结核病实验室诊断ppt课件(PPT 81页).pptx

1、第1页，共81页。结核病是一个古老的疾病，至今仍然严重结核病是一个古老的疾病，至今仍然严重威胁着人类健康。威胁着人类健康。近十几年来，近十几年来，由于结核菌的耐药性、由于结核菌的耐药性、HIV/TBHIV/TB双重感染双重感染 移民（流动人口）问移民（流动人口）问题题 使全球结核病控制工作面临严重挑战。使全球结核病控制工作面临严重挑战。第2页，共81页。据世界卫生组织估计目前全球约有：据世界卫生组织估计目前全球约有：1/31/3人口（人口（2020亿）感染结核菌；亿）感染结核菌；20002000万结核病人；万结核病人；每年有每年有800800万万-1000-1000万新发病例；万新发病例；每年

2、每年300300万人死于结核病；万人死于结核病；第3页，共81页。我国的结核病疫情依然十分严重，是世界上结我国的结核病疫情依然十分严重，是世界上结核病患病率最高的核病患病率最高的2222个国家之一。个国家之一。是耐药结核病最多的全球是耐药结核病最多的全球2727个国家之一。个国家之一。每年新登记的结核病患者约每年新登记的结核病患者约130130万。万。第4页，共81页。20002000年全国结核病流行病学抽样调年全国结核病流行病学抽样调 查初步结果显示：查初步结果显示：全国受结核菌感染人口超过全国受结核菌感染人口超过5.65.6亿；亿；全国现有传染性肺结核病人全国现有传染性肺结核病人20020

3、0万，传染性肺结核患病率为万，传染性肺结核患病率为157.8/10157.8/10万。万。结核病死亡率为结核病死亡率为9.8/109.8/10万，在各种死亡原因中占第万，在各种死亡原因中占第1111位。位。结核菌耐药率：结核菌耐药率：27.8%27.8%，初始耐药率，初始耐药率18.6%18.6%，获得性耐药率：，获得性耐药率：46.5%46.5%。INH:17.6%INH:17.6%，SMSM：17.3%17.3%，RFPRFP：16.6%16.6%，EMBEMB：1.5%1.5%，MDRMDR：10.7%10.7%。非结核分枝杆菌感染：非结核分枝杆菌感染：11%11%第5页，共81页。时时

4、间间 肺肺结结核核 患患病病率率 涂涂（+）患患病病率率 肺肺结结核核 病病人人数数 涂涂（+）病病人人数数 1 19 97 79 9 7 71 17 7/1 10 0 万万 1 18 87 7/1 10 0 万万 6 6 9 90 00 0 0 00 00 0 1 1 8 80 00 0 0 00 00 0 1 19 98 84 4/8 85 5 5 55 50 0/1 10 0 万万 1 15 56 6/1 10 0 万万 5 5 7 70 00 0 0 00 00 0 1 1 6 62 20 0 0 00 00 0 1 19 99 90 0 5 52 23 3/1 10 0 万万 1 1

5、3 34 4/1 10 0 万万 5 5 9 93 30 0 0 00 00 0 1 1 5 51 10 0 0 00 00 0 2 20 00 00 0 3 36 67 7/1 10 0 万万 1 12 22 2/1 10 0 万万 5 5 0 00 00 0 0 00 00 0 1 1 5 50 00 0 0 00 00 0 第6页，共81页。k是结核病临床诊断和治疗的重要依据是结核病临床诊断和治疗的重要依据/是直接发现病原菌的诊断方法，比影象学、免疫学等检查是直接发现病原菌的诊断方法，比影象学、免疫学等检查具有更高的特异性具有更高的特异性/是确定、调整化疗方案的重要依据是确定、调整化疗方

6、案的重要依据k是国家结核病控制规划（是国家结核病控制规划（NTP）的重要组成部分）的重要组成部分/是发现传染源的最主要途径和手段是发现传染源的最主要途径和手段/是考核疗效、评价防治效果的可靠指标是考核疗效、评价防治效果的可靠指标第7页，共81页。第8页，共81页。结核分枝杆菌是结核分枝杆菌是18821882年郭霍（年郭霍（Robert KochRobert Koch）从肺结核病人痰标本中发现。是人类结核从肺结核病人痰标本中发现。是人类结核病的主要病原菌。病的主要病原菌。第9页，共81页。结核分枝杆菌属原核生物界、厚壁菌门、裂植菌纲、放线菌目、分枝杆菌科的分枝杆菌属，分枝杆菌属种类甚多，目前已命

7、名的有200多种，一般可分为缓慢生长和快速生长两大类。第10页，共81页。q分枝杆菌呈分支状生长，分枝杆菌呈分支状生长，营养要求比普通营养要求比普通细菌高，是一种生长缓慢的革兰氏阳性杆菌。细菌高，是一种生长缓慢的革兰氏阳性杆菌。q经石炭酸复红染液着色后，不被盐酸酒精经石炭酸复红染液着色后，不被盐酸酒精脱色，故称此类细菌为脱色，故称此类细菌为第11页，共81页。类别类别 Rubyun 分群分群 对人致病的分枝杆菌对人致病的分枝杆菌 缓缓 结核分枝杆菌复合群结核分枝杆菌复合群 人型、牛型、非洲型人型、牛型、非洲型 慢慢 非结核分枝杆菌非结核分枝杆菌 I 群群 堪萨斯、海、猿堪萨斯、海、猿 生生 非

