脂联素基因多态性与动脉粥样硬化关系的研究开题报告课件(PPT 21页).pptx

1、绍兴文理学院：XXX指导老师：XXXXXXX第1页，共21页。一、研究背景二、研究目的三、研究方法四、可行性分析五、技术路线六、准备工作七、时间进度安排第2页，共21页。一、研究背景（一、研究背景（1）v1995 年 Scherer PE和Hu E分别独立地在小鼠脂肪组织中发现了一种新的蛋白质，分别命名Acrp30和AdipoQ；v1996 年 在人血浆内分离获得人脂联素（adiponectin），即明胶结合蛋白28（GBP28）；v1999 年命名为脂联素。第3页，共21页。目前已有许多有关脂联素基因的单核苷酸多态性 (single nucleotide polymorphism,SNP)与

2、动脉粥样硬化的报道，但结果不尽一致。研究背景（研究背景（2）第4页，共21页。vFilippi等研究发现：脂联素基因与早发冠心病显著相关，在年轻的冠心病患者（50岁），脂联素基因的单核苷酸多态性（+276GT）与冠心病有显著的相关性,且携带有SNP+276GT的患者脂联素水平明显降低。vKim SH等研究发现：携带SNP+276GT与动脉粥样硬化没有明显相关性，而携带SNP+45 T G基因型的患者有更高的动脉粥样硬化风险。第5页，共21页。脂联素与胰岛素抵抗的相关性脂联素与胰岛素抵抗的相关性 Menzaghi 等发现脂联素基因45位和276位SNP 都与胰岛素抵抗的一些特性有明显的相关性，而

3、由 两个SNP 组成的单倍体与胰岛素抵抗的许多特性有 显著的相关性：纯合子个体表现为体重增加，收缩 压和舒张压升高，胰岛素和空腹血糖水平上调而血 浆脂联素水平则降低；第6页，共21页。而在意大利高加索人中也发现脂联素基因SNP+276 位G T 与高BMI 和高胰岛素抵抗指数相关，也与血浆脂联素水平有关，未发现SNP+45 TG与胰岛素抵抗的相关性；在法国高加索人中,则未发现这两个SNPs 与2 型糖尿病和胰岛素抵抗的相关性。第7页，共21页。研究背景（研究背景（3）第8页，共21页。这些研究表明脂联素是动脉粥样硬化的保护因素，但其抑制动脉粥样硬化的具体机理仍有待进一步研究。研究背景（研究背景

4、（4）第9页，共21页。二、研究目的二、研究目的v1）了解台州地区脂联素基因的多态性情况；v2）研究脂联素基因的不同多态性位点与动脉粥样硬化的关系；v3）寻找与动脉粥样硬化密切相关的脂联素基因多态性位点。第10页，共21页。三、研究方法三、研究方法（1）研究对象研究对象 病患组病患组：100例确诊动脉粥样硬化的患者，整理详细病史资料（包括患者年龄，性别，身高，体重，是否吸烟，血压以及临床表现等）对照组对照组：100例健康对照组人群，排除肝、肾、甲状腺病变和糖尿病等（年龄、性别等与动脉粥样硬化患者匹配）第11页，共21页。（2）冠状动脉狭窄程度以及颈动脉狭窄程度评估冠状动脉狭窄程度以及颈动脉狭窄

5、程度评估 应用数字血管造影机（DSA）对动脉粥样硬化患者进行冠状动脉造影，观测血管病变的数量、部位，病变的程度、性质等，判断患者冠状动脉粥样硬化狭窄程度；应用彩色多普勒超声对颈动脉粥样硬化狭窄程度进行评估。第12页，共21页。（3）血清血脂水平、血糖水平、心肌酶水平测定血清血脂水平、血糖水平、心肌酶水平测定 1）对所有研究对象采集其促凝血4ml；2）高速离心促凝血标本，分离血清；3）用雅培全自动生化分析仪及其配套试剂测定血脂水平、血糖以及心肌酶水平；第13页，共21页。（4）脂联素基因多态性的判读脂联素基因多态性的判读 1）采集所有研究对象的EDTA-K2抗凝血5ml；2）对EDTA-K2抗凝

6、血，利用DNA提取试剂盒，提取全血DNA；3）利用设计的引物进行PCR扩增扩增，再针对特异位点如SNP45位点、SNP276位点、SNP11377位点和SNP11391位点进行酶酶切切，分析脂联素基因的多态性。第14页，共21页。（5）统计学分析统计学分析 采用SPSS15.0统计软件，结合患者临床资料，影像学资料、超声资料以及脂联素基因不同多态性位点情况综合分析综合分析脂联素基因多态性与动脉粥样硬化的关系，并寻找与动脉粥样硬化密切相关的脂联素基因多态性位点。第15页，共21页。四、可行性分析四、可行性分析v我们与临床科室有密切联系，可收集确诊动脉粥样硬化病人的详细病史资料v我院有优秀的心血管

7、内科医生以及影像科医生、超声科医生，可通过DSA、彩色多普勒超声对动脉粥样硬化患者的冠状动脉狭窄程度以及颈动脉的狭窄程度进行评估v检验科有充足的实验设备与优秀的人才资源第16页，共21页。五、技术路线五、技术路线确诊确诊AS患者患者对照组对照组临床资料收集临床资料收集外周血采集外周血采集冠状动脉造影冠状动脉造影彩色多普勒超声彩色多普勒超声统计学分析统计学分析促凝血促凝血4ml高速离心留高速离心留取血清取血清生化指生化指标测定标测定EDTA-K2抗凝抗凝血血5ml提提取取外外周周血血DNAPCR扩扩增增PCR产产物物纯纯化化酶酶切切脂脂联联素素基基因因多多态态性性分分析析第17页，共21页。六、

8、准备工作六、准备工作v收集了80例动脉粥样硬化病人EDTA-K2抗凝血和促凝血（-80冷藏），且已经整理其一部分病史资料，包括患者的年龄、性别、肝肾功能检查、心肌酶检查、血脂检查等各项生化检测资料；v给患者做了DSA造影，彩色多普勒超声检测，根据这些检测结果可判断患者冠状动脉粥样硬化和颈动脉粥样硬化狭窄程度。第18页，共21页。七、时间进度安排七、时间进度安排 2009.9-2009.11 v完成标本收集工作，并收集整理动脉粥样硬化患者的详细病史资料v完成血清血糖、血脂、心肌酶等的测定v提取全血DNA，完成引物设计第19页，共21页。2009.12-2010.4v对全血DNA用设计好的引物进行PCR扩增，并找到不同的限制性酶切位点，进行酶切分型v结合患者临床资料统计分析脂联素基因多态性与动脉粥样硬化的关系,并完成一篇论文第20页，共21页。Thank you!第21页，共21页。