食品中有害成分的检测课件.ppt

1、食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）模块八模块八 食品中有害成分的检测食品中有害成分的检测知识目标知识目标1.了解食品中常见农药、兽药和动、植物类食品中常见了解食品中常见农药、兽药和动、植物类食品中常见毒素的种类及危害。毒素的种类及危害。2.理解农药、兽药及残留概念、种类及分析检测方法，理解农药、兽药及残留概念、种类及分析检测方法，抗生素类药物残留及激素类药物残留的快速测定。抗生素类药物残留及激素类药物残留的快速测定。3.掌握食品中常见农药、兽药和动、植物类食品中常见掌握食品中常见农药、兽药和动、植物类食品中常见毒素的测定原理、操作方法及要点等。毒素的测定原

2、理、操作方法及要点等。技能技能目标目标能运用现代分析仪器如气相色谱仪、高效液相色谱仪等。能运用现代分析仪器如气相色谱仪、高效液相色谱仪等。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）项目一农药残留的检测项目一农药残留的检测张奶奶去菜市场买菜，看到张奶奶去菜市场买菜，看到空心菜鲜亮无虫，便买回烧空心菜鲜亮无虫，便买回烧菜吃，随后就出现腹痛、腹菜吃，随后就出现腹痛、腹泻、恶心呕吐、视物不清等泻、恶心呕吐、视物不清等症状，经医院确诊为空心菜症状，经医院确诊为空心菜残留的农药中毒。残留的农药中毒。案例引入案例引入有机氯农药的检测有机氯农药的检测有机氯农药包括六六六、滴滴涕D

3、DT）等，是一类应用最早的高效广谱杀虫剂。有机氯农药化学性质稳定，在自然界不易分解，通过食物链最终进入人体，并在人体内蓄积，影响食品安全，危害人类健康。因此，我国的食品卫生标准中明确限定有机氯农药在食品中的最大限量。如表8-1食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）表8-1 有机氯农药在食品中的残留最大限量标准(GB 27632005)样品中六六六、滴滴涕经提取和净化后用气相色谱法测定，与标准比较定量分析。电子捕获检测器对于负电极强的化合物具有极高的灵敏度，利用这一特点，分别测出痕量的六六六、滴滴涕。不同异构体和代谢物可同时分别测定。出峰顺序：-HCH、-HCH

4、、-HCH、-HCH、P,P-DDE、O,P-DDT、P,P-DDD、P,P-DDT。有机氯农药的测定有机氯农药的测定-GCGCECDECD法法 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）2 2.试剂试剂 丙酮、正己烷、石油醚（沸程3060）、苯、硫酸、无水硫酸钠、硫酸钠溶液（20g/L）农药标准品：六六六（-HCH、-HCH、-HCH和-HCH）纯度99；滴滴涕（P,P-DDE、O,P-DDT、P,P-DDD、P,P-DDT）纯度99。农药标准储备液：精密称取-HCH、-HCH、-HCH、-HCH、P,P-DDE O,P-DDT、P,P-DDD

5、、P,P-DDT各10mg，溶于苯中，分别移于100mL容量瓶中，以苯稀释至刻度，混匀，浓度为100mg/L,储存于冰箱中。农药混合标准工作液：分别量取上述个标准储备液于同一容量瓶中，以正己烷稀释至刻度。-HCH、-HCH和-HCH的浓度为0.005 mg/L，-HCH和P,P-DDE的浓度为0.01 mg/L，O,P-DDT的浓度为0.01 mg/L，P,P-DDD的浓度为0.02 mg/L，P,P-DDT的浓度为0.01mg/L。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）3.3.仪器仪器（1）气相色谱仪（具电子捕获检测器和微处理机）（2）旋转蒸发仪（3）匀浆机

6、（4）调速多用振荡器（5）离心机（6）粉碎机4.4.操作步骤操作步骤 样品处理样品处理 谷物制成粉末，其制品制成匀浆；蔬菜水果及其制品制成匀浆；蛋品去壳制成匀浆；肉制品去皮、筋后，切成小块，制成肉糜；鲜乳混匀待用；食用油混匀待用。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）提取提取 称取具有代表性的各类食品试样匀浆20g，加水5mL（视其水分含量加水，使总水量约20mL），加丙酮405mL，震荡30min，加氯化钠6g，摇匀。加石油醚30mL，再震荡30min，静置分层。取上清液35mL经无水硫酸钠脱水，于旋转蒸发器中浓缩至近干，以石油醚定容至5 mL，加0.5 m

