实例：实例：hCGhCGv 金标记抗体区 鼠抗人hCG（链）v NC膜 检测线（区）鼠抗人hCG（链）质控线（区）兔抗鼠IgG尿尿hCGhCG测定测定-双抗体夹心双抗体夹心尿尿hCGhCG测定测定-双抗体夹心双抗体夹心分析模式分析模式-竞争竞争实例：吗啡实例：吗啡v 金标记抗体区(金标记抗吗啡抗体，兔型）v NC膜 检测线（区）特异性抗原 质控线（区）羊抗兔IgG分析模式分析模式-双抗原夹心双抗原夹心实例：实例：HIV-1+2 HIV-1+2 抗体抗体重点内容重点内容v

7、 胶体金与免疫金v 胶体金免疫渗滤试验v 胶体金免疫层析试验v 技术评价与临床应用金免疫层析方法学建立金免疫层析方法学建立v 原材料 胶体金 NC膜 PVC 吸水材料金免疫层析方法学建立金免疫层析方法学建立v 原材料（hCG检测试剂为例)抗原和抗体 抗HCG（链）单克隆抗体 抗HCG（链）单克隆抗体 羊抗鼠多克隆抗体金免疫层析方法学建立金免疫层析方法学建立v 标记胶体金与制备金垫 抗HCG（链）-Auv 喷膜（NC膜）检测区-抗HCG（链）质控区-羊抗鼠Igv 组装相关设备相关设备v 喷膜与切割重点内容重点内容v 胶体金与免疫金v 胶体金免疫渗滤试验v 胶体金免疫层析试验v 技术评价与临床应用技术评价技术评价v 优点 快速 简便 灵活？v 缺点 定量 分析敏感度 精密度附附1 1：斑点酶免疫印记：斑点酶免疫印记附附2 2：斑点酶免疫印记：斑点酶免疫印记