抗乙型肝炎病毒新药研究进展课件(PPT 52页).pptx

1、*重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆医科大学病毒性肝炎研究所黄爱龙黄爱龙第1页，共52页。*由乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus,HBV)感染引起的肝脏疾病。第2页，共52页。*结构特征*基因组特征*生物学特征第3页，共52页。携带者携带者癌症患者癌症患者新增病例新增病例/年年 死亡率死亡率/年年全球全球3.5亿亿3000万万100万万200万万其中，携带者中亚太地区占其中，携带者中亚太地区占3/4，中国有，中国有1.3亿，占全球亿，占全球1/3，病死率居各类传染病首位。，病死率居各类传染病首位。第4页，共52页。第5页，共52页。急性清除（成人：90%）HBV慢性携带（婴幼儿：9

2、0%）25-40%无症状乙型肝炎肝硬化肝癌第6页，共52页。感染结果感染结果免疫应答状态免疫应答状态急性清除急性清除完全应答完全应答无症状携带无症状携带不应答不应答各种肝病各种肝病应答紊乱应答紊乱第7页，共52页。目前认为，目前认为，HBVHBV感染后造成的肝细胞损伤不是病毒复制感染后造成的肝细胞损伤不是病毒复制的结果，而是机体产生的特异性免疫应答的的结果。机体在的结果，而是机体产生的特异性免疫应答的的结果。机体在产生免疫应答清除病毒的同时，损伤了感染的肝细胞。其中，产生免疫应答清除病毒的同时，损伤了感染的肝细胞。其中，细胞免疫应答，尤其是细胞免疫应答，尤其是CTLCTL反应起了关键性的作用。

3、反应起了关键性的作用。第8页，共52页。不可怕，理由：血液途径传播婴幼儿（接种疫苗）成人（90%急性清除）WHO目标第9页，共52页。可怕，理由：3.5亿携带者3000万癌症患者治疗效果不理想第10页，共52页。*抗炎保肝治疗*抗肝纤维化治疗*免疫调节治疗*抗病毒治疗专家建议：以抗病毒为主的综合治疗第11页，共52页。治疗药物治疗药物 近十年，针对病毒性肝炎药物的研究，取得了近十年，针对病毒性肝炎药物的研究，取得了相当多的进展，国外已上市的用于抗乙、丙型肝炎相当多的进展，国外已上市的用于抗乙、丙型肝炎病毒的药物有十余种，进入临床试验的药物有二十病毒的药物有十余种，进入临床试验的药物有二十余种。

4、余种。v 干扰素仍为目前治疗乙、丙型肝炎的主要药物。干扰素仍为目前治疗乙、丙型肝炎的主要药物。v 核酸类似物的研究进展较快，可能不久的将来会突破。核酸类似物的研究进展较快，可能不久的将来会突破。v 抗病毒基因治疗、反义核酸、抗病毒基因治疗、反义核酸、DNA疫苗等也获得了疫苗等也获得了可喜的苗头。可喜的苗头。第12页，共52页。*药物设计的最高原则（高效低毒与特异性）*来自急性感染恢复期病人的启示*来自病毒生活周期的启示第13页，共52页。InfectiousHBV virionS M LGOLGIccc-DNAGenomic&subgenomicRNAs preS/S X precorepro

5、teinsCore proteinPprotein(+)strand DNA(-)strand DNAReceptor3.5 kb RNA pregenome(A)nSubviralparticlesER/ICAdapted from Nassal,M.(1996).Curr.Top.Microb.Immunol.214:297-337.嗜肝嗜肝DNA病毒生活周期病毒生活周期w 入侵入侵(识别识别,吸附吸附,穿膜）穿膜）w 脱壳脱壳w 转位转位(形成形成 cccDNA)w 逆转录逆转录w 病毒蛋白表达病毒蛋白表达w 装配装配w 颗粒释放颗粒释放(或再循环或再循环)第14页，共52页。第15页，