8、结核分枝杆菌非结核分枝杆菌 II 群群 瘰疬瘰疬 长长 非结核分枝杆菌非结核分枝杆菌 III 群群 鸟鸟-胞内、蟾胞内、蟾 快速生长快速生长 非结核分枝杆菌非结核分枝杆菌 IV 群群 偶发、龟偶发、龟 第12页，共81页。结核分枝杆菌结核分枝杆菌组成组成：细胞壁、细胞膜、细胞质、核物质细胞壁、细胞膜、细胞质、核物质第13页，共81页。q厚度为厚度为1035nm，较一般细菌的细胞壁厚。，较一般细菌的细胞壁厚。q含有大量脂类，具有坚韧性和疏水性。含有大量脂类，具有坚韧性和疏水性。q功能：功能：保护细菌的固有形态保护细菌的固有形态抵抗酸碱物质及宿主细胞对细菌的破坏和抵抗酸碱物质及宿主细胞对细菌的破坏

9、和 杀伤杀伤q如果细胞壁有缺陷，细菌只能在高渗环境下如果细胞壁有缺陷，细菌只能在高渗环境下生存，则称此类细菌为生存，则称此类细菌为L型细菌。型细菌。第14页，共81页。q细胞壁内层围绕于细胞质外的富于弹性的细胞壁内层围绕于细胞质外的富于弹性的半透膜。半透膜。q主要成分是脂类（磷脂）和蛋白质。主要成分是脂类（磷脂）和蛋白质。q功能：功能：细菌与外界环境进行物质交换细菌与外界环境进行物质交换 在细胞内一系列代谢活动中起重要作用在细胞内一系列代谢活动中起重要作用第15页，共81页。脂类脂类 多糖多糖 蛋白质蛋白质 核酸核酸 盐类盐类第16页，共81页。结核菌体脂类含量比其他细菌高，占细胞壁干重的结核

10、菌体脂类含量比其他细菌高，占细胞壁干重的60，是引起结核病特征性变化与表现的物质基础。，是引起结核病特征性变化与表现的物质基础。脂质含量与细菌毒力相关，毒力强的脂质含量与细菌毒力相关，毒力强的Mtb含脂最高。含脂最高。脂质只要有磷脂、脂肪酸、蜡质等成分，多与蛋白质、脂质只要有磷脂、脂肪酸、蜡质等成分，多与蛋白质、多糖以结合形式存在。多糖以结合形式存在。第17页，共81页。磷脂：刺激机体单核细胞增生，增强菌体成分诱磷脂：刺激机体单核细胞增生，增强菌体成分诱导机体致敏作用。导机体致敏作用。索状因子：与索状因子：与Mtb毒力密切相关。毒力密切相关。硫脂硫脂 蜡质：占脂质总量蜡质：占脂质总量48，分，

11、分A、B、C、D。结核菌酸：促进机体形成结核结节。结核菌酸：促进机体形成结核结节。分支菌酸：为结核菌菌体的重要成分，与结核菌分支菌酸：为结核菌菌体的重要成分，与结核菌的抗酸性有关。的抗酸性有关。第18页，共81页。由阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖、由阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖、甘露聚糖和葡聚糖等组成。甘露聚糖和葡聚糖等组成。多以脂类、蛋白质和核酸等结合形式存多以脂类、蛋白质和核酸等结合形式存在。在。是免疫反应的重要抗原物质。是免疫反应的重要抗原物质。第19页，共81页。Mtb含多种蛋白质组分，由不同菌体蛋白及含多种蛋白质组分，由不同菌体蛋白及活菌在分泌过程中分泌于细胞外的多种蛋活菌在分泌过

12、程中分泌于细胞外的多种蛋白组成。白组成。结核菌的主要抗原性物质。结核菌的主要抗原性物质。结核菌素、结核菌素、PPD为多种蛋白的复合抗原，为多种蛋白的复合抗原，可刺激机体免疫应答。可刺激机体免疫应答。第20页，共81页。RNA含量比含量比DNA高高45倍。倍。RNA分布于细胞质内，分布于细胞质内，DNA存在于细胞核存在于细胞核物质中。物质中。DNA是遗传物质，将遗传信息传给子代，是遗传物质，将遗传信息传给子代，并指导并指导RNA的合成。的合成。RNA是蛋白质和其他细胞成分合成必须的是蛋白质和其他细胞成分合成必须的物质。物质。第21页，共81页。结核分枝杆菌结核分枝杆菌DNADNA中约含中约含40

13、004000个基因组。个基因组。结核分枝杆菌为结核分枝杆菌为2.52.510109 9道尔顿道尔顿,卡介苗株卡介苗株为为2.82.810109 9道尔顿道尔顿 结核分枝杆菌结核分枝杆菌H37RvH37Rv基因组全序列共含基因组全序列共含4.44.410106 6碱基碱基对，平均鸟嘌呤对，平均鸟嘌呤+胞嘧啶含量（胞嘧啶含量（G GC C）为）为65.665.6。第22页，共81页。钙、钾、镁、铁、磷等，约占菌体成分钙、钾、镁、铁、磷等，约占菌体成分的的 6。第23页，共81页。结核菌是需氧菌，但在含有比较低氧的环结核菌是需氧菌，但在含有比较低氧的环境下也能生存，比如骨结核，淋巴结核。境下也能生存

