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1、课件002兽医微生物学教学课件1兽医微生物学兽医微生物学兽医微生物学(多媒体教学课件多媒体教学课件)天津农学院动科系动物预防医学教研室制作天津农学院动科系动物预防医学教研室制作课件002兽医微生物学教学课件3绪言绪言 共六部分，介绍微生物与微生物学的概念，微生物学发展简史，微共六部分，介绍微生物与微生物学的概念，微生物学发展简史，微生物学理论与技术成就及应用，兽医微生物学的地位、任务与贡献。生物学理论与技术成就及应用，兽医微生物学的地位、任务与贡献。细菌总论细菌总论 共七章，介绍细菌的形态、构造、生理，消毒与灭菌，细菌生共七章，介绍细菌的形态、构造、生理，消毒与灭菌，细菌生态、致病机理、遗传变

2、异，细菌分类与命名等。态、致病机理、遗传变异，细菌分类与命名等。免疫基础免疫基础 共七章，介绍抗原抗体，免疫系统，抗感染免疫，变态反应，共七章，介绍抗原抗体，免疫系统，抗感染免疫，变态反应，免疫调节，免疫技术及应用等。免疫调节，免疫技术及应用等。细菌各论细菌各论 共十二章，介绍各属重要病原细菌的形态、生化特性、致病性、共十二章，介绍各属重要病原细菌的形态、生化特性、致病性、微生物学诊断和免疫防治等。微生物学诊断和免疫防治等。真菌真菌 共二章，介绍真菌的分类、形态、生化及致病特性，真菌病的诊断共二章，介绍真菌的分类、形态、生化及致病特性，真菌病的诊断与防治等。与防治等。病毒病毒 共十四章，介绍病

3、毒的形态、构造、繁殖、遗传、培养，病毒的致共十四章，介绍病毒的形态、构造、繁殖、遗传、培养，病毒的致病性。各科属重要病毒形态、生化及致病特性，微生物学诊断和防治等。病性。各科属重要病毒形态、生化及致病特性，微生物学诊断和防治等。实验实验 共十多个，显微镜油镜的使用，细菌形态及构造观察，细菌抹片制共十多个，显微镜油镜的使用，细菌形态及构造观察，细菌抹片制备及染色，培养基的制备，细菌的分离培养、生长表现观察、生化试验、备及染色，培养基的制备，细菌的分离培养、生长表现观察、生化试验、药敏试验，沉淀反应和凝集反应，重要病原菌的认识，真菌与病毒培养测药敏试验，沉淀反应和凝集反应，重要病原菌的认识，真菌与

4、病毒培养测定等定等。内容简介内容简介课件002兽医微生物学教学课件4第八章第八章 抗原与抗体抗原与抗体第九章第九章 免疫系统与免疫应答免疫系统与免疫应答第十章第十章 抗感染免疫抗感染免疫第十一章第十一章 变态反应变态反应第十二章第十二章 免疫调节与免疫遗传免疫调节与免疫遗传第十三章第十三章 免疫血清学技术免疫血清学技术第十四章第十四章 免疫学的应用免疫学的应用第二篇第二篇免疫学基础免疫学基础课件002兽医微生物学教学课件5第十二章第十二章 免疫调节与免疫遗传（自学）免疫调节与免疫遗传（自学）第十三章第十三章 免疫血清学技术免疫血清学技术第一节第一节 概念概念第二节第二节 凝聚性反应凝聚性反应第

5、三节第三节 标记抗体技术标记抗体技术第四节第四节 补体参与的试验补体参与的试验第五节第五节 中和试验中和试验第二篇第二篇课件002兽医微生物学教学课件6 抗原与相应抗体在体内和体外均能发生特异性抗原与相应抗体在体内和体外均能发生特异性结合，因抗体主要来自血清，因此在体外进行的抗结合，因抗体主要来自血清，因此在体外进行的抗原抗体反应称为原抗体反应称为血清学反应血清学反应或或免疫血清学技术免疫血清学技术。第一节第一节 概概 述述 免疫血清学技术按抗原抗体反应性质不同可分为：免疫血清学技术按抗原抗体反应性质不同可分为：1.凝聚性反应凝聚性反应 包括凝集试验和沉淀试验。包括凝集试验和沉淀试验。2.标记

