高效液相色谱法原理及其应用课件.ppt

1、+色谱分析法是分析化学中获得广泛应用色谱分析法是分析化学中获得广泛应用的一个重要分支，是一个具有强大生命的一个重要分支，是一个具有强大生命力的分离分析技术。力的分离分析技术。+采用高压输液泵将规定的流动相泵入装采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品由流动测定的色谱方法。注入的供试品由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号，最终得到理系统记录和处理色谱信号，最终得到各组分的色谱

2、峰。各组分的色谱峰。+一、与经典液相色谱法比较一、与经典液相色谱法比较 现代液相色谱法是在经典色谱理论现代液相色谱法是在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离柱、高灵敏专用合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。相色谱分析法。+二、与气相色谱法比较二、与气相色谱法比较1分析对象的区别分析对象的区别 GC：适于能气化、热稳定性好、且沸点较：适于能气化、热稳定性好、且沸点较 低的样品；但对高沸点、挥发性差、低的样品；但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样热稳定性差、离子型

3、及高聚物的样 品，尤其对大多数生化样品不可检测品，尤其对大多数生化样品不可检测 占有机物的占有机物的20%HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品（包：适于溶解后能制成溶液的样品（包 括有机介质溶液），不受样品挥发性括有机介质溶液），不受样品挥发性 和热稳定性的限制，对分子量大、难和热稳定性的限制，对分子量大、难 气化、热稳定性差的生化样品及高分气化、热稳定性差的生化样品及高分 子和离子型样品均可检测子和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的用途广泛，占有机物的80%2 2流动相的区别流动相的区别GCGC：流动相为惰性气体，组分与流动相无亲合作：流动相为惰性气体，组分与流动相无亲合作 用力，只与

4、固定相有相互作用。用力，只与固定相有相互作用。HPLCHPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作流动相为液体，流动相与组分间有亲合作 用力，能提高柱的选择性、改善分离度，对用力，能提高柱的选择性、改善分离度，对 分离起正向作用。且流动相种类较多，选择余分离起正向作用。且流动相种类较多，选择余 地广，改变流动相极性和地广，改变流动相极性和pHpH值也对分离起到值也对分离起到 调控作用，当选用不同比例的两种或两种以调控作用，当选用不同比例的两种或两种以 上液体作为流动相也可以增大分离选择性。上液体作为流动相也可以增大分离选择性。3 3操作条件区别操作条件区别GCGC：加温操作：加温操作（对气相

5、色谱分离效对气相色谱分离效率最有影响的因素）率最有影响的因素）HPLCHPLC：室温；高压：室温；高压+1 分离效能高分离效能高+2 2 选择性高选择性高+3 3 检测灵敏度高检测灵敏度高+4 4 分析速度快分析速度快 按固定相的聚集状态分类：按固定相的聚集状态分类：液液色谱法、液固色谱法液液色谱法、液固色谱法 按分离机制分类：按分离机制分类：分配色谱法、吸附色谱法、离子交分配色谱法、吸附色谱法、离子交换色谱法、空间排阻色谱法及亲合换色谱法、空间排阻色谱法及亲合色谱法色谱法 按流动相与固定相极性的相对强弱按流动相与固定相极性的相对强弱分类：分类：正相色谱法、反相色谱法正相色谱法、反相色谱法+一

6、、一、液固吸附色谱法（液固吸附色谱法（LSCLSC）流动相为液体，固定相为固体吸附流动相为液体，固定相为固体吸附剂剂u分离机制：利用溶质分子占据固定分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异相表面吸附活性中心能力的差异 +调节溶剂极性，可以控制组分的保调节溶剂极性，可以控制组分的保留时间留时间+出柱顺序：强极性组分后出柱，弱出柱顺序：强极性组分后出柱，弱极性组分先出柱极性组分先出柱+分离机制：利用组分在两相中溶解度分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异的差异正相色谱正相色谱固定相极性固定相极性 流动相极流动相极性性极性小的组分先出柱，极性大的组分后极性小的组分先出柱，极性大的组