6、共52页。核苷酸结合槽核苷酸结合槽第16页，共52页。商品名商品名 贺普丁贺普丁药物名称药物名称 拉米夫定拉米夫定化学名化学名 （2R-顺式）顺式）-4-氨氨基基-1-（2-羟甲基羟甲基-1，3-氧硫氧硫杂环戊杂环戊-5-基）基）-1H-嘧啶嘧啶-2-酮酮 C8H11N3O3S 229.26品名和结构式品名和结构式第17页，共52页。拉米夫定拉米夫定负链单链DNAMDYDdCTPHBV-多聚酶（野生型）高亲合力Y=酪氨酸M=蛋氨酸D=天冬氨酸第18页，共52页。*核苷类似物“-2，3-双脱氧-3硫代胞嘧啶”*对HBV&HIV的抗病毒活性*能抑制依赖RNA的DNA多聚酶第19页，共52页。*最佳

7、推荐剂量为100mg/d*迅速吸收*肝脏代谢率低*从尿中以原型排泄*中重度肾功能不全患者需作剂量调整*无显著药物间相互作用第20页，共52页。研究周数改变的中位数01020304050SchiffDienstagLaiDienstagSchiffLaiSchalm拉米夫定-100-80-60-40-20010安慰剂第21页，共52页。核苷酸抑制减弱亲合力降低VDYDY=酪氨酸M=蛋氨酸D=天冬氨酸负链单链DNAHBV-多聚酶（突变型）拉米夫定第22页，共52页。YMDD 变异株(n=24)野生株(n=95)0102030405060708090013263952657891104117130

8、143156时间(周)变异株出现HBV DNA(pg/mL)第23页，共52页。HBV DNA聚合酶聚合酶 的氨基酸序列的氨基酸序列 FLLAQ YMDD 密码子密码子 528 L to M 552 M to V or I组变异 FLMAQ YVDD 组变异 Y I DD 组变异 FLMAQ Y I DD F=苯氨酸 Q=谷氨酸 D=天冬氨酸 L=亮氨酸Y=酪氨酸 V=颉氨酸 M=蛋氨酸 I=异亮氨酸 在YMDD基序中的氨基酸的改变第24页，共52页。57%野毒株野毒株 病人：病人：HBeAg阳性的慢性乙肝病人阳性的慢性乙肝病人 n=33514%YMDD变异株变异株10%混合型混合型19%HB

9、V DNA阳性（阳性（PCR）无变异无变异=76%拉米夫定治疗一年后变异的发生率第25页，共52页。*复制活性比野生株弱*使用拉米夫定的最初36周内，极少检测到YMDDv*YMDDv检测率:*1年后=24%(综合的资料)*2年后=42%*3年后=53%*4年后=67%第26页，共52页。双脱氧鸟嘌呤类核苷酸DXG的前体药物。v大白鼠体内实验证实大白鼠体内实验证实90%90%的的DAPD在腺苷酸脱氨酶的作用下在腺苷酸脱氨酶的作用下可迅速转化为可迅速转化为DXG，在血清中的半衰期为，在血清中的半衰期为2-8小时小时v 用该药治疗土拨鼠肝炎模型连续用该药治疗土拨鼠肝炎模型连续12周，同拉米夫定一样可

10、周，同拉米夫定一样可以降低血清中以降低血清中WHV DNA的水平。的水平。第27页，共52页。v2.2.15细胞实验显示细胞实验显示DAPD有抑制有抑制HBV的作用。的作用。v 体外研究发现，该药对拉米夫定和泛昔洛韦产生耐药的体外研究发现，该药对拉米夫定和泛昔洛韦产生耐药的HBV毒株有效，与抗病毒药物毒株有效，与抗病毒药物enviroxime(恩韦肟恩韦肟)有协同有协同抗抗HBV的作用。的作用。v 针对针对AIDS治疗的治疗的I/II期临床试验正在进行。治疗期临床试验正在进行。治疗HBV感染的感染的II期临床试验计划在期临床试验计划在2001年第二季度开始。年第二季度开始。第28页，共52页。