7、L浓硫酸净化，震荡0.5min，于3000r/min离心15min。取上清液进行GC分析。称取具有代表性的试样粉末2g，加石油醚20mL，震荡30min，过滤，浓缩，定容至5 mL，加0.5 mL浓硫酸净化，震荡0.5min，于3000r/min离心15min。取上清液进行GC分析。称取具有代表性食用油试样0.5g，以石油醚溶解于10mL试管中，取上清液进行GC分析。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）气相色谱条件气相色谱条件 色谱柱：内径3mm，长2m的玻璃柱，内装1.5OV-17和2QF-1混合固定液的80100目硅藻土。载气：高纯氮，流速110mL/m

8、in。温度：柱温185，检测温度225，进样温度195。进样量：进样量为110L。测定：以外标法定量分析。5.5.结果计算结果计算样品中六六六、滴滴涕及其异构物或代谢物的单一含量用下式进行计算：2022-7-28食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中：X试样中六六六、滴滴涕及其异构物或代谢物的单一含量，mg/kg；A1被测定试样组分的峰值（峰高或面积）；A2各农药组分标准的峰值（峰高或面积）；m1单一农药标准溶液的含量，ng；m2被测定试样的取样量，g；V1被测定试样的稀释体积，mL；

9、V2被测定试样的进样体积，L；1001000222111VmAVmAX有机磷农药的检测有机磷农药的检测 有机磷农药是指有机磷酸酯类化合物，广泛应用于农业、畜牧业、公共卫生事业，在农药中是极为重要的一类化合物。根据其毒性大小，可将有机磷农药分为高毒、中毒和低毒三类，其中高毒农药不准用于蔬菜、果树、茶叶、中药材，不准用于防治卫生虫害及人、畜皮肤病。有机磷农药大多呈油状或结晶状，工业品呈淡黄色至棕色，除敌百虫和敌敌畏之外，大多是有蒜臭味。一般不溶于水，易溶于有机溶剂如苯、丙酮、乙醚、三氮甲烷及油类，对光、热、氧均较稳定，遇碱易分解破坏。有机磷农药残留的测定常采用气相色谱法、薄层色谱酶抑制法等。食品分

10、析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品中残留的有机磷农药经有机溶剂提取并经净化、浓缩后，注入气相色谱仪，气化后在载气携带下于色谱柱中分离，由火焰光度检测器检测当含有机磷的试样在检测器中的富氢焰上燃烧时，以HPO碎片的形式，放射出波长为526nm的特性光，这种光经检测器的单色器（滤光片）将非特征光谱滤除后，由光电倍增管接收，产生电信号而被检出。试样的峰面积或峰高与标准品的峰面积或峰高进行比较定量。有机磷农药的测定有机磷农药的测定-气相色谱法气相色谱法 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）2 2.试剂试剂二氯甲烷

11、、丙酮、无水硫酸钠（在700灼烧4h后备用）、中性氧化铝（在550灼烧4h）、硫酸钠溶液 有机磷农药标准贮备液：分别准确称取有机磷农药标准品敌敌畏、乐果马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷各10.0mg用苯（或三氯甲烷）溶解并稀释至100mL，放在冰箱中保存。有机磷农药标准使用液：临用时用二氯甲烷稀释为使用液，使其浓度为敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷每毫升各相当于1.0g，稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷每毫升各相当于2.0g。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）3.3.仪器仪器气相色谱仪（附火焰光度检测器）、电动振荡器、组织捣

12、碎机、旋转蒸发仪4.4.操作步骤操作步骤 样品处理样品处理 蔬菜：取适量蔬菜擦净,去掉不可食部分后称取蔬菜试样，将蔬菜切碎混匀。称取10.0g混匀的试样，置于250mL具塞锥形瓶中，加30g100g无水硫酸钠脱水，剧烈振摇后如有固体硫酸钠存在，说明所加无水硫酸钠已够。加0.2g0.8g活性炭脱色。加70mL二氯甲烷，在振荡器上振摇0.5h，经滤纸过滤。量取35mL滤液，在通风柜中室温下自然挥发至近干，用二氯甲烷少量多次研洗残渣，移入10mL具塞刻度试管中，并定容至2mL，备用。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）谷物：将样品磨粉（稻谷先脱壳），过20目筛，混