7、分后柱，适用于分离溶于有机溶剂的极性及柱，适用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用于含有不同中等极性的分子型物质，用于含有不同官能团物质的分离。官能团物质的分离。反相色谱反相色谱固定相极性固定相极性 固定相极性固定相极性吸附色谱吸附色谱分配色谱分配色谱离子色谱离子色谱空间排阻空间排阻色谱色谱亲和色谱亲和色谱固定相固定相 全多孔固全多孔固体吸附剂体吸附剂 固定液载固定液载带在固相带在固相基体上基体上 高效微粒高效微粒离子交换离子交换剂剂 具有不同具有不同孔径的多孔径的多孔性凝胶孔性凝胶 多种不同多种不同性能的配性能的配位体键联位体键联在固相基在固相基体上体上 流动相流动相 不同极性

8、不同极性有机溶剂有机溶剂 不同极性不同极性有机溶剂有机溶剂和水和水 不同不同pH值值的缓冲溶的缓冲溶液液 有机溶剂有机溶剂或一定或一定pH值的缓冲值的缓冲溶液溶液 不同不同pH值值的缓冲溶的缓冲溶液，可加液，可加入改性剂入改性剂 分离原理分离原理 吸附与解吸附与解吸吸 溶解与挥溶解与挥发发 可逆性的可逆性的离子交换离子交换 多孔凝胶多孔凝胶的渗透或的渗透或过滤过滤 具有锁匙具有锁匙结构络合结构络合物的可逆物的可逆性离解性离解+与气相色谱法的分析方法基本相同与气相色谱法的分析方法基本相同+定性分析方法：定性分析方法：色谱鉴定法色谱鉴定法 化学鉴定法化学鉴定法 两谱联用鉴定法两谱联用鉴定法+定量分

9、析方法：定量分析方法：外标法外标法 内标法内标法 面积归一化法（要求每一个组分面积归一化法（要求每一个组分都出峰）都出峰）1 1贮液瓶（滤芯，可滤贮液瓶（滤芯，可滤 去颗粒状物质）去颗粒状物质）2 2高压泵（输液泵、梯高压泵（输液泵、梯 洗脱度）洗脱度）3 3进样装置进样装置4 4色谱柱色谱柱分离分离5 5检测器检测器分析分析6 6废液出口或组分收集器废液出口或组分收集器 7 7记录装置记录装置（一）输液系统（一）输液系统+一、储液装置：过滤器一、储液装置：过滤器+二、脱气装置：脱气机二、脱气装置：脱气机+流动相脱气：流动相脱气：+（1）吹氦脱气法）吹氦脱气法+（2）加热回流法）加热回流法+（

10、3）抽真空脱气法）抽真空脱气法+（4）超声波脱气法）超声波脱气法+（5）在线真空脱气法）在线真空脱气法+流动相（淋洗剂、洗脱剂）是影响流动相（淋洗剂、洗脱剂）是影响液相色谱分离的一个非常重要的实液相色谱分离的一个非常重要的实验因素。改变流动相的性质和组成验因素。改变流动相的性质和组成将改变溶质组分的将改变溶质组分的保留值保留值、分离选分离选择性择性和和柱效柱效。在实际工作中，流动。在实际工作中，流动相的可选择范围较大是液相色谱的相的可选择范围较大是液相色谱的一个显著特点。一个显著特点。+液相色谱中液相色谱中,组分的组分的保留值大保留值大小小决定于决定于组分与流动相和固定组分与流动相和固定相相分

11、子间作用力：比如吸附、分子间作用力：比如吸附、分配、离子交换、亲和力等。分配、离子交换、亲和力等。+一、高压输液泵的种类一、高压输液泵的种类+高压输液泵可以分为以下两类：高压输液泵可以分为以下两类：+1恒流泵：可输出恒定体积流量恒流泵：可输出恒定体积流量的流动相。的流动相。+（1）注射式泵（又称螺杆注射泵）注射式泵（又称螺杆注射泵）+（2）往复型泵往复型泵（又称往复柱塞泵）（又称往复柱塞泵）往复柱塞泵，柱塞向前运动，液往复柱塞泵，柱塞向前运动，液体输出，流向色谱柱；向后运动，体输出，流向色谱柱；向后运动，将贮液瓶中液体吸入缸体。如此将贮液瓶中液体吸入缸体。如此往复运动，往复运动，保证保证将将流