11、Entecavir (恩替卡韦）恩替卡韦）q 特异性抑制特异性抑制HBVq 0.1mgETV即可达到即可达到100mgLVD的作用的作用q 正在中国申请作正在中国申请作II期临床验证（全球多中心，中期临床验证（全球多中心，中国国7家单位）家单位）第29页，共52页。q用土拨鼠肝炎模型比较用土拨鼠肝炎模型比较ETVETV（0.1mg/Kg/d0.1mg/Kg/d）与）与LVDLVD（5mg/Kg/d5mg/Kg/d）的抗病毒效果，持续用药）的抗病毒效果，持续用药1212周，周，ETVETV在停在停药药2 2周后仍不能检测到血清中的病毒周后仍不能检测到血清中的病毒DNADNA，而，而LVDLVD出

12、现了出现了病毒病毒DNADNA反跳。反跳。q 20002000年年5 5月，在第十届欧洲临床微生物和感染疾病会议上报月，在第十届欧洲临床微生物和感染疾病会议上报道道entecavirentecavir与与adefoviradefovir合用有协同抗合用有协同抗HBVHBV作用。作用。q2000年年9月，在加拿大多伦多第四十届月，在加拿大多伦多第四十届ICAAC会议上，会议上，有关该药的安全性和抗病毒活性的研究有了报道，发现有关该药的安全性和抗病毒活性的研究有了报道，发现有良好的耐受性，没有与剂量相关的毒副反应。有良好的耐受性，没有与剂量相关的毒副反应。Entecavir (恩替卡韦）恩替卡韦）

13、第30页，共52页。q 小鼠在小鼠在10、50mg/Kg/d剂量下，连续用剂量下，连续用Clevudine30天，无天，无明显毒性反应；对人骨髓细胞及明显毒性反应；对人骨髓细胞及H1细胞线粒体无明显毒性。细胞线粒体无明显毒性。q在土拨鼠肝炎模型实验中，用在土拨鼠肝炎模型实验中，用Clevudine10mg/Kg/d,持续持续12周，血清周，血清WHV DNA下降下降1000倍，表面抗原下降倍，表面抗原下降100倍，倍，肝内肝内WHV DNA复制中间体下降复制中间体下降10倍，治疗结束后没有倍，治疗结束后没有病毒标志物反跳。病毒标志物反跳。q在鸭乙肝动物模型中也观察到相同效果。已经证实与抗病在鸭

14、乙肝动物模型中也观察到相同效果。已经证实与抗病毒药物毒药物enviroxime(恩韦肟恩韦肟)、3TC3TC、FTCFTC、DAPDDAPD、cidofovircidofovir有协同作用。有协同作用。q 2000年年9月月-11月，相关的月，相关的I/II期临床试验已陆续见诸报期临床试验已陆续见诸报道。道。Clevudine第31页，共52页。q Novirio制药公司正在研制的一系列有抗制药公司正在研制的一系列有抗HBV作用的作用的-L-2-脱氧核苷酸类药物。脱氧核苷酸类药物。q计划于计划于2001年年1-3季度进入临床试验。季度进入临床试验。q L-dA和和L-dT口服后能被吸收利用口服

15、后能被吸收利用,L-dT的口服生物利的口服生物利用度可达用度可达70%,而而L-dC要被双磷酰酯甘油修饰后才能被吸要被双磷酰酯甘油修饰后才能被吸收利用收利用,口服生物利用度较低。口服生物利用度较低。q 土拨鼠肝炎模型证实用土拨鼠肝炎模型证实用L-dT口服口服10mg/Kg/d的剂量，可使的剂量，可使病毒降低病毒降低3-9logs，而，而L-dC用相同剂量仅降低病毒用相同剂量仅降低病毒1-5logs，L-dT与与L-dC合用有协同作用。合用有协同作用。L-dT L-dC L-dA第32页，共52页。q Enzo Biochem和纽约和纽约艾伯特艾伯特爱因斯坦医学院合作开发的爱因斯坦医学院合作开发