6、抗体技术标记抗体技术 包括荧光抗体、酶标抗体、放射包括荧光抗体、酶标抗体、放射性标记抗体、发光标记抗体技术等。性标记抗体、发光标记抗体技术等。3.补体参与的反应补体参与的反应 补体结合试验、免疫黏附试验补体结合试验、免疫黏附试验等。等。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件74.中和反应中和反应 病毒中和试验、毒素中和试验。病毒中和试验、毒素中和试验。一、血清学反应的一般特点一、血清学反应的一般特点1.特异性与交叉性特异性与交叉性 血清学反应具有高度特异性，如血清学反应具有高度特异性，如抗猪瘟病毒的抗体只能与猪瘟病毒结合，而不能与抗猪瘟病毒的抗体只能与猪瘟病毒结合，而不能与口蹄疫病毒结合。

7、这是血清学试验用于分析各种抗口蹄疫病毒结合。这是血清学试验用于分析各种抗原和进行疾病诊断的基础。原和进行疾病诊断的基础。但若两种天然抗原之间含有但若两种天然抗原之间含有部分共同抗原部分共同抗原时，则时，则发生发生交叉反应交叉反应。交叉反应是区分血清型和亚型的重。交叉反应是区分血清型和亚型的重要依据。要依据。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件82.抗原抗体结合机理抗原抗体结合机理 抗原和抗体的结合为抗原和抗体的结合为弱能非弱能非共价键结合共价键结合，其结合力决定于抗原决定簇和抗体的，其结合力决定于抗原决定簇和抗体的抗原结合点之间形成的非共价键的数量、性质和距抗原结合点之间形成的非共价键的

8、数量、性质和距离。离。常规的血清学反应，如凝集反应、沉淀反应、补常规的血清学反应，如凝集反应、沉淀反应、补体结合反应等，只有在抗原与抗体呈体结合反应等，只有在抗原与抗体呈适当比例适当比例时，时，结合反应才出现凝集，沉淀等结合反应才出现凝集，沉淀等可见反应可见反应，在最适比，在最适比例时，反应最明显。例时，反应最明显。这种因抗原过多或抗体过多而出现抑制可见反这种因抗原过多或抗体过多而出现抑制可见反应的现象，称为应的现象，称为带现象（图带现象（图13-1-166）。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件9二、血清学反应的影响因素二、血清学反应的影响因素1.电解质电解质 特异性的抗原和抗体具有对

9、应的极性基特异性的抗原和抗体具有对应的极性基(羧羧基、氨基等基、氨基等)，它们互相吸附后，其电荷和极性被中，它们互相吸附后，其电荷和极性被中和因而失去亲水性，变为憎水系统。和因而失去亲水性，变为憎水系统。易易受电解质作用失去电荷受电解质作用失去电荷而互相凝聚、发生凝集或而互相凝聚、发生凝集或沉淀反应。沉淀反应。2.温度温度 较高的温度可以增加抗原和抗体接触的机会，较高的温度可以增加抗原和抗体接触的机会，从而加速反应的出现。常用从而加速反应的出现。常用37水浴保温。水浴保温。3.酸碱度酸碱度 血清学反应常用血清学反应常用pH为为6-8，过高或过低的，过高或过低的pH可使抗原抗体复合物重新离解。可

10、使抗原抗体复合物重新离解。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件10第二节第二节 凝聚性试验凝聚性试验 抗原与相应抗体结合形成复合物，在有电解质存抗原与相应抗体结合形成复合物，在有电解质存在下，复合物相互凝聚形成肉眼可见的凝聚小块或在下，复合物相互凝聚形成肉眼可见的凝聚小块或沉淀物，根据此现象来测定相应抗体或抗原，称为沉淀物，根据此现象来测定相应抗体或抗原，称为凝聚性试验。分为凝聚性试验。分为凝集试验和沉淀试验凝集试验和沉淀试验。一、凝集试验一、凝集试验 细菌、红细胞等颗粒性抗原，与相应抗体结合，细菌、红细胞等颗粒性抗原，与相应抗体结合，在有适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集团块，在有适