12、动相以稳定流动相以稳定的速度流过色谱柱的部件。的速度流过色谱柱的部件。二、高压输液泵的原理二、高压输液泵的原理+2 2恒压泵：恒压泵又称气动放恒压泵：恒压泵又称气动放大泵，是输出恒定压力的泵。大泵，是输出恒定压力的泵。避免使用对不锈钢有腐蚀性的溶剂。例：硝酸、硫酸、盐酸、卤化物，四氯化碳与异丙醇或四氢呋喃的混合物等。过滤用滤膜过滤或垂熔漏斗过滤脱气采用超声或过滤的方法注意注意流动相流动相使用前使用前冲洗冲洗使用含酸、碱、缓冲液的流动相后，必须用不含盐的有机溶剂-水冲洗！+二、高压输液泵的基本要求：二、高压输液泵的基本要求：+1.1.流量范围宽流量范围宽+2.2.重现性和准确度好重现性和准确度好

13、+3.3.输出的流动相无脉冲影响输出的流动相无脉冲影响+4.4.输出压力高且耐压输出压力高且耐压+5.5.密封性能好密封性能好+6.6.具备压力检测和保护功能具备压力检测和保护功能+用于分析型输液泵的流量相对标准用于分析型输液泵的流量相对标准偏差在偏差在0.075%0.075%0.3%0.3%+流量范围是流量范围是0.0100.01010ml/min10ml/min+流动相流速是流动相流速是1 13ml/min3ml/min+最高工作压力可达最高工作压力可达34.4734.4741.36MPa(30041.36MPa(300500bar,5000500bar,50006000psi)6000p

14、si)+梯度洗脱：又称为梯度淋洗或程梯度洗脱：又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中，按一序洗脱。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，定程度不断改变流动相的浓度配比，梯度性地改变洗脱液的组成。从而可梯度性地改变洗脱液的组成。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子的组分能按各自适宜的容量因子k k达达到良好的分离目的。到良好的分离目的。+梯度洗脱的原理：梯度洗脱的原理：+流动相由几种不同极性的溶剂组成，流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极

15、性，使每个流出的组改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子分都有合适的容量因子k k，并使样品并使样品中的所有组分可在最短时间内实现最中的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。佳分离。+梯度洗脱的优点：梯度洗脱的优点：+1.1.缩短分析周期；缩短分析周期；+2.2.提高分离能力；提高分离能力；+3.3.峰型得到改善，减少拖尾；峰型得到改善，减少拖尾；+4.4.增加灵敏度。但有时引起基增加灵敏度。但有时引起基线漂移。线漂移。+一、手动注射进样器一、手动注射进样器+二、六通阀进样装置二、六通阀进样装置 +三、自动进样器三、自动进样器+进样阀的基本要求：进样阀的基本要求：+1.1.耐高压耐

16、高压+2.2.进样量准确进样量准确+3.3.进样重复性好进样重复性好+4.4.无流量和压力波动影响无流量和压力波动影响+进样阀的保护措施：进样阀的保护措施：+1.1.在泵和进样阀之间安装在线在泵和进样阀之间安装在线过滤器，防止机械杂质进入进过滤器，防止机械杂质进入进样阀。样阀。+2.2.以缓冲液作流动相时，定期以缓冲液作流动相时，定期用水清洗进样阀，尤其是在色用水清洗进样阀，尤其是在色谱仪关机前。谱仪关机前。+自动进样器的组成部分：自动进样器的组成部分：+1.1.进样阀进样阀+2.2.样品环管样品环管+3.3.进样针头进样针头+4.4.样品瓶样品瓶+5.5.支架支架+色谱柱是液相色谱系统进行分

17、色谱柱是液相色谱系统进行分离的核心部分，试样中各组分离的核心部分，试样中各组分在在色谱柱色谱柱中被分离。中被分离。+色谱柱的要求：色谱柱的要求：+柱效高：通过减小填料粒度柱效高：通过减小填料粒度来提高柱效来提高柱效+选择性好：可通过改变固定选择性好：可通过改变固定相的种类和流动相的种类来改相的种类和流动相的种类来改变色谱柱的选择性。变色谱柱的选择性。+分析速度快分析速度快+一、柱材料及规格一、柱材料及规格 w1 1柱材料：柱材料：色谱柱色谱柱由由柱管和固柱管和固定相组成，柱管用不锈钢制成定相组成，柱管用不锈钢制成。+HPLCHPLC柱的填料材料有硅胶、以柱的填料材料有硅胶、以硅胶为基质的键合相