14、，比如骨结核，淋巴结核。在少量二氧化碳的环境中生长的也很好。在少量二氧化碳的环境中生长的也很好。结核菌生长的适宜温度和人体相近为结核菌生长的适宜温度和人体相近为37370 0C C 结核菌生长所必需的元素有氧、碳、氮、结核菌生长所必需的元素有氧、碳、氮、氢、磷、钾、镁等。氢、磷、钾、镁等。第24页，共81页。k结核菌是兼性需氧菌，无鞭毛、荚膜，无运动能力；结核菌是兼性需氧菌，无鞭毛、荚膜，无运动能力；k形状：形状：0.3-0.60.3-0.61-41-4微米的细长杆状，直或稍弯，微米的细长杆状，直或稍弯，镜下常堆积成团、成束、排列杂乱无章，也有呈串珠样、镜下常堆积成团、成束、排列杂乱无章，也有

15、呈串珠样、链状、索状者。链状、索状者。k革兰氏染色阳性，萋革兰氏染色阳性，萋-尼氏染色镜下的抗酸杆菌为淡尼氏染色镜下的抗酸杆菌为淡兰色背景下的红色或粉红色细长杆菌。荧光染色镜下的兰色背景下的红色或粉红色细长杆菌。荧光染色镜下的抗酸杆菌在暗色背景下呈黄绿色或橙色荧光。抗酸杆菌在暗色背景下呈黄绿色或橙色荧光。第25页，共81页。k抗酸性是分枝杆菌的重要特征。其化学抗酸性是分枝杆菌的重要特征。其化学基础是分枝菌属的细胞壁脂质含量较高，基础是分枝菌属的细胞壁脂质含量较高，并含有大量分枝菌酸。并含有大量分枝菌酸。k抗酸性与细菌细胞壁的完整性关系密切，抗酸性与细菌细胞壁的完整性关系密切，若菌体自溶（如标本

16、保存时间过长、温度若菌体自溶（如标本保存时间过长、温度过高）、结核菌的异型相（如：过高）、结核菌的异型相（如：L-L-型菌、型菌、干酪或脓液中的结核菌）可能失去抗酸性。干酪或脓液中的结核菌）可能失去抗酸性。第26页，共81页。生长适宜温度生长适宜温度37C37C，PH6.8-7.2PH6.8-7.2。营养要求较高。在常。营养要求较高。在常用的罗氏（用的罗氏（Lowenstein-JensenLowenstein-Jensen）培养基上生长的）培养基上生长的菌落粗糙、凸起、致密，有表面皱折，呈颗粒、菌落粗糙、凸起、致密，有表面皱折，呈颗粒、结节或菜花样，乳白色或米色，不透明。结节或菜花样，乳白色

17、或米色，不透明。结核菌生长缓慢，在一般培养基上分裂一代需要结核菌生长缓慢，在一般培养基上分裂一代需要1010多小时，根据接种菌量的多少，一般多小时，根据接种菌量的多少，一般10-3010-30天肉眼可见天肉眼可见菌落生长。菌落生长。第27页，共81页。诊断发展阶段诊断发展阶段：经验性、经验性、X X线线影像，細菌影像，細菌学学诊断、免疫学（细胞、体液）诊断、分子生物诊断、免疫学（细胞、体液）诊断、分子生物学诊断学诊断。控制结核病的流行，诊断是所有措施控制结核病的流行，诊断是所有措施中最为关键的一步中最为关键的一步。第28页，共81页。结核病实验室检查包括细菌学检查以及近年来在分子生物学和免疫学

18、等领域建立的检测新技术。细菌学检查是结核病确诊和治疗的主要依据。检测新技术为可疑结核病患者的早期诊断与合理治疗带来新的希望。第29页，共81页。第30页，共81页。1 1、结核病细菌学检查要有独立的实验室，不得与、结核病细菌学检查要有独立的实验室，不得与其他实验室混用，最好为其他实验室混用，最好为P3P3级实验室；级实验室；2 2、培养基制备、洗刷等相对洁净的操作与涂片镜检、培养基制备、洗刷等相对洁净的操作与涂片镜检、培养前处理、药敏试验等污染操作要有独立分开的培养前处理、药敏试验等污染操作要有独立分开的场所，最好分别在专用的房间进行；场所，最好分别在专用的房间进行；3 3、基层只从事涂片镜检

19、的实验室只拥有一间独立房、基层只从事涂片镜检的实验室只拥有一间独立房舍的情况下，相对洁净区（镜检区、登记区）与污舍的情况下，相对洁净区（镜检区、登记区）与污染区（涂片、染色区）要有明显区分。染区（涂片、染色区）要有明显区分。第31页，共81页。染色池染色池收集标本收集标本用的桌子用的桌子工作台工作台采采光光用用窗窗户户（固定）（固定）实验室门实验室门试试剂剂柜柜显微镜显微镜记录用记录用的桌子的桌子可以开关的窗户可以开关的窗户第32页，共81页。h废弃标本、痰盒和污染物均须经高压蒸汽灭菌后方能丢弃或废弃标本、痰盒和污染物均须经高压蒸汽灭菌后方能丢弃或清洗；清洗；h如需焚烧处理，须置于焚烧炉内彻底