11、当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集团块，称为称为凝集试验凝集试验。参与的抗体主要为。参与的抗体主要为IgG、IgM。凝。凝集试验可用于检测抗原或抗体，优点是操作简便。集试验可用于检测抗原或抗体，优点是操作简便。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件11 根据抗原的性质分为根据抗原的性质分为直接凝集试验直接凝集试验和和间接凝集试验间接凝集试验。1.直接凝集试验直接凝集试验 颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现凝集现象的试验称作直接凝集试验。按操作方法可分凝集现象的试验称作直接凝集试验。按操作方法可分玻片法玻片法和和试管法试管法两种。两种。（1）玻片法）玻片法 为一

12、种为一种定性试验定性试验。将含有已知抗体的诊。将含有已知抗体的诊断血清与待检抗原悬液在玻片上混合，数分钟后，如断血清与待检抗原悬液在玻片上混合，数分钟后，如出现颗粒状或絮状凝集，即为阳性反应。出现颗粒状或絮状凝集，即为阳性反应。此法简便快速，适用于新分细菌的鉴定或分型。如此法简便快速，适用于新分细菌的鉴定或分型。如沙门氏菌的鉴定。也可用已知的诊断抗原，检测待检沙门氏菌的鉴定。也可用已知的诊断抗原，检测待检血清中的相应抗体，如布氏杆菌、鸡白痢全血平板凝血清中的相应抗体，如布氏杆菌、鸡白痢全血平板凝集试验。集试验。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件12（2）试管法）试管法 为一种为一种定量

13、试验定量试验，用以检测血清抗体，用以检测血清抗体含量。含量。将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后加入等将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后加入等量抗原，置量抗原，置37水浴数小时观察。视不同凝集程度水浴数小时观察。视不同凝集程度记录为记录为+(100凝集凝集)、+(75凝集凝集)、+(50凝集凝集)、+(25凝集凝集)和和-(不凝集不凝集)。以其。以其+以上的以上的血清最大稀释度为该血清的凝集价血清最大稀释度为该血清的凝集价(或称滴度或称滴度)。试验时必须设置试验时必须设置阳性血清、阴性血清和生理盐水阳性血清、阴性血清和生理盐水等对照。等对照。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件132.

14、间接凝集试验间接凝集试验 将可溶性抗原将可溶性抗原(或抗体或抗体)吸附不溶性吸附不溶性颗粒载体的表面，与相应抗体颗粒载体的表面，与相应抗体(或抗原或抗原)作用，在电解作用，在电解质存在条件下，出现的特异性的凝集反应称为质存在条件下，出现的特异性的凝集反应称为间接间接凝集反应凝集反应。优点优点 敏感性高，比直接凝集反应敏感敏感性高，比直接凝集反应敏感2-8倍。倍。常用载体常用载体 红细胞红细胞(绵羊红细胞绵羊红细胞)、胶乳颗粒等。当、胶乳颗粒等。当载体吸附了可溶性抗原后即称为载体吸附了可溶性抗原后即称为致敏颗粒致敏颗粒。间接血凝试验间接血凝试验 是将是将可溶性抗原可溶性抗原致敏于红细胞表面，致敏

15、于红细胞表面，用以检测相应抗体。用以检测相应抗体。反向间接血凝试验反向间接血凝试验 如将如将抗体抗体致敏于红细胞表面，致敏于红细胞表面，用以检测检样中相应抗原用以检测检样中相应抗原。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件143.乳胶凝集试验乳胶凝集试验(LAT)用它胶乳微球（直径约用它胶乳微球（直径约0.8um）作载体吸附某些抗原）作载体吸附某些抗原(或抗体或抗体)，可用以检，可用以检测相应的抗体测相应的抗体(或抗原或抗原)。优点优点 快速简便、易保存、较准确等。快速简便、易保存、较准确等。4.协同凝集试验协同凝集试验(COAG)葡萄球菌葡萄球菌A蛋白蛋白(SPA)能能与多种动物与多种动物