16、的具有免疫调节及抗病毒作用的寡核苷酸药物。具有免疫调节及抗病毒作用的寡核苷酸药物。q于于20002000年年6 6月开始慢性乙型肝炎治疗的月开始慢性乙型肝炎治疗的IIII期临床试验。期临床试验。qI I期临床试验结果显示期临床试验结果显示1515例患者用例患者用EHT-899口服治疗口服治疗20周，周，均可以明显改善疾病症状、降低肝脏转氨酶、减少病毒均可以明显改善疾病症状、降低肝脏转氨酶、减少病毒含量。含量。q 动物实验显示动物实验显示EHT-899可以抑制小鼠肝癌的生长，提示该可以抑制小鼠肝癌的生长，提示该药有潜在的治疗药有潜在的治疗HBV相关性肝癌和其它癌症的作用。相关性肝癌和其它癌症的作

17、用。EHT-899第33页，共52页。q 由美国由美国Emory大学研究、大学研究、Triangle 制药公司获制药公司获得生产许可证的得生产许可证的 Emtricitabine(FTC),是与拉米是与拉米夫定结构相近的硫代嘧啶核苷类药物。夫定结构相近的硫代嘧啶核苷类药物。q 已于已于1998年着手进行抗年着手进行抗HIV的的II/III期临床试验，期临床试验，抗抗HBV也进入也进入I/II期临床试验阶段。期临床试验阶段。Emtricitabine(FTC)第34页，共52页。q 临床前研究表明，该药没有与剂量相关性的毒副作用，临床前研究表明，该药没有与剂量相关性的毒副作用，在在100mg/d

18、的剂量下，其抗病毒活性可以达到最大活性的的剂量下，其抗病毒活性可以达到最大活性的90%；增加剂量到；增加剂量到200mg/d，抗病毒活性仅增加，抗病毒活性仅增加5%。q 应用转基因小鼠模型及土拨鼠肝炎模型的动物实验证实，应用转基因小鼠模型及土拨鼠肝炎模型的动物实验证实，FTC可以显著抑制血液中嗜肝病毒可以显著抑制血液中嗜肝病毒DNA水平，停药水平，停药1周后，周后，同拉米夫定一样，仍有同拉米夫定一样，仍有DNA水平回升。水平回升。q 初步的临床试验报道，乙肝患者用初步的临床试验报道，乙肝患者用25mg/d、200mg/d剂剂量，持续量，持续56天，血清中天，血清中HBV含量分别可以下降含量分别

19、可以下降2.0log10和和4.3log10。但尚无与其它核酸类似物疗效比较的研究报道。但尚无与其它核酸类似物疗效比较的研究报道。Emtricitabine(FTC)第35页，共52页。第36页，共52页。1.IFN-11 Amgen Inc2.IFN-22 Hoffman-La Roche Inc3.IFN-33 Interferon Sciences Inc4.(聚乙二醇长效干扰素)Enzon Inc5.IFN-1b1b Genentech Inc国外已上市的用于抗乙、丙型肝炎病毒的药物国外已上市的用于抗乙、丙型肝炎病毒的药物第37页，共52页。干扰素干扰素同种细胞受体同种细胞受体干扰素激

20、活基因（干扰素激活基因（ISG）ISG-mRNA 抗病毒蛋白抗病毒蛋白2-5AS磷酸二脂酶磷酸二脂酶 蛋白激酶蛋白激酶 2-5A核酸酶激活核酸酶激活病毒病毒mRNA降解降解 tRNA 的的pCpCA末端末端 降解降解 病毒蛋白转译抑制病毒蛋白转译抑制病毒蛋白合成起始受阻病毒蛋白合成起始受阻抑制病毒复制抑制病毒复制IFN 在转录和转译水平抑制病毒复制在转录和转译水平抑制病毒复制蛋白合成的起始因子蛋白合成的起始因子 磷酸化磷酸化第38页，共52页。重组重合干扰素（CIFN）系由美国安进公司开发，商品名为：干复津。本品于1997年10月由美国食品药品管理局（FDA）批准治疗慢性丙型肝炎，于同年12月