20、焚化。焚化不彻底如需焚烧处理，须置于焚烧炉内彻底焚化。焚化不彻底或暴露焚烧是危险的；或暴露焚烧是危险的；h专业化处理专业化处理h试验操作工作面应以试验操作工作面应以3%3%石炭酸或其他可靠的消毒液擦拭，再用石炭酸或其他可靠的消毒液擦拭，再用紫外线灭菌灯照射紫外线灭菌灯照射2 2小时小时第33页，共81页。第34页，共81页。第35页，共81页。合格的痰标本：应是患者深呼吸后，由肺部深处合格的痰标本：应是患者深呼吸后，由肺部深处咳出的分泌物。包括干酪痰、粘液痰和血痰。咳出的分泌物。包括干酪痰、粘液痰和血痰。第36页，共81页。第37页，共81页。查痰对于结核病的诊断是非常重要的，通过痰检可以知道

21、您是否痰中带菌。如果痰中带有结核菌说明您患有肺结核，具有传染性，应该及时遵医嘱治疗。送检痰标本的质量直接影响检验结果的准确性。请您一定按照下列要求和方法留取合格的痰标本。每个痰盒应分别留取12口痰，请不要将1口痰分开放到2或3个痰盒中。正确的咳痰方法：1、咳嗽前应缓慢地深吸气，吸气后稍屏气片刻。2、躯干略向前倾，两侧手臂屈曲，平放在两侧胸壁下部，内收并稍加力。3、咳嗽时腹肌用力快速收缩，使腹壁内陷。一次深吸气，可连续咳嗽三声。4、停止咳嗽后，收缩腹肌将剩余的气体尽量呼尽。5、重复缓慢吸气动作或平静呼吸片刻，准备再次咳嗽的动作。*注意：部分人如果忽然深吸气容易诱发咳嗽，您可以尝试缓慢或分几次吸气

22、，争取肺泡内充分充气，以增加咳嗽的效率。在这一过程中，要注意动作的连贯性，一气呵成。同时，也可以叩击前胸，或由家属协助叩击后背胸壁。这样震动支气管内的分泌物，能够增加咳嗽排痰的力度。第38页，共81页。第39页，共81页。注意：注意：由于当患由于当患者咳嗽、咳痰时，易者咳嗽、咳痰时，易产生含有结核菌的气产生含有结核菌的气溶胶，感染周边人群溶胶，感染周边人群的机率较高，故采集的机率较高，故采集痰标本时应在远离人痰标本时应在远离人群的开放空间进行，群的开放空间进行，或在通风良好的室内或在通风良好的室内进行。进行。第40页，共81页。第41页，共81页。2 2、血痰：血痰：此类标本是因粘液痰或此类标

23、本是因粘液痰或干酪痰标本中混有血液而形成，干酪痰标本中混有血液而形成，颜色为褐色或深褐色、鲜红色颜色为褐色或深褐色、鲜红色或伴有血丝；涂片染色后镜检或伴有血丝；涂片染色后镜检除能够观察到粘液痰或干酪痰除能够观察到粘液痰或干酪痰的细胞特征外，含新鲜血液的的细胞特征外，含新鲜血液的标本中可见到被染色的血细胞。标本中可见到被染色的血细胞。由于含血标本易干扰由于含血标本易干扰AFBAFB镜检的镜检的结果，故在制片时应尽量避免挑取结果，故在制片时应尽量避免挑取含血标本。含血标本。第42页，共81页。第43页，共81页。4、唾液：唾液：目视观察标本整体外观，以目视观察标本整体外观，以透明或半透明水样、粘度

24、较低的口透明或半透明水样、粘度较低的口腔分泌物为主，标本中有时伴有气腔分泌物为主，标本中有时伴有气泡；涂片染色镜检时，镜下可见少泡；涂片染色镜检时，镜下可见少量口腔上皮脱落细胞量口腔上皮脱落细胞(形态不规则、形态不规则、细胞核着色较细胞质深，核质比接细胞核着色较细胞质深，核质比接近或大于近或大于 1:2)1:2)和口腔内寄生菌，有和口腔内寄生菌，有时可见食物残渣。时可见食物残渣。由于此类标本进行由于此类标本进行AFBAFB检查时检查时的检出率很低，用于对患者确定诊断的检出率很低，用于对患者确定诊断时是不合格的标本。时是不合格的标本。第44页，共81页。第45页，共81页。操作流程操作流程涂涂痰

25、痰膜膜自自然然干干燥燥复复红红加加热热初初染染5 5分分钟钟自自然然干干燥燥镜镜检检流流水水冲冲洗洗美美兰兰复复染染3030秒秒盐盐酸酸酒酒精精脱脱色色流流水水冲冲洗洗流流水水冲冲洗洗第46页，共81页。显微镜检报告方式：显微镜检报告方式：0 0条条/300/300视野：视野：萋萋-尼氏抗酸杆菌阴性尼氏抗酸杆菌阴性1-81-8条条/300/300视野：实报菌数视野：实报菌数3-93-9条条/100/100视野：萋视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（尼氏抗酸杆菌阳性（+）1-91-9条条/10/10视野：视野：萋萋-尼氏抗酸杆菌阳性（尼氏抗酸杆菌阳性（2+2+）1-91-9条条/1/1视野：视野：萋萋-