13、匀。称取10g置于具塞锥形瓶中，加入0.5g中性氧化铝（小麦、玉米再加0.2g活性炭）及20mL二氯甲烷，振摇0.5h，过滤，滤液直接进样。若农药残留过低，则加30mL二氯甲烷，振摇过滤，量取15mL滤液浓缩，并定容至2mL进样。植物油：称取5.0g混匀的试样，用50mL丙酮分次溶解并洗入分液漏斗中，摇匀后，加10mL水，轻轻旋转振摇1min，静置1h以上，弃去下面析出的油层，上层溶液自分液漏斗上口倾入另一分液漏斗中，当心尽量不使剩余的油滴倒入（如乳化严重，分层不清，则放入50mL离心管中，于2500r/min转速下离心0.5h，用滴管吸出上层清夜）。加30mL二氯甲烷，100mL50g/L硫

14、酸钠溶液，振摇1min。静置分层后，将二氯甲烷提取液移至蒸发皿中。丙酮水溶液再用10mL二氯甲烷提取一次，分层后，合并至蒸发皿中。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）自然挥发后，如无水，可用二氯甲烷少量多次研洗蒸发皿中残液移入具塞量筒中，并定容至5mL。加2g无水硫酸钠振摇脱水，再加1g中性氧化铝、0.2g活性炭（毛油可加0.5g）振荡脱油和脱色，过滤，滤液直接进样。如自然挥发后尚有少量水,则需反复抽提后再如上操作。色谱条件色谱条件 色谱柱：玻璃柱，内径3mm，长1.5m2.0m。分离测定敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对硫磷的色谱住内装涂以2.5SE30和3QF1

15、混合固定液的60目80目Chromosorb W AW DMCS；内装涂以1.5OV17和2QF1混合固定液的60目80目Chromosorb W AW DMCS；内装涂以2OV101和2QF1混合固定液的60目80目Chromosorb W AW DMCS。2022-7-28食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）分离测定甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷的色谱住内装涂以3PEGA和5QF1混合固定液的60目80目Chromosorb W AW DMCS；内装涂以2NPGA和3QF1

16、混合固定液的60目80目Chromosorb W AW DMCS；气流速度：载气为氮气80mL/min；空气50mL/min；氢气180mL/min（氮气、空气和氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条件）。温度：进样口：220；检测器：240；柱温：180，但测定敌敌畏为130。测定测定 将有机磷农药标准使用液2L5L分别注入气相色谱仪中，可测得不同浓度有机磷标准溶液的峰高，分别绘制有机磷农药质量-峰高标准曲线。同时取试样溶液2L5L注入气相色谱仪中，测得峰高，从标准曲线图中查出相应的含量。5.结果计算按下式计算：式中：X试样中有机磷农药的含量，单位为mg/Kg；A进样体积中有机磷农药的

17、质量，由标准曲线中查得，单位为ng；计m与进样体积（L）相当的试样质量，单位为g。计算结果保留两位有效数字。2022-7-28食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）1000mAX食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）项目二黄曲霉毒素的检测项目二黄曲霉毒素的检测 黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类代谢产物，具有极强的毒性和致癌性，是已确定的肝癌致癌物。由于黄曲霉毒素的剧毒性、强致癌性及广泛存在性，世界各国都制定了最高允许限量标准。我国的黄曲霉毒素允许量标准如表8-2所示：样品中AFT B1经有机溶剂提取、净化、浓缩并经薄层

18、色谱分离后，在波长365nm紫外光下产生荧光，根据其在薄层板上显示荧光的强度与标准品AFT B1最低检出量产生的荧光强度比较来测定样品中AFT B1的含量。2 2试剂试剂三氯甲烷、正己烷（沸程30-60）或石油醚（沸程60-90）、甲醇苯、乙腈、无水乙醚、丙酮 以上试剂应重蒸，并应经检验对薄层色谱测定无干扰。薄层层析法黄曲霉毒素薄层层析法黄曲霉毒素B1的测定的测定 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）苯-乙腈(98:2)混合溶液、甲醇-水（55:45）混合溶液、三氟乙酸、氯化钠无水硫酸钠（AR）、硅胶G（薄层色谱用）5%次氯酸钠溶液：称取1

19、00g漂白精，加入500mL水，搅匀。另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3.10H2O）溶于500mL温水中，倒入上述溶液中，搅匀，澄清过滤后贮存于带橡皮塞的玻璃瓶中，用作消毒剂。黄曲霉毒素B1标准贮备液：精密称取1-1.2mgAFT B1标准品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀释至100mL，避光置于4冰箱中保存。用紫外分光光度计测此标准溶液的最大吸收峰的波长及该波长的吸光度。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）2100EfAMr式中黄曲霉毒素B1标准溶液的浓度，g/mL；A 测得的吸光度；M 黄曲霉毒素B1的相对分子量，312；f 使用仪器的校正因素；E