21、由我国卫生部批准进口。IFNa可分成2025种亚型，其生物活性各异。通过对多种天然a亚型干扰素的蛋白质结构序列进扫描，每位点上出现的频率最高的氨基酸进行重组得到CIFN氨基酸序列的基本框架。CIFN第39页，共52页。q 加有40KDPEG（两个Lys位点）q 体内半衰期增加10倍，活性也相应延长q 用量：一周一次q 减少剂量依赖性副作用q 国外已用于HCV治疗q 正在中国启动治疗HBV III期临床验证第40页，共52页。q 德国德国Boehringer IngelheimBoehringer Ingelheim公司生产的公司生产的-IFN是潜在的对是潜在的对HBV、HCV感染有效的药物。感

22、染有效的药物。q 该药的抗该药的抗HCV的的I/II期临床试验已在欧洲完成，期临床试验已在欧洲完成，正在进行正在进行III期临床试验，主要是验证期临床试验，主要是验证-IFN在在6个不同剂量下，能否有降低病毒量及减轻个不同剂量下，能否有降低病毒量及减轻肝脏炎症反应，以及已经用肝脏炎症反应，以及已经用IFN-治疗并产治疗并产生耐药的丙肝患者，用生耐药的丙肝患者，用-IFN治疗是否有效。治疗是否有效。同时抗同时抗HBV的临床验证工作也在进行。的临床验证工作也在进行。-IFN第41页，共52页。第42页，共52页。q 由由Epimmune 公司研制的多肽疫苗公司研制的多肽疫苗q 能增强慢性乙型肝炎患

23、者能增强慢性乙型肝炎患者HBV特异性细胞毒性特异性细胞毒性T细细胞免疫功能。胞免疫功能。I期临床试验显示该疫苗有较好的期临床试验显示该疫苗有较好的剂量耐受性，正常健康志愿者注射后细胞毒性剂量耐受性，正常健康志愿者注射后细胞毒性T细胞的应答能力可以提高细胞的应答能力可以提高50-100倍。倍。q 目前正进行目前正进行II期临床试验，是有潜力的治疗乙型期临床试验，是有潜力的治疗乙型肝炎的药物。肝炎的药物。Theradigm-HBV第43页，共52页。q 目前正在美国进行治疗乙型肝炎和移植排斥反应的目前正在美国进行治疗乙型肝炎和移植排斥反应的II期临床试验。期临床试验。q 1998年年6月治疗慢性乙

24、型肝炎的月治疗慢性乙型肝炎的II期临床试验在期临床试验在欧洲进行，目的是评价该药的安全性、药代欧洲进行，目的是评价该药的安全性、药代动力学及用拉米夫定治疗后血清中动力学及用拉米夫定治疗后血清中HBV DNA水水平不能经杂交法检测到时，再加用平不能经杂交法检测到时，再加用tuvirumab 6种剂量连续超过种剂量连续超过2周的抗病毒效果。有关治疗肝移周的抗病毒效果。有关治疗肝移植的植的I/II期临床试验已完成，计划期临床试验已完成，计划II/III期临床试期临床试验在美国进行。验在美国进行。TuvirumabTuvirumab抗人抗人HBVHBV单克隆抗体单克隆抗体第44页，共52页。q XTL

25、生物制药有限公司开发的抗生物制药有限公司开发的抗HBV新药，新药，它是抗它是抗HBV表面抗原不同的两个区域的具有表面抗原不同的两个区域的具有高亲和力的单克隆抗体。高亲和力的单克隆抗体。q 与拉米夫定结合治疗的与拉米夫定结合治疗的II期临床试验于期临床试验于2001年开始。已有的资料显示年开始。已有的资料显示XTL-001能快速、持能快速、持久地降低久地降低HBV DNA和和HBsAg的水平并对病毒的水平并对病毒有中和作用。两段区域抗体的使用估计可以有中和作用。两段区域抗体的使用估计可以减少病毒的逃逸突变，最终将会与其它抗病减少病毒的逃逸突变，最终将会与其它抗病毒药物联合应用。毒药物联合应用。X