18、、氧化铝硅胶为基质的键合相、氧化铝和有机聚合物微球等。和有机聚合物微球等。+2 2柱规格：粒度通常为柱规格：粒度通常为3m3m、5m5m、7m7m、10m10m，柱长柱长101030cm30cm，内径，内径2 26mm6mm，以，以4.6mm4.6mm的的内径最常用。内径最常用。目前以反相键合目前以反相键合相色谱柱应用最多，尤其是相色谱柱应用最多，尤其是C18C18、C8C8柱柱+二、色谱柱的性能评价二、色谱柱的性能评价+1.1.理论塔板数理论塔板数+2.2.不对称因子不对称因子+3.3.保留值的重现性保留值的重现性+三、色谱柱的维护与保养三、色谱柱的维护与保养+1.1.加流路过滤器和保护预柱

19、加流路过滤器和保护预柱+2.2.避免高压冲击避免高压冲击+3.3.采用适合柱的分离条件：采用适合柱的分离条件：PHPH、柱温和流动相柱温和流动相+4.4.过滤流动相和样品过滤流动相和样品+5.5.用强溶剂定期冲洗柱用强溶剂定期冲洗柱色谱柱使用与保存色谱柱使用与保存：所有色谱柱使用缓冲液后必须用柱所有色谱柱使用缓冲液后必须用柱体积体积20-3020-30倍的水冲洗色谱柱倍的水冲洗色谱柱色谱柱色谱柱 柱体积柱体积 冲洗体积冲洗体积150150 4.6mm 4.6mm 2.5ml 50ml2.5ml 50ml200200 4.6mm 4.6mm 3.3ml 65ml3.3ml 65ml250250

20、4.6mm 4.2ml 80ml 4.6mm 4.2ml 80ml+（1 1）反相谱柱用后的保存：使用缓）反相谱柱用后的保存：使用缓冲液或含盐溶液作为流动相，每天实冲液或含盐溶液作为流动相，每天实验结束后，应用验结束后，应用2020倍柱体积的甲醇倍柱体积的甲醇/乙腈水溶液（乙腈水溶液（5%5%）冲洗，使色谱柱）冲洗，使色谱柱内的盐完全溶解洗脱出，再用高浓度内的盐完全溶解洗脱出，再用高浓度的甲醇的甲醇/乙腈水溶液（乙腈水溶液（80%80%100%100%）冲洗，使色谱柱中的强吸附物质冲洗冲洗，使色谱柱中的强吸附物质冲洗出来。出来。+（2 2）反相色谱柱长期保存：反相色谱柱长期保存：反相柱可以储存

21、于反相柱可以储存于甲醇或乙腈甲醇或乙腈中，正中，正相柱可以储存于经脱水处理的正己烷相柱可以储存于经脱水处理的正己烷中，离子交换柱可以贮存于中，离子交换柱可以贮存于5%5%甲醇甲醇水的溶液中，并将色谱柱两端的堵头水的溶液中，并将色谱柱两端的堵头拧紧，以免干枯，室温保存。拧紧，以免干枯，室温保存。+（1 1）如果柱压实然增大，可将色谱）如果柱压实然增大，可将色谱柱出、入口端颠倒过来，用柱出、入口端颠倒过来，用10102020倍倍柱体积的流动相冲洗。柱体积的流动相冲洗。+（2 2）如果峰形变坏，表明柱入口柱）如果峰形变坏，表明柱入口柱床可能有塌陷，可用同型号填料和乙床可能有塌陷，可用同型号填料和乙醇