20、2黄曲霉毒素B1在苯-乙腈混合液中的摩尔消光系数，19800。3 3主要仪器主要仪器（1）小型粉碎机（2）玻璃板：520cm（3）薄层板涂布器（4）色谱展开槽（2564cm）（5）紫外光灯：100-125W，带有波长365nm滤光片（6）微量注射器：20uL,10uL各一支食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）4 4操作步骤操作步骤 样品处理样品处理 玉米、大米、麦类、面粉、薯干、豆类、花生、花生酱等：称取20g粉碎过筛样品（面粉、花生酱不需粉碎）置于250mL锥形瓶中，加30mL石油醚或正己烷和100mL甲醇水溶液，在瓶塞上涂上一层水，盖严防漏。震荡30mi

21、n，静置片刻，过滤于分液漏斗，待下层甲醇水溶液分清后，放出甲醇水溶液于另一锥形瓶中。取20mL甲醇水溶液，置于125mL分液漏斗中，加20mL三氯甲烷，振摇2分钟，静止分层。放出三氯甲烷层，经盛有约10g先用三氯甲烷湿润的无水硫酸钠的慢速滤纸过滤于50mL蒸发皿中，分液漏斗中再加5mL三氯甲烷提取一次，三氯甲烷层一并滤入蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗过滤器，洗液并入蒸发皿中。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）在通风柜中，将蒸发皿于65水浴上挥干，然后放入冰盒上泠却2-3分钟，准确加入1mL苯-乙腈混合液，用带橡皮头滴管的管尖将残渣充分混合，若有结晶析出，将

22、蒸发皿取下，继续溶解、混匀，晶体消失后用滴管吸取上清液转移于2mL具塞试管中。花生油、香油、菜油等：称取4g混匀样品于小烧杯中，用20mL石油醚或正己烷，将其转移到125mL分液漏斗中，用20mL甲醇-水溶液分数次洗烧杯，洗液并入分液漏斗中，振摇2分钟，静止分层后，将下层甲醇-水溶液移入第二分液漏斗，再用5mL甲醇-水溶液重复提取一次，提取液并入第二分液漏斗中。在第二分液漏斗中加入20mL三氯甲烷，以下按a法中自“振摇2分钟，静止分层”起依法操作。2022-7-28食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红

23、、田艳花主编）酱油、醋：称取10g样品于小烧杯中，为防止提取时乳化，加0.4g氯化钠，于分液漏斗，用15mL三氯甲烷分次洗涤烧杯，洗液并入漏斗。以下按a法中自“振摇2分钟，静止分层”起依法操作，最后加入2.5mL苯-乙腈混合液，此溶液每毫升相当于4g样品。发酵酒类：用酱油、醋的测定方法，但不加氯化钠。样品测定样品测定 薄层板的制备：称取约3g硅胶G，加相当于硅胶量的2-3倍左右的水，用力研磨1-2分钟，至成糊状后立即倒入涂布器内，推铺成520cm、厚度为0.25 mm的薄层板三块。于空气中干燥约15分钟后，在100下活化2小时，取出放入干燥器中保存。点样：将薄层板边缘附着的吸附剂刮净，在距薄层

24、板底端3cm的基线上用微量注射器滴加样液和标准液：第一点：10uL 0.04ug/mL AFT B1 标准使用液。第二点：20uL样液第三点：20uL 样液+10uL 0.04ug/mL AFT B1标准使用液。第四点：20uL 样液+10uL 0.2ug/mL AFT B1标准使用液。要求点距边缘和点间距约为1cm,样点直径约3cm,大小相同，点样时可用电吹风冷风边吹边点。展开：在展开槽内加10mL无水乙醚，将点好样的薄层板预展12cm，取出挥干。再于另一展开槽内加10mL 丙酮+三氯甲烷（8+92）混合溶剂，展开10-12cm，取出挥干。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（

25、杨玉红、田艳花主编）结果观察：将展开好的薄板放在365nm的紫外灯光下观察：a.若第一点无荧光或都无荧光。说明薄板或展开剂未制备好，需重新制备。b.第一点有荧光，而其余三点无荧光。说明样液中有荧光猝灭剂，样液需重新制备。c.第一点有荧光，第二点无荧光，三、四点有荧光。说明样液不含AFT B1或含量小于最低检出量。d.四个点都有荧光。需做确证实验后再进行定量。确证实验：于另一薄板上左边依次点二个样，第一点：10uL0.04ug/mL AFT B1标准使用液；第二点，20uL样液。在以上两点各加一小滴三氟乙酸（TFA），待反应5min后，用电吹风热风2分钟，使温度不高于40。再于薄层板的右边点以下