16、IgG分子的分子的Fc片结合，结合后保持其片结合，结合后保持其抗体活性，当与相应的抗原结合时，就可产生凝抗体活性，当与相应的抗原结合时，就可产生凝集反应。本法广泛应用于多种细菌和某些病毒的集反应。本法广泛应用于多种细菌和某些病毒的快速诊断。快速诊断。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件15二、沉淀试验二、沉淀试验 可溶性抗原与相应抗体结合，在电解质存在下，形可溶性抗原与相应抗体结合，在电解质存在下，形成肉眼可见的白色沉淀，称为成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验沉淀试验。参与沉淀试验的抗原称参与沉淀试验的抗原称沉淀原沉淀原，抗体称为，抗体称为沉淀素。沉淀素。抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等，

17、抗原分子较小，如细菌的抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等，抗原分子较小，如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、组外毒素、内毒素、菌体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出液等。织浸出液等。1.环状沉淀试验环状沉淀试验 在小口径试管内在小口径试管内先加入已知抗血清先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入然后小心沿管壁加入待检抗原待检抗原于血清表面，使之成为于血清表面，使之成为分界清晰的两层。数分钟后，两层液面交界处出现白分界清晰的两层。数分钟后，两层液面交界处出现白色环状沉淀，即为阳性反应。色环状沉淀，即为阳性反应。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件16用途用途 用于抗原

18、的定性试验，如诊断炭疽的用于抗原的定性试验，如诊断炭疽的Ascoli试试验、链球菌血清型鉴定、沉淀素的效价滴定等。试验、链球菌血清型鉴定、沉淀素的效价滴定等。试验时出现白色沉淀带的最高血清稀释倍数，即为血验时出现白色沉淀带的最高血清稀释倍数，即为血清的沉淀价。清的沉淀价。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件172.琼脂（免疫）扩散试验琼脂（免疫）扩散试验 琼脂凝胶呈多孔结构，孔琼脂凝胶呈多孔结构，孔内充满水分，内充满水分，1琼脂凝胶的孔径约为琼脂凝胶的孔径约为85nm，各种，各种抗原抗体在琼脂凝胶中自由扩散。抗原抗体在琼脂抗原抗体在琼脂凝胶中自由扩散。抗原抗体在琼脂凝胶中扩散，当二者在比

19、例适当处相遇，即发生沉凝胶中扩散，当二者在比例适当处相遇，即发生沉淀反应，形成肉眼可见的淀反应，形成肉眼可见的沉淀带沉淀带，称为琼脂免疫扩，称为琼脂免疫扩散，又简称散，又简称琼脂扩散琼脂扩散和和免疫扩散免疫扩散。双向双扩散最常。双向双扩散最常用。用。双向双扩散双向双扩散 双向双扩散试验，简称双扩散。即用双向双扩散试验，简称双扩散。即用1琼脂浇成厚琼脂浇成厚2-3mm的凝胶板，在其上打圆孔，于的凝胶板，在其上打圆孔，于相邻孔内滴加抗原和抗体，在饱和湿度下，扩散相邻孔内滴加抗原和抗体，在饱和湿度下，扩散24h或数日，观察沉淀带。或数日，观察沉淀带。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件18第第

20、13章章 抗原抗体在琼脂凝胶内相向扩散，在两孔之间比抗原抗体在琼脂凝胶内相向扩散，在两孔之间比例最合适的位置上出现例最合适的位置上出现沉淀带沉淀带。双向扩散主要双向扩散主要用于抗原和抗体的测定。用于抗原和抗体的测定。用用8%Nacl溶液制溶液制1%琼脂糖平板，打孔（琼脂糖平板，打孔（7孔梅花形、孔孔梅花形、孔径径6 mm周边与中心孔距周边与中心孔距3 mm）。）。课件002兽医微生物学教学课件191.双扩散用于疾病诊断：双扩散用于疾病诊断：以以IBD诊断为例，中心孔诊断为例，中心孔加加IBD标准阳性血清，周标准阳性血清，周围孔分别加围孔分别加IBD标准抗原、标准抗原、生理盐水、待检抗原生理盐水