26、尼氏抗酸杆菌阳性（尼氏抗酸杆菌阳性（3+3+）1010条条/1/1视野：视野：萋萋-尼氏抗酸杆菌阳性（尼氏抗酸杆菌阳性（4+4+）第47页，共81页。（一）为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油镜（一）为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油镜头直接接触玻片上的痰膜。头直接接触玻片上的痰膜。（二）仔细观察（二）仔细观察300300以上的视野。以上的视野。（三）每个工作日，一名镜检人员的玻片阅读（三）每个工作日，一名镜检人员的玻片阅读量一般不应超过量一般不应超过2525张。张。（四）连续阅读（四）连续阅读10101212张玻片后，应休息张玻片后，应休息2020分分钟左右。钟左右。镜检读片镜检读片第48页，共8

27、1页。痰涂片抗酸菌浓度与阳性结果机率痰涂片抗酸菌浓度与阳性结果机率 检出菌数检出菌数 每毫升标本估算菌数每毫升标本估算菌数 阳性结果机率阳性结果机率0/100或更多视野或更多视野 1000 101-2/300视野视野 5000-10000 501-9/100视野视野 约约30000 801-9/10视野视野 约约50000 90（cv）1-9/每视野每视野 约约100000 96.2（cv）10或更多或更多/每视野每视野 约约500000 99.95（cv）第49页，共81页。查痰次数与阳性机率关系查痰次数与阳性机率关系 为什么诊断前强调三涂两培（为什么诊断前强调三涂两培（3S 2C）1 2

28、3 4 5第50页，共81页。第51页，共81页。注意事项：注意事项：选择痰标本中脓性、干酪样的部分涂片阳性率较高；选择痰标本中脓性、干酪样的部分涂片阳性率较高；一张玻片只涂一份标本，玻片一次性使用，防止交叉污染；一张玻片只涂一份标本，玻片一次性使用，防止交叉污染；打开痰盒、涂抹痰膜、烧灼接种环时容易产生气溶打开痰盒、涂抹痰膜、烧灼接种环时容易产生气溶胶，应注意正确操作和自身防护；胶，应注意正确操作和自身防护；石炭酸复红初染时必须加温。石炭酸复红初染时必须加温。第52页，共81页。优点：优点：是直接发现原菌的检查方法，适用于痰、尿、便、体液、是直接发现原菌的检查方法，适用于痰、尿、便、体液、组

29、织等几乎一切标本，有重要的临床诊断价值。组织等几乎一切标本，有重要的临床诊断价值。是发现和确定传染源的重要途径，是考核和评价疗效的重是发现和确定传染源的重要途径，是考核和评价疗效的重要指标，有重要的流行病学意义；要指标，有重要的流行病学意义；操作简便，价格低廉，适于各级实验室开展；操作简便，价格低廉，适于各级实验室开展；快速，数小时可报告结果。快速，数小时可报告结果。第53页，共81页。缺点：缺点：敏感性低：通常每毫升含敏感性低：通常每毫升含5000-100005000-10000条以上抗酸菌才条以上抗酸菌才可得到阳性结果；可得到阳性结果；特异性较低：只能报告特异性较低：只能报告“抗酸菌阳性抗

30、酸菌阳性”，不能区分结核，不能区分结核和非结核分支杆菌；和非结核分支杆菌；镜下只能观察菌体形态，不能辨别死、活菌。镜下只能观察菌体形态，不能辨别死、活菌。第54页，共81页。标本收集、染色液制备、涂片染色程序、显微镜镜检、标本收集、染色液制备、涂片染色程序、显微镜镜检、显微镜的保养和维护、结果的报告和登记、痰片的分显微镜的保养和维护、结果的报告和登记、痰片的分类保存等应按照国家参比实验室的统一标准严格进行类保存等应按照国家参比实验室的统一标准严格进行操作。操作。复查方式：复查方式：自查：试验员当日对已查涂片抽样复查。自查：试验员当日对已查涂片抽样复查。互查：由本实验室其他试验员抽查当日互查：由

31、本实验室其他试验员抽查当日10%10%涂片。涂片。第55页，共81页。全国质控系统：全国质控系统：以参比实验室工作网为基础，以以参比实验室工作网为基础，以逐级督导为基本模式，以现场和非现场督导为主逐级督导为基本模式，以现场和非现场督导为主要方式。要方式。现场督导：现场督导：上级实验室人员赴基层实验室就实验室布上级实验室人员赴基层实验室就实验室布局、安全防护、污染物处理、涂片染色操作、显微镜维局、安全防护、污染物处理、涂片染色操作、显微镜维护状况、日常实验记录等进行考核和指导，并以盲法、护状况、日常实验记录等进行考核和指导，并以盲法、按比例抽取涂片复查。按比例抽取涂片复查。非现场督导：非现场督导