22、配成匀浆，将塌陷处填平，压紧。醇配成匀浆，将塌陷处填平，压紧。+（1 1）反相色谱柱的再生步骤：）反相色谱柱的再生步骤：甲醇二氯甲烷正己烷二氯甲醇二氯甲烷正己烷二氯甲烷甲醇甲烷甲醇+（2 2）正相色谱柱的再生步骤：）正相色谱柱的再生步骤：无苯正己烷二氯甲烷异丙醇无苯正己烷二氯甲烷异丙醇二氯甲烷无苯正己烷二氯甲烷无苯正己烷+（3 3）离子交换柱的再生步骤：）离子交换柱的再生步骤：用稀酸缓冲液冲洗可使阳离子交用稀酸缓冲液冲洗可使阳离子交换柱再生，用稀碱缓冲液冲洗可换柱再生，用稀碱缓冲液冲洗可使阴离子柱再生。使阴离子柱再生。+一、定义一、定义+检测器是将色谱洗脱液中组分检测器是将色谱洗脱液中组分的量

23、转变成电信号的传感器，的量转变成电信号的传感器，并由数据处理系统记录，根据并由数据处理系统记录，根据所得色谱图上峰的位置、形状所得色谱图上峰的位置、形状和大小，进行定性、定量分析。和大小，进行定性、定量分析。二、分类二、分类+通用型：示差折光检测器通用型：示差折光检测器（DRIDDRID）、安培检测器（）、安培检测器（ADAD）、蒸发）、蒸发光散射检测器（光散射检测器（ELSDELSD）+专属型：紫外检测器（专属型：紫外检测器（UVDUVD）、可）、可变紫外可见光检测器（变紫外可见光检测器（DADDAD）、荧光）、荧光检测器（检测器（FDFD）+三、检测器的性能指标三、检测器的性能指标 +（1

24、 1）噪声）噪声 +（2 2）基线漂移）基线漂移 +（3 3）灵敏度）灵敏度 +（4 4）线性范围）线性范围 +（5 5）重复性）重复性+四、紫外检测器四、紫外检测器 +1 1固定波长紫外吸收检测器固定波长紫外吸收检测器 +2 2可变波长紫外吸收检测器可变波长紫外吸收检测器 +3 3光二极管阵列检测器光二极管阵列检测器 只能检测有紫外吸收的物质，工只能检测有紫外吸收的物质，工作原理基于作原理基于Lambert-BeerLambert-Beer定律。定律。+五、可变波长紫外检测器五、可变波长紫外检测器+是目前配置最多的检测器，可是目前配置最多的检测器，可根据组分的最大吸收波长来设根据组分的最大吸

25、收波长来设定检测波长。定检测波长。高效液相色谱仪的使用及维护高效液相色谱仪的使用及维护+使用使用HPLCHPLC级试剂和流动相级试剂和流动相+清洁的仪器、流动相和样品，清洁的仪器、流动相和样品，如果必要，进行过滤如果必要，进行过滤+保证溶剂的相溶性保证溶剂的相溶性+如果必要，冲洗整个系统，去如果必要，冲洗整个系统，去掉盐，防止污染掉盐，防止污染+在规定的在规定的pHpH范围内选用流动相范围内选用流动相+对仪器的使用、维护和保养进对仪器的使用、维护和保养进行记录行记录+通常在确定被分析的样品以后，要建立通常在确定被分析的样品以后，要建立一种高效液相色谱分析方法必须解决以一种高效液相色谱分析方法必

26、须解决以下问题：下问题：根据被分析样品的特性选择适用于样品根据被分析样品的特性选择适用于样品分析的一种高效液相色谱分析方法。分析的一种高效液相色谱分析方法。选择一根适用的色谱柱，确定柱的规格选择一根适用的色谱柱，确定柱的规格（柱内径及柱长）和所选用固定相（粒径（柱内径及柱长）和所选用固定相（粒径及孔径）。及孔径）。选择适当的或优化的分离操作选择适当的或优化的分离操作条件，确定流动相的组成、流速条件，确定流动相的组成、流速及洗脱方式。及洗脱方式。由获得的色谱图进行定性分析由获得的色谱图进行定性分析和定量分析。和定量分析。+盐酸左氧氟沙星滴眼液（盐酸左氧氟沙星滴眼液（5ml:15mg5ml:15m

27、g）含）含量测定量测定+测定方法测定方法：色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以醋酸铵高氯酸钠溶液（取醋酸铵醋酸铵高氯酸钠溶液（取醋酸铵4.0g4.0g和和高氯酸钠高氯酸钠7.0g7.0g，加水，加水1300ml1300ml使溶解，用使溶解，用磷酸调节磷酸调节PHPH值至值至2.22.2）乙腈（乙腈（85:1585:15）为流动相；检测波长为为流动相；检测波长为294nm294nm。+称取左氧氟沙星对照品、环丙沙星对照称取左氧氟沙星对照品、环丙沙星对照品和杂质品和杂质E E对照品各适量，加对照品各适量，加0.1mo