26、二个点：第三点：10uL 0.04ug/L AFT B1标准使用液。第四点：20uL样液；展开(方法同)，于紫外光下观察样液是否产生与AFT B1标准点相同的衍生物,未加TFA的第三、四点作空白对照。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）稀释定量：若第二点的荧光强度比第一点强，则根据其强度估计减少点样体积，于另一薄板上点四个点：第一点：10uL 0.04ug/mL AFT B1标准使用液第二点：10uL 样液第三点：15uL 样液第四点：20uL 样液展开后取荧光强度与第一点相同的样点进行计算。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花

27、主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中X 样品中AFT B1 的含量，ug/kg(ppb)；V1稀释前样液的总体积，mL；D 样液的稀释倍数；V2出现同等荧光强度的稀释后样液点样量mL；m加入苯乙腈混合液溶解时相当于样品的质量，g；0.004黄曲霉毒素B1的最低检出量，ug。mVDVX211000004.05 5计算计算 试样经过甲醇+水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析净化，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上，此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性。用水将免疫亲和柱上杂质除去.以甲醇通过免疫亲和层析

28、柱洗脱，加入溴溶液衍生，以提高测定灵敏度。洗脱液通过荧光光度计测定黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)总量。免疫亲和层析净化荧光光度法测定大米中黄曲霉毒素免疫亲和层析净化荧光光度法测定大米中黄曲霉毒素 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）2 2.试剂试剂甲醇(CH30H):色谱纯；甲醇+水(7+3):取70 mL 甲醇加 30 mL 水；甲醇+水(8+2):取80 ml 甲醇加 20 ml 水；氯化钠(NaCl)；磷酸氢二钠(Na2HPO4)；磷酸二氢钾(Na2HPO4)；氯化钾(KCl)；溴溶液储备液(0.01%):称取适量溴，溶于水，配

29、成0.01%的储备液，4避光保存；溴溶液工作液(0.002%):取10ml 0.01%的溴溶液加入 40ml 水混匀，于棕色瓶中保存备用。需每次使用前配制；二水硫酸奎宁(C20H24N2O2H2SO42H20)；硫酸溶液(0.05mol/L):取2.8ml浓硫酸，缓慢加入适量水中，冷却后定容至 1000ml；荧光光度计校准溶液:称取3.40g 硫酸奎宁(C20H24N2O2H2SO42H20)用 0.05mol/L 硫酸溶液稀释至 100mL，此溶液荧光光度计读数相当于 20 g/L 黄曲霉毒素标准溶液。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）3.3.仪器仪器

30、荧光光度计、高速均质器.18000r/min22000r/min、黄曲霉毒素免疫亲和柱 玻璃纤维滤纸:直径11cm，孔径1.5m、玻璃注射器:10mL,20mL、玻璃试管:直径12mm，长75mm，无荧光特性、空气压力泵。4.4.操作步骤操作步骤提取提取准确称取经过磨细(粒度小于2mm)的试样25.0g于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠及甲醇+水(7+3)至125.0mL(V1)，以均质器高速搅拌提取2 min定量滤纸过滤，准确移取15.00 mL(V2)滤液并加入30.0mL(V3)水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤12次，至滤液澄清，备用。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编

31、）（杨玉红、田艳花主编）净化净化 将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确移取15.00 mL(V4)样品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6 mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，抽干。以10 mL水淋洗柱子两次，弃去全部流出液，抽干。准确加入1.00 mL(V)色谱级甲醇洗脱，流速为1mL/min2 mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。荧光光度计校准荧光光度计校准 在激发波长360nm，发射波长450nm 条件下，以0.05m ol/L硫酸溶液为空白，调节荧光光度计的读数值为0.0g/L；以荧光光度计校准溶液(4.12)调节荧光光

32、度计的读数值为20.0 g/L。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）样液测定样液测定取上述净化后的甲醇洗脱液加入1.00mL 0.002%溴溶液，混匀，静置1min按条件进行 操作，于荧光光度计中读取样液中黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)的浓度 c(空白试验空白试验 用水代替试样，按步骤做空白试验。5.5.结果计算结果计算样品中（B1B2G1G2）的含量(X)以微克每千克表示，按下式计算：2022-7-28食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）WVCCX)(0143221)(VVVVVmW食品分析与检测食品分析与检测（杨