32、：防治人员依据盲法、按比例的原则抽取涂防治人员依据盲法、按比例的原则抽取涂片交实验室复查。片交实验室复查。第56页，共81页。（一）目的：（一）目的：实验室现场评估是相应实验室各项条件的调查总结和质实验室现场评估是相应实验室各项条件的调查总结和质量提高的基本手段之一。量提高的基本手段之一。1.建立相关实验室技术档案：由被督导实验室填写结核病实验建立相关实验室技术档案：由被督导实验室填写结核病实验室基本情况登记表，每次现场评价时需重新核实登记内容。室基本情况登记表，每次现场评价时需重新核实登记内容。2.调查相关实验室调查相关实验室QA措施的制度和执行情况；措施的制度和执行情况；3.调查相关实验室

33、设备状态及安全防护情况；调查相关实验室设备状态及安全防护情况；4.调查操作人员对相关检查程序的认知和掌握程度；调查操作人员对相关检查程序的认知和掌握程度；5.调查相关实验室影响调查相关实验室影响AFB检查质量的因素并提出相应质量检查质量的因素并提出相应质量提高措施、督导改正。提高措施、督导改正。第57页，共81页。单单 位位 名称：名称：实验室名称：实验室名称：主主 任任 姓名：姓名：电话：电话：手机：手机：单单 位位 地址：地址：邮邮 编：编：传真：传真：E-mail：1.结核病实验室技术人员登记结核病实验室技术人员登记 姓名姓名性别性别年龄年龄学历学历专业专业职称职称工作年限工作年限专专(

34、兼兼)职职备注备注2.上一年实验室工作量统计：上一年实验室工作量统计：玻片总张数玻片总张数阴性玻片数阴性玻片数阳性玻片数阳性玻片数玻片阳性率玻片阳性率第58页，共81页。检查的问题检查的问题 指指 标标 试剂名称试剂名称试剂名称试剂名称试剂名称试剂名称现有的染色剂是否现有的染色剂是否都可以使用？都可以使用？最近最近3 3个月是否试个月是否试剂短缺？剂短缺？使用的试剂是否在使用的试剂是否在有效期内？有效期内？石碳酸复红石碳酸复红是是 否否是是 否否亚甲蓝亚甲蓝是是 否否是是 否否5%5%盐酸乙醇盐酸乙醇是是 否否是是 否否镜油镜油是是 否否是是 否否如有填写如有填写“否否”的项目，请简要说明原因

35、：的项目，请简要说明原因：第59页，共81页。指指 标标原料原料可用性可用性质量是否优良质量是否优良充分供应充分供应下列原料是否可下列原料是否可以得到？以得到？痰盒规格是否标痰盒规格是否标准？准？玻片盒是否符合玻片盒是否符合规格标准？是否规格标准？是否数量足够？数量足够？近近3 3个月是否供个月是否供应短缺？应短缺？有否有蒸馏水？有否有蒸馏水？水是否保存在无水是否保存在无菌瓶子里？菌瓶子里？玻片玻片是是 否否 是是 否否储片盒储片盒是是 否否是是 否否是是 否否标准痰盒标准痰盒是是 否否 是是 否否玻片记号笔玻片记号笔是是 否否是是 否否是是 否否 竹（木）签竹（木）签是是 否否是是 否否是是

36、 否否漏斗漏斗是是 否否是是 否否 滤纸滤纸是是 否否 是是 否否染色架染色架是是 否否是是 否否是是 否否灯或燃器灯或燃器是是 否否是是 否否 灯用燃料灯用燃料是是 否否 是是 否否擦镜纸擦镜纸是是 否否 是是 否否红笔红笔是是 否否 供水供水是是 否否是是 否否是是 否否天平天平是是 否否是是 否否 第60页，共81页。检查的问题检查的问题 指指 标标结结 果果痰涂片检查在哪里进行？痰涂片检查在哪里进行？在一个与其他实验室隔开的地方进行；有保证涂片和在一个与其他实验室隔开的地方进行；有保证涂片和镜检独立操作的桌子，有充分的安全通风系统镜检独立操作的桌子，有充分的安全通风系统是是 否否实验室

37、是否通风？如果在打开的窗前玻片，技术员实验室是否通风？如果在打开的窗前玻片，技术员是否知道气流方向和潜在的危险？是否知道气流方向和潜在的危险？是是 否否用哪种消毒剂？用哪种消毒剂？使用针对使用针对TBTB的消毒剂的消毒剂是是 否否近近3 3个月有消毒剂短缺吗？个月有消毒剂短缺吗？消毒剂供应充足消毒剂供应充足是是 否否实验室多长时间消毒一次？实验室多长时间消毒一次？工作的地方应当每天清洁消毒工作的地方应当每天清洁消毒是是 否否用过的玻片怎样处理？是否重复使用？用过的玻片怎样处理？是否重复使用？已经涂抹过标本的玻片不允许重复使用已经涂抹过标本的玻片不允许重复使用是是 否否用过的痰容器怎样处理？是否