21、、待检抗原1.2.3.4。2.双扩散用于抗体检测：双扩散用于抗体检测：以免疫鸡以免疫鸡IBD抗体检测为抗体检测为例，中心孔加例，中心孔加IBD标准抗标准抗原，周围孔分别加原，周围孔分别加IBD标标准阳性血清准阳性血清.、IBD阴性血阴性血清、待检血清清、待检血清1.2.3.4。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件20第第13章章3.对流免疫电泳对流免疫电泳 原理原理 抗原抗原在碱性溶液在碱性溶液(pH82)中中带负电荷带负电荷，在电场中在电场中向正极移动向正极移动，而抗体球蛋白带电荷弱，而抗体球蛋白带电荷弱，在琼脂电泳时，由于电渗作用，向相反的负极泳在琼脂电泳时，由于电渗作用，向相反的负

22、极泳动。将抗体置正极端，抗原置负极端，电泳时抗动。将抗体置正极端，抗原置负极端，电泳时抗原抗体相向泳动，在两孔之间形成沉淀带。原抗体相向泳动，在两孔之间形成沉淀带。琼脂凝胶制备琼脂凝胶制备 选用优质琼脂（或琼脂糖），浓选用优质琼脂（或琼脂糖），浓度为度为1-2，pH通常用通常用pH8.2-8.6的巴比妥缓冲的巴比妥缓冲液，离子强度为液，离子强度为0.025-0.075molL，并加，并加0.01硫柳汞作防腐剂。硫柳汞作防腐剂。课件002兽医微生物学教学课件21第第13章章极极-+极极AbAgAbAbAgAg 试验操作试验操作 制备琼脂凝胶玻板、打孔，挑去孔内琼脂制备琼脂凝胶玻板、打孔，挑去孔内

23、琼脂后，将后，将抗原置负极一侧孔内抗原置负极一侧孔内，抗血清置正极侧孔抗血清置正极侧孔。加。加样后电泳样后电泳30-90min观察结果。观察结果。课件002兽医微生物学教学课件22第第13章章 试验操作试验操作 制备琼脂凝胶玻板、打孔，挑去孔内琼制备琼脂凝胶玻板、打孔，挑去孔内琼脂后，将脂后，将抗原置负极一侧孔内抗原置负极一侧孔内，抗血清置正极侧孔抗血清置正极侧孔。加样后电泳加样后电泳30-90min观察结果。观察结果。本法优点本法优点 a.敏感敏感 较双扩散敏感较双扩散敏感10-16倍；倍；b.快速快速 仅需仅需1h左右，大大缩短了沉淀带出现的时间。左右，大大缩短了沉淀带出现的时间。c.用途

24、用途 适用快速诊断检测。如乙型肝炎抗原的快速适用快速诊断检测。如乙型肝炎抗原的快速检测，猪传染性水泡病和口蹄疫等的快速确诊，检测，猪传染性水泡病和口蹄疫等的快速确诊，IBD、MD的快速检测等。的快速检测等。课件002兽医微生物学教学课件23第第13章章 第三第三节节 标记标记抗体技抗体技术术 抗体、抗原分子小，在含量低时形成的抗原抗体复抗体、抗原分子小，在含量低时形成的抗原抗体复合物是不可见的。有一些物质即使在超微量时也能通合物是不可见的。有一些物质即使在超微量时也能通过特殊的方法将其检查出来，如果将这些物质标记在过特殊的方法将其检查出来，如果将这些物质标记在抗体分子上，可以通过检测标记分子来