33、玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）式中:X 样品中黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)含量，g/kg；C1 试样中黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)的含量，g/kg；C0 空白试验黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)的含量，g/L；V 最终甲醇洗脱液体积，mL；W 最终净化洗脱液所含的试样质量，g；m 试样称取的质量的数值，g；V1 样品和提取液总体积，mL；V2 稀释用样品滤液体积，mL；V3稀释液体积，mL；V4通过亲和柱的样品提取液体积，mL。6.6.说明及注意事项说明及注意事项方法操作中所有试剂不得出现荧光干扰物质。每个试样平行测定两次，以其算术平均值作为结果。计算结果精确到0

34、.1g/L。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）项目三食品中动、植物毒素的测定项目三食品中动、植物毒素的测定食品中的天然毒素是指某些动、植物中所含有的有毒天然成分，如河豚中含有河豚毒素、苦杏仁中的氰化物、毒蘑菇中含有的毒肽或毒蝇碱等。有些动植物食品是由于储存不当而形成某些有毒物质，如马铃薯发芽后可产生龙葵碱毒素。一、常见的天然毒素一、常见的天然毒素(一一)动物性食品毒素动物性食品毒素动物性食品含有天然毒素的多为海产品。主要包括以下两类：1.鱼类的内源性毒素 2.贝类毒素 （二）植物性食品毒素（二）植物性食品毒素1.有毒植物蛋白、氨基酸2.毒苷 主要有三类：氰

35、苷类、致甲状腺肿素和皂苷。3.生物碱 主要是指存在于植物中的含氮碱性化合物。组胺的测定组胺的测定动物类食品（如鱼肉）中组胺的测定是利用其与重氮试剂反应生成红色化合物的现象予以鉴定的。重氮试剂一般称取0.1g对硝基苯胺，置于100 mL 0.1moL/L HCL溶液中。取5 mL移至冰箱中冷却，加入5亚硝酸钠溶液0.1 mL，混匀，冷却。具体方法如下：鱼肉样品去皮、去骨、去内脏，置于烧杯中，加入相当于样品9倍的水，用玻璃棒将鱼肉打碎，再加入等量5三氯乙酸溶液，搅拌均匀，过滤。取滤液2 mL，滴加0.5 NAOH溶液中和，加入1 mL 4Na2CO3溶液，移入冰箱中冷却5min，加入1 mL重氮化

36、试剂，静置5min后，加入乙酸乙酯10 mL，振摇30s，静置。如乙酸乙酯层呈现红色，则表示鱼肉中有组胺存在。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）操作方法：取适量样品置于烧杯中，加入适量甲醇，用1的乙酸溶液调pH为45，在水浴中回流浸出20min，取下，离心分离后收集上清液。重复回流提取一次，收集离心后的上清液，移入蒸发皿中，在水浴上蒸发至糖浆状，用乙醚分数次洗涤，去除脂肪后，加少量水溶解糖浆，过滤。取滤液0.5mL注入小白鼠腹腔内，观察1530min。若在此期间小白鼠出现不安，突然旋动，继之走路蹒跚，呼吸急促，最后突然跳起，翻身，四肢痉挛而死，则样品中有河

37、豚毒素存在。河豚毒素的测定河豚毒素的测定-生物试验法生物试验法食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）操作方法：取适量样品置于烧杯中，加入适量甲醇，再加入1的乙酸溶液至呈微酸性，在水浴中回流浸出20min，取下，离心分离后收集上清液。重复回流提取一次，收集离心后的上清液，移入蒸发皿中，在水浴上蒸发至糖浆状，用乙醚分数次洗涤，去除脂肪后。将所提取浆状物质溶于浓硫酸后，再加入少量重铬酸钾呈现绿色，则样品中有河豚毒素存在。河豚毒素的测定河豚毒素的测定-呈色反应法呈色反应法食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）操作方法：取适量样品置于烧

38、杯中，加入适量甲醇，再加入1的乙酸溶液至呈微酸性，在水浴中回流浸出20min，取下，离心分离后收集上清液。重复回流提取一次，收集离心后的上清液，移入蒸发皿中，在水浴上蒸发至糖浆状，用乙醚分数次洗涤，去除脂肪。将得到的浆状物质少许溶于10mL 0.5的乙酸溶液中，用1cm比色皿，于波长250300nm检测吸光度，在波长270nm出现最大吸收峰，为河豚毒素特征吸收波长。河豚毒素的测定河豚毒素的测定-紫外分光光度法紫外分光光度法食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）项目项目四四 食品食品加工过程