26、TL-001第45页，共52页。q Sizofiran（西佐糖）（西佐糖）是从一种食用菌（裂褶菌）是从一种食用菌（裂褶菌）培养上清中提取出的具有免疫增强作用的调节培养上清中提取出的具有免疫增强作用的调节剂。剂。q 在日本正在进行治疗乙型肝炎的在日本正在进行治疗乙型肝炎的III期临床试验，期临床试验，该药对胃癌、肺癌以及慢性疲劳综合征也有治该药对胃癌、肺癌以及慢性疲劳综合征也有治疗作用，相关的临床试验也正在进行。疗作用，相关的临床试验也正在进行。Sizofiran第46页，共52页。q GLYCODesign公司生产的公司生产的GD-0039是一种糖类是一种糖类化学保护剂，它是化学保护剂，它是甘

27、露糖苷酶甘露糖苷酶II的抑制剂，有抗菌、的抑制剂，有抗菌、抗病毒的作用。抗病毒的作用。q 可用来治疗多种肿瘤及细菌感染。对病毒感染的疾可用来治疗多种肿瘤及细菌感染。对病毒感染的疾病也有潜在的治疗价值。病也有潜在的治疗价值。q 该药治疗肾癌的该药治疗肾癌的II期临床试验正在进行。期临床试验正在进行。q 有关抗有关抗HCV的研究正在临床前研究阶段。治疗的研究正在临床前研究阶段。治疗丙型肝炎的丙型肝炎的II期临床试验方案计划于期临床试验方案计划于1998年末年末到到1999年初提出申请。年初提出申请。GD-0039第47页，共52页。q 食用疫苗食用疫苗Prodigen也将进入临床试验阶段。也将进入

28、临床试验阶段。q Prodigen是从转基因植物中得到的，它可以是从转基因植物中得到的，它可以刺激胃肠粘膜的免疫力，可用于治疗肝炎、刺激胃肠粘膜的免疫力，可用于治疗肝炎、病毒性胃肠炎以及病毒性胃肠炎以及AIDS。其中，。其中，AIDS的的临床试验计划于临床试验计划于2000年年11月进行。月进行。Prodigen第48页，共52页。q 它可以对它可以对HCV RNA进行剪切，而所剪切的位点又是病毒进行剪切，而所剪切的位点又是病毒复制周期中所必需的。复制周期中所必需的。Heptazyme被认为对所有已知的被认为对所有已知的HCV RNA变异株都有剪切作用。变异株都有剪切作用。q 体外细胞实验证实

29、该药可以有效地进入细胞作用于体外细胞实验证实该药可以有效地进入细胞作用于HCV RNA从而抑制病毒从而抑制病毒RNA的复制。的复制。q 至至2000年年5月，月，II期临床试验仍在进行。期临床试验仍在进行。2000年年9月初步的临月初步的临床试验结果有了报道，床试验结果有了报道，20例病人皮下注射例病人皮下注射0.3-90mg，每日，每日1次，连续次，连续28天，有很好的生物利用度和耐受性。天，有很好的生物利用度和耐受性。Heptazyme第49页，共52页。以结果来看，病毒感染分为:致死性（天花，病毒变异，动物来源，少数）一过性（流感，甲肝)持续性（乙肝，疱疹）平衡对抗（常态）（激发态）第50页，共52页。数量繁多，宿主广泛基因载体基因革新的主要源泉物种进化中地位重要第51页，共52页。存在问题免疫调节治疗（双刃剑）抗病毒治疗（前期用药/病毒变异）解决方案和平相处以毒攻毒天花假病毒第52页，共52页。