38、重复使用？用过的痰容器怎样处理？是否重复使用？痰容器为一次性使用，用过的痰容器应销毁痰容器为一次性使用，用过的痰容器应销毁是是 否否是否有生物危害废物桶？是否有生物危害废物桶？使用有盖的生物危害废物桶使用有盖的生物危害废物桶是是 否否是否有实验室防护服？是否有实验室防护服？在实验室应穿穿好防护服在实验室应穿穿好防护服是是 否否离开实验室前是否应该脱掉实验服？离开实验室前是否应该脱掉实验服？实验服不能穿出实验室以外实验服不能穿出实验室以外是是 否否实验室是否使用手套？手套是否合格？实验室是否使用手套？手套是否合格？应戴符合所从事安全工作要求的防护手套，应戴符合所从事安全工作要求的防护手套，是是

39、否否试验结束后是否洗手？试验结束后是否洗手？遵守正确的洗手程序遵守正确的洗手程序是是 否否实验室是否有上下水实验室是否有上下水?实验室应当有上下水，并设独立洗手池实验室应当有上下水，并设独立洗手池是是 否否实验室是否洁净有序实验室是否洁净有序?干净整洁，物品摆放有序干净整洁，物品摆放有序是是 否否下班后，是否关闭实验室门窗？是否例行安全检查？下班后，是否关闭实验室门窗？是否例行安全检查？关闭好门窗，巡视检查，确保安全后离去关闭好门窗，巡视检查，确保安全后离去是是 否否实验室有否通风？如果在打开的窗前玻片，技术员实验室有否通风？如果在打开的窗前玻片，技术员是否知道气流方向和潜在的危险？是否知道气

40、流方向和潜在的危险？操作人员应背对来风方向操作人员应背对来风方向是是 否否如有填写如有填写“否否”的项目，请简要说明原因：所有痰检室仅一间，且做其它检验项目；操作时未戴防护手套；蔡甸区无上下水的项目，请简要说明原因：所有痰检室仅一间，且做其它检验项目；操作时未戴防护手套；蔡甸区无上下水第61页，共81页。检查的问题检查的问题指指 标标结果结果是否有显微镜？数量是否是否有显微镜？数量是否充分？充分？至少有一台专用于分枝杆菌检查的至少有一台专用于分枝杆菌检查的显微镜，还有另外的显微镜备用。显微镜，还有另外的显微镜备用。是是 否否显微镜功能是否正常？显微镜功能是否正常？随机镜检，通过显微镜能观察到清

41、随机镜检，通过显微镜能观察到清晰的视野，机械调节性能良好。晰的视野，机械调节性能良好。是是 否否显微镜工作场所合适吗？显微镜工作场所合适吗？场所能够适当变更。场所能够适当变更。是是 否否是否有充足的光源？是否有充足的光源？具备功能良好的灯泡和电源，或显具备功能良好的灯泡和电源，或显微镜放置在适当的光源。微镜放置在适当的光源。是是 否否是否常规维护显微镜？是否常规维护显微镜？有油镜头有油镜头,且功能完好整机干净清洁，且功能完好整机干净清洁，有专人负责常规检查维护有专人负责常规检查维护 是是 否否如有填写如有填写“否否”的项目，请简要说明原因：的项目，请简要说明原因：第62页，共81页。检查的问题

42、检查的问题指指 标标结果结果所有保存的玻片，是否符合室所有保存的玻片，是否符合室间质量保证计划的要求？间质量保证计划的要求？玻片保存符合室间质量保证规玻片保存符合室间质量保证规定，所有玻片保存与结核病实定，所有玻片保存与结核病实验室登记本一致。验室登记本一致。是是 否否 所有的玻片是否均保存在玻片所有的玻片是否均保存在玻片盒内？玻片盒上是否有标记？盒内？玻片盒上是否有标记？玻片保存在玻片盒内，涂存盒玻片保存在玻片盒内，涂存盒上应按室内质控要求，标记实上应按室内质控要求，标记实验序号和时间。验序号和时间。是是 否否所有玻片保存之前是否经二甲所有玻片保存之前是否经二甲苯处理过？玻片盒内玻片有无苯处

43、理过？玻片盒内玻片有无交叉污染？交叉污染？玻片保存之前必须经二甲苯处玻片保存之前必须经二甲苯处理，玻片之间无重叠放置。理，玻片之间无重叠放置。是是 否否如有填写如有填写“否否”的项目，请简要说明原因：的项目，请简要说明原因：第63页，共81页。检查的问题检查的问题指标指标结果结果痰盒上是否有病人标记？痰盒上是否有病人标记？痰盒上标记有病人姓名及痰盒序号痰盒上标记有病人姓名及痰盒序号是是 否否是否使用新的玻片进行抗酸杆菌痰涂片？是否使用新的玻片进行抗酸杆菌痰涂片？所有的玻片，使用前是否清洁？所有的玻片，使用前是否清洁？使用新的玻片进行抗酸杆菌痰涂片，玻片使用前要清洁处理使用新的玻片进行抗酸杆菌痰