39、中形成的有害物质的检测加工过程中形成的有害物质的检测食品加工对食物营养素的影响具有双重性。一方面加工可以有效地杀灭微生物并钝化酶的活性，减小微生物和酶对加工工艺及营养价值的不利影响，破坏食物中某些抗营养因子和有毒物质，从而提高食物的消化率和营养价值；另一方面则由于各种营养素稳定特性以及对不同加工工艺适应程度的差异，在加工中也会造成营养素不同程度的破坏会损失，甚至在加工过程中还会产生一些有害物质，对人体健康可产生很大的危害。如，在习惯吃熏鱼的冰岛、芬兰和挪威等国家，胃癌的发病率非常高。我国胃癌和食道癌高发区的居民也有喜食烟熏肉和腌制蔬菜的习惯。在这几类食品加工过程中形成的有害物质主要可分为三类：

40、N亚硝基化合物、多环芳烃和杂环胺。食品中苯并a芘的测定方法有荧光分光光度法、目测比色法、气相色谱法和液相色谱法等。荧光分光光度法可准确用于苯并a芘的定量分析，是我国食品卫生检验标准的首选方法，也是公认的方法之一。食品中苯并a芘的允许量标准如表8-3所示3,4苯并芘的检测苯并芘的检测食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）品种指标品种指标肉制品烧烤猪肉、鸭、鹅、鸡5植物油花生油10叉烧肉、羊肉串5菜油10火腿、板鸭5茶油10烟熏鱼5其他油10熏鸡、熏牛肉、熏马肉5粮食稻谷5熏红肠、香肠5小麦5植物油豆油10大麦5表8-3 食品中苯并a芘的允许量标准 单位：g/样品

41、先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提取液经液-液分配或色谱柱净化，然后在乙酰化滤纸上分离苯并（a）芘，因苯并（a）芘在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点，将分离后有苯并（a）芘的滤纸部分剪下，用溶剂浸出后，用荧光分光光度计测荧光强度与标准比较定量。2 2试剂试剂苯、环己烷（或石油醚，弗程3060）、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜、无水乙醇、乙醇（95%）、氢氧化钾、无水硫酸钠。展开剂：乙醇：二氯甲烷（2：1）、层析用氧化铝（中性）、乙酰化滤纸。3,4苯并芘的检测苯并芘的检测-荧光法荧光法食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）1.1.原理原理 苯并（a）芘标准溶液：精密

42、称取10.0 mg苯并（a）芘，用苯溶解后移入100 mL棕色容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于苯并（a）芘100 g。放置冰箱中保存。苯并（a）芘标准使用液：吸取1.00 mL苯并（a）芘标准溶液置于10 mL容量瓶中，用苯稀释至刻度，同法依次用苯稀释，最后配成每毫升相当于1.0及0.1 g苯并（a）芘两种标准使用液，放置冰箱中保存。3.3.仪器仪器层析柱、层析缸（筒）、K-D浓缩器、紫外光灯：带有波长为365 nm或254 nm的滤光片、振荡器、微量注射器（25 L、50L）、荧光分光光度计。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）4.4.操作步骤操

43、作步骤1.样品处理样品处理称取试样50.00g于三角瓶中，加95乙醇100mL，氢氧化钾12g，装上冷凝管，于水浴（95）加热回流3h，取下三角烧瓶，样液滤入装有100mL水的分液漏斗中。依次用乙醇50mL环己烷150mL分2次洗涤三角瓶，过滤后一并收于分液漏斗中，振摇3min，静置分层，下层液放于第2个分液漏斗中，再用环己烷70mL提取3min，分层后，弃水层。环己烷提取液合并于第1个分液漏斗中，用环己烷8mL淋洗漏斗，洗液一并收入，用40100mL水洗环己烷提取液3次，水洗液合并于第2个分液漏斗中用环己烷30mL，提取1次，振摇1min，分层后弃水层，再用40水50mL重复1次。食品分析与

44、检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）全部环己烷提取液经层析柱纯化，用100mL苯淋洗层析柱，流速2Ml/min。洗脱液用K-D浓缩器浓缩至0.10.5mL，待测。2.纸层析纸层析点样：在乙酰化滤纸条上的一端5 cm处，用铅笔划一横线为起始线，吸取一定量净化后的浓缩液，点于滤纸条上，同时点20 L苯并（a）芘的标准使用液（1 g/mL）。展开：将点样后的乙酰化滤纸上端挂在圆柱形层析缸缸盖的挂钩上，层析缸内加30mL无水乙醇、5mL二氯甲烷为展开剂，滤纸条下端浸入展开剂约1 cm，待溶剂前沿至约20 cm时取出阴干。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉

45、红、田艳花主编）紫外灯照射：在365或254 nm紫外光灯下观察展开后的滤纸条，用铅笔划出标准苯并（a）芘及与其同一位置的样品的蓝紫色斑点，剪下此斑点分别放入小比色管中，各加4 mL苯加盖，插入5060水浴中不时振摇，浸泡15 min。3.测定测定 将样品及标准斑点的苯浸出液移入荧光分光光度计的石英杯中，以365 nm为激发波长，以365460 nm波长进行荧光扫描，所得荧光光谱与标准苯并（a）芘的荧光光谱比较定性。与样品分析的同时做试剂空白，包括处理样品所用的全部试剂同样操作，分别读取样品、标准及试剂空白于波长406、406+5、4065 nm处的荧光强度，按基线法由下式计算所得的数值，为定

46、量计算的荧光强度。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）2022-7-28食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）2/)(411401406FFFF12221111000)(/VVmFFFmX式中：X1样品中苯并（a）芘的含量，g/kg；m1苯并（a）芘标准斑点的质量，g；F标准的斑点浸出液荧光强度，mm；F1样品斑点浸出液荧光强度，mm；F2试剂空白浸出液荧光强度，mm；V1样品浓缩液体积，mL；V2点样体积，mL；m2样品质量，g。4.4.操作步骤操作步骤N亚硝基化合物是具有强致癌性的一类有机化合物，按其化学结构，可分为两类

47、：一类为亚硝胺，另一类为N亚硝酸胺。低相对分子质量的亚硝胺在常温下为黄色油状液体，高相对分子质量的为固体。亚硝胺和N亚硝酸胺在紫外光照射下都可发生光分解反应。约90具有强致癌性，其中N亚硝酸胺是终末致癌物，亚硝胺需要在体内活化后才能成为致癌物。由于N亚硝胺在在食品中含量较低（10g/水平），要求分析方法具有足够的灵敏性和特异性，所以只能有气相色谱热能分析仪（GCTEA）和气相色谱质谱分析仪（GCMS）才能满足这两方面的要求。亚硝胺类化合物的检测亚硝胺类化合物的检测食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）样品中的N一亚硝胺类化合物经水蒸气蒸馏和有机溶剂萃取后，浓缩

48、至一定量，采用气相色谱一质谱联用仪的高分辨峰匹配法进行确认和定量分析。2.2.试剂试剂二氯甲烷、无水硫酸钠、氯化钠、硫酸(1+3)、氢氧化钠溶液(3molL)N一亚硝胺标准溶液、N一亚硝胺标准使用液、耐火砖颗粒。3.3.仪器仪器 水蒸气蒸馏装置、KD浓缩器、气相色谱一质谱联用仪。亚硝胺类化合物的检测亚硝胺类化合物的检测-气相色谱气相色谱质谱测定法质谱测定法 1.1.原理原理 食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）4.4.操作步骤操作步骤水蒸气蒸馏水蒸气蒸馏：称样品取200g，切碎(或绞碎、粉碎)后，置于水蒸气蒸馏装置的蒸馏瓶中(液体试样直接量取200mL)，加

49、入100 mL水(液体试样不加水)，摇匀。在蒸馏瓶中加入120g氯化钠，充分摇动，使氯化钠溶解。将蒸馏瓶与水蒸气发生器及冷凝器连接好，并在锥形接收瓶中加入40 mL。二氯甲烷及少量冰块，收集400 mL馏出液。萃取纯化萃取纯化：在锥形接收瓶中加入80g氯化钠和3mL的硫酸(1+3)，搅拌使氯化钠完全溶解。然后转移到500 mL分液漏斗中，振荡5min，静止分层，将二氯甲烷层分至另一锥形瓶中，再用120 mL二氯甲烷分三次提取水层，合并四次提取液，总体积为160mL。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）对于含有较高浓度乙醇的试样，如蒸馏酒、配制酒等，应用50

50、mL氢氧化钠溶液(3molL)洗有机层两次，以除去乙醇的干扰。浓缩浓缩:将有机层用10 g无水硫酸钠脱水后，转移至KD浓缩器中，加入一粒耐火砖颗粒，于50水浴上浓缩至1 mL备用。气相色谱一质谱联用测定条件气相色谱一质谱联用测定条件a.色谱条件色谱条件.气化室温度：190。.色谱柱温度：对N一亚硝基二甲胺、N一亚硝基=乙胺、N一亚硝基二丙胺N一亚硝基吡咯烷分别为130、145、130、160。食品分析与检测食品分析与检测（杨玉红、田艳花主编）（杨玉红、田艳花主编）.色谱柱：内径1.8 mm3.0mm，长2m的玻璃柱，内装涂以质量分数为15的PEG20M固定液和氢氧化钾溶液(10gL)的80目1