25、显示抗原抗体抗体分子上，可以通过检测标记分子来显示抗原抗体复合物的存在，此种根据复合物的存在，此种根据抗原抗体结合的特异性抗原抗体结合的特异性和和标标记分子的敏感性记分子的敏感性建立的技术，称为标记抗体技建立的技术，称为标记抗体技术术。高敏感性的标记分子主要有高敏感性的标记分子主要有荧光素、酶分子、放射荧光素、酶分子、放射性同位素性同位素三种，由此建立三种，由此建立荧光抗体技术、酶标抗体技荧光抗体技术、酶标抗体技术术和和同位素标记抗体技术同位素标记抗体技术。课件002兽医微生物学教学课件24 其特异性和敏感性远远超过常规血清学方法，被其特异性和敏感性远远超过常规血清学方法，被广泛应用于病原微生

26、物鉴定、传染病的诊断、分子广泛应用于病原微生物鉴定、传染病的诊断、分子生物学中的基因表达产物分析等。生物学中的基因表达产物分析等。第四节第四节 补体结合试验补体结合试验 补体结合试验是应用可溶性抗原，与相抗体结合补体结合试验是应用可溶性抗原，与相抗体结合后，其抗原抗体复合物可以结合补体，但这一反应后，其抗原抗体复合物可以结合补体，但这一反应肉眼不能察觉，如再加入致敏红细胞肉眼不能察觉，如再加入致敏红细胞(溶血系溶血系)，可根，可根据是否出现溶血反应判定反应系统中是否存在相应据是否出现溶血反应判定反应系统中是否存在相应的抗原和抗体。参与补体结合反应的抗体称为的抗原和抗体。参与补体结合反应的抗体称

27、为补体补体结抗体结抗体。补体结合抗体主要为。补体结合抗体主要为IgG和和IgM。通常是利。通常是利用已知抗原检测未知抗体。用已知抗原检测未知抗体。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件25第五节第五节 中和试验中和试验 根据根据抗体能否中和病毒的感染性抗体能否中和病毒的感染性而建立的免疫学试而建立的免疫学试验称为中和试验。中和试验极为特异和敏感，验称为中和试验。中和试验极为特异和敏感，主要用主要用于病毒感染的血清学诊断于病毒感染的血清学诊断、病毒分离株的鉴定、不同、病毒分离株的鉴定、不同病毒株的抗原关系研究、疫苗免疫原性的评价、免疫病毒株的抗原关系研究、疫苗免疫原性的评价、免疫血清的质量评

28、价和测定动物血清抗体的检测等。血清的质量评价和测定动物血清抗体的检测等。中和试验的基本过程中和试验的基本过程 先将先将抗血清与病毒混合抗血清与病毒混合，经，经适当时间适当时间作用作用。然后。然后接种于宿主系统接种于宿主系统以检测混合液中以检测混合液中的病毒的病毒感染力感染力。宿主系统可以是鸡胚、动物或细胞培。宿主系统可以是鸡胚、动物或细胞培养等，目前大多采用细胞中和试验。养等，目前大多采用细胞中和试验。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件26 根据其产生的保护效果的差异，可判断该病毒是否根据其产生的保护效果的差异，可判断该病毒是否已被中和，并根据一定方法计算中和的程度已被中和，并根据一定

29、方法计算中和的程度(中和指中和指数数)，即代表中和抗体的效价。，即代表中和抗体的效价。种类种类 根据测定中方法的不同，中和试验主要有两种。根据测定中方法的不同，中和试验主要有两种。一是测定能使动物或细胞死亡数目减少至一是测定能使动物或细胞死亡数目减少至50(半数保半数保护率，护率，PD50)血清稀释度，即终点法中和试验。二是血清稀释度，即终点法中和试验。二是测定使病毒在细胞上形成的空斑数目减少至测定使病毒在细胞上形成的空斑数目减少至50时血时血清稀释度，即空斑减少法中和试验。清稀释度，即空斑减少法中和试验。毒素和抗毒素毒素和抗毒素亦可进行中和试验，其方法与病毒中亦可进行中和试验，其方法与病毒中和试验基本相同。和试验基本相同。第第13章章课件002兽医微生物学教学课件27感谢观看此片感谢观看此片欢迎指导欢迎指导