44、涂片，玻片使用前要清洁处理是是 否否玻片上是否有标记？玻片上是否有标记？玻片按要求标记实验序号玻片按要求标记实验序号是是 否否石碳酸复红多长时间过滤一次？石碳酸复红多长时间过滤一次？石碳酸复红至少每周过滤一次。石碳酸复红至少每周过滤一次。是是 否否亚甲基蓝多长时间过滤一次？亚甲基蓝多长时间过滤一次？亚甲基蓝至少每月过滤一次，如果玻片上见到沉积物及时过亚甲基蓝至少每月过滤一次，如果玻片上见到沉积物及时过滤。滤。是是 否否涂抹一张玻片是否使用一个新木签？涂抹一张玻片是否使用一个新木签？每张玻片使用一个新木签。每张玻片使用一个新木签。是是 否否固定以前，玻片是否在空气中干燥？固定以前，玻片是否在空气

45、中干燥？固定以前，玻片在空气中要干燥完全。固定以前，玻片在空气中要干燥完全。是是 否否玻片是否经过加热固定？玻片是否经过加热固定？经过火焰经过火焰3535次加热固定。次加热固定。是是 否否通常一批染色多少张玻片？通常一批染色多少张玻片？一批最多一批最多10121012张玻片。张玻片。是是 否否染色过程是如何进行的？用石碳酸复红和染色过程是如何进行的？用石碳酸复红和亚甲基蓝染色要多久？怎么脱色？亚甲基蓝染色要多久？怎么脱色？石碳酸复红热染石碳酸复红热染5 5分钟，染色剂不许在玻片上干燥，盐酸酒分钟，染色剂不许在玻片上干燥，盐酸酒精脱色精脱色3 3分钟，仅必要时重复脱色，不要脱色过度，亚甲基分钟，

46、仅必要时重复脱色，不要脱色过度，亚甲基蓝复染蓝复染3030秒钟秒钟是是 否否染色试剂做质量检测吗？染色试剂做质量检测吗？试剂必须用已知阳性玻片进行检验，至少每月一次试剂必须用已知阳性玻片进行检验，至少每月一次是是 否否显微镜多久用擦镜纸清理一次显微镜多久用擦镜纸清理一次?检查完每张玻片之后，均擦干物镜检查完每张玻片之后，均擦干物镜是是 否否报告一个阴性结果要观察多少个视野？报告一个阴性结果要观察多少个视野？300300视野。视野。是是 否否报告一个阳性结果要观察多少个视野？报告一个阳性结果要观察多少个视野？应当检查足够多的视野以提供精确的数量等级。菌量少时至应当检查足够多的视野以提供精确的数量

47、等级。菌量少时至少少100100个视野。个视野。是是 否否 玻片镜检结果如何报告？玻片镜检结果如何报告？结果要按国家结核病防治规划统一标准分级和报告。结果要按国家结核病防治规划统一标准分级和报告。是是 否否第64页，共81页。实验实验序号序号自检自检结果结果督导督导结果结果抗酸杆抗酸杆菌染色菌染色背景背景颜色颜色痰或痰或唾液唾液玻片厚度玻片厚度和大小和大小第65页，共81页。涂抹较厚涂抹较厚 (AFB(AFB)第66页，共81页。复红染色不充分镜下表现复红染色不充分镜下表现v AFB菌体着色浅；菌体着色浅；v AFB菌体异染颗粒不明菌体异染颗粒不明显；显；v 较规范染色菌体细；较规范染色菌体细

48、；第67页，共81页。脱色不充分镜下表现脱色不充分镜下表现(1)v AFB菌体异染颗粒菌体异染颗粒不明显不明显v复染背景无法展现复染背景无法展现v背景细胞复染后显色背景细胞复染后显色较深较深(呈棕呈棕/黑色黑色)第68页，共81页。脱色不充分镜下表现脱色不充分镜下表现(2)v菌体颜色不同；菌体颜色不同；v易造成非抗酸菌易造成非抗酸菌的的“抗酸性抗酸性”；第69页，共81页。脱色不充分镜下表现脱色不充分镜下表现(3)v 血痰中白细胞核血痰中白细胞核出现出现“抗酸性抗酸性”；为避免假阳性结为避免假阳性结果，建议血痰标本必果，建议血痰标本必须进行重复脱色！须进行重复脱色！第70页，共81页。v AF

49、B颜色呈桔黄色颜色呈桔黄色vAFB菌体菌体/细胞与背细胞与背景界线不明显景界线不明显v复染着色度下降复染着色度下降AFB()玻片质量评估图例玻片质量评估图例(5)第71页，共81页。v 背景着色较深背景着色较深v AFB菌体颜色被遮菌体颜色被遮盖盖AFB()玻片质量评估图例玻片质量评估图例(6)第72页，共81页。上一年阴性上一年阴性玻片的总数玻片的总数 玻片阳性率玻片阳性率2.5%5.0%7.5%10.0%13.0%15.0%18.0%300185 129 101 80 67 59 50 400217 143 108 86 70 61 51 500243 154 114 89 71 62 5

50、2 700281 167 121 92 75 65 54 1000318 180 128 96 76 66 55 2000376 197 135 100 79 68 56 5000423 208 141 103 80 69 57 10000441 213 142 104 80 69 5720000450 215 143 104 82 69 57第73页，共81页。a、玻片阳性率：指所有检测的玻片中阳玻片阳性率：指所有检测的玻片中阳性玻片的比例（平均阳性率）。性玻片的比例（平均阳性率）。b b、上一年阴性玻片总数：每年玻片的总、上一年阴性玻片总数：每年玻片的总数减去全年阳性玻片数。数减去全年阳性