28、l/L0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml1ml中约含中约含左氧氟沙星左氧氟沙星0.12mg0.12mg、环丙沙星和杂质、环丙沙星和杂质E E各各6g6g的混合溶液，取的混合溶液，取10l10l注入液相注入液相色谱仪，记录色谱图，左氧氟沙星峰的色谱仪，记录色谱图，左氧氟沙星峰的保留时间约为保留时间约为1515分钟。左氧氟沙星峰与分钟。左氧氟沙星峰与杂质杂质E E峰和左氧氟沙星峰与环丙沙星峰峰和左氧氟沙星峰与环丙沙星峰的分离度应分别大于的分离度应分别大于2.02.0与与2.52.5。+供试品溶液的制备与测定供试品溶液的制备与测定 精密量取本精密量取本品品1.0m

29、l1.0ml，置，置25ml25ml量瓶中，加量瓶中，加0.1mol/L0.1mol/L盐盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶供试品溶液液。另精密称左氧氟沙星对照品适量，加。另精密称左氧氟沙星对照品适量，加0.1mol/L0.1mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释成每盐酸溶液溶解并定量稀释成每1ml1ml中约含左氧氟沙星中约含左氧氟沙星0.12mg0.12mg的溶液，作的溶液，作为为对照品溶液对照品溶液。取供试品溶液与对照品溶。取供试品溶液与对照品溶液各液各10ul10ul，分别注入液相色谱仪，记录色，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出供试品中谱图

30、，按外标法以峰面积计算出供试品中C C1818H H2020FNFN3 3O O4 4的含量，即得。本品含盐酸左的含量，即得。本品含盐酸左氧氟沙星以左氧氟沙星（氧氟沙星以左氧氟沙星（C C1818H H2020FNFN3 3O O4 4）计，）计，应为标示量的应为标示量的92.0%92.0%108.0%108.0%。+（1 1）配制系统适用性溶液，通过）配制系统适用性溶液，通过图谱得到相应峰之间的分离度。图谱得到相应峰之间的分离度。左氧氟沙星峰的保留时间左氧氟沙星峰的保留时间 左氧氟沙星峰与杂质左氧氟沙星峰与杂质E E峰的分离度峰的分离度左氧氟沙星峰与环丙沙星峰的分离度左氧氟沙星峰与环丙沙星峰

31、的分离度 +（2 2）配制供试品溶液，进样，通）配制供试品溶液，进样，通过图谱得到主成分色谱图的峰面积，过图谱得到主成分色谱图的峰面积，并计算平均值。并计算平均值。供试品峰面积供试品峰面积A AX X 1 2第一针第一针第二针第二针供试品平均峰面积供试品平均峰面积+（3 3）配制对照品溶液，进样，通）配制对照品溶液，进样，通过图谱得到主成分色谱图的峰面积，过图谱得到主成分色谱图的峰面积，并计算平均值。并计算平均值。对照品峰面积对照品峰面积A AX X 1 2第一针第一针第二针第二针对照品平均峰面积对照品平均峰面积+（4 4）根据外标法计算公式，将对）根据外标法计算公式，将对照品照品1 1的峰面

32、积分别代入两份样品的峰面积分别代入两份样品中求得样品含量。中求得样品含量。公式：公式：供试品供试品1-11-1%=%=供试品供试品1-21-2%=%=RRXXACAC标示量平均片重稀%100XRXRRXVAVVVWA+（5 5）根据外标法计算公式，将对）根据外标法计算公式，将对照品照品2 2的峰面积分别代入两份样品的峰面积分别代入两份样品中求得样品含量。中求得样品含量。公式：公式：供试品供试品2-12-1%=%=供试品供试品2-22-2%=%=RRXXACAC标示量平均片重稀%100XRXRRXVAVVVWA+（6 6）最后通过两份样品的平均结）最后通过两份样品的平均结果得到盐酸左氧氟沙星滴眼液的含果得到盐酸左氧氟沙星滴眼液的含量。量。