免疫浊度技术概述课件.ppt

1、实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS免疫反应进展1897年 Kraus 就发现细菌培养液（毒素）与相应 抗血清混合出现沉淀1905年 Bechhold 把抗体放在明胶中，将抗原加于 其中，发现沉淀反应可在凝胶中进行1946年 Oudin 报告了试管免疫扩散技术1965年 Mancini 提出单向免疫扩散技术，使定性 免疫试验向定量化发展1966年 免疫浊度法的出现，使沉淀反应达到快速、微 量、自动化的新阶段。实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS免疫测定原理免疫测定原理利用抗原抗体反应检测标本中微量物

2、质利用抗原抗体反应检测标本中微量物质 抗原抗原+抗体抗体 抗原抗体复合物抗原抗体复合物 Ag +Ag +AbAb Ag Ag*AbAb实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS免疫测定特点免疫测定特点特异性特异性 抗原性不同的物质不干扰敏感性敏感性 g-ng-pg可测物可测物 蛋白质，酶，激素，药物，毒品实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS免疫检测的基础免疫检测的基础抗原抗体间的特异性反应抗原抗体间的特异性反应 手工操作手工操作 自动化分析自动化分析免疫比浊分析技术发展免疫比浊分析技术发展实验免疫浊度技术

3、实验免疫浊度技术两两个个阶阶段段Edited by E.Dalla Dea ESTS免免疫疫比比浊浊法法分分类类当一束光当一束光线通过溶线通过溶液受到光液受到光散射和光散射和光吸收两个吸收两个因素的影因素的影响而使光响而使光的强度减的强度减弱弱实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS透射比浊/散射比浊光源滤光片反应杯透射光检测散射光检测实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS一、散射免疫比浊分析原理一、散射免疫比浊分析原理散射比浊法：散射比浊法：在液相中可溶性抗原、抗体特异性结合，形成一定大小的复合物粒子，

4、当入射光沿水平轴照射在粒子颗粒上时，光线被颗粒吸收或折射，发生偏转，其偏转的角度与发射光的波长和复合物颗粒大小和多少有关。散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测抗原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理 是将沉淀反应与散射比浊分析相结合，是将沉淀反应与散射比浊分析相结合，“在抗原抗体反在抗原抗体反 应几秒钟后开始测定

5、峰值信号应几秒钟后开始测定峰值信号”。目的是排除抗原抗体反应的目的是排除抗原抗体反应的不稳定性，降低检测误差不稳定性，降低检测误差。时间时间检测分两个检测分两个在在预反应时段，预反应时段，加小量样本加小量样本与与抗原抗体抗原抗体反应反应，测定第一次散测定第一次散射光信号值射光信号值加加全量样本，全量样本，约反应约反应 2 2分分钟后，第二钟后，第二次测定散射次测定散射光信号光信号信号峰值信号峰值计算机处理计算机处理转换为样转换为样品浓度品浓度实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS（二）（二）抗原过量检测抗原过量检测抗体过量抗体过量 在检测中抗体结合

6、抗原的能力可达到相当于正常在检测中抗体结合抗原的能力可达到相当于正常 血清的血清的5050倍以上，以保证高浓度样本中的抗原与倍以上，以保证高浓度样本中的抗原与 抗体的结合。抗体的结合。对抗原过量进行阈值限定对抗原过量进行阈值限定 先测定预反应时段抗原先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。采用两项保证措施：采用两项保证措施：实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS

7、（一）（一）基本原理基本原理 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。是测定抗原抗体结合反应的动态过程。所谓速率，是在所谓速率，是在单位时间内单位时间内抗原抗体结合形成抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。的速率比浊分析。当仪器测定到某一时当仪器测定到某一时 间内形成速率下降时，间内形成速率下降时，即出现即出现速率峰速率峰，该峰，该峰 值的高低，即代表所值的高低，即代表所 测抗原的量。测抗原的量。实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited

8、by E.Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理 （二）（二）抗原过量检测抗原过量检测 设计原理设计原理 速率峰值一般在速率峰值一般在2525秒时出现。秒时出现。在反应介质中加入一定量的促凝剂，可加速抗在反应介质中加入一定量的促凝剂，可加速抗 原抗体复合物的形成，以减少反应时间。原抗体复合物的形成，以减少反应时间。速率法的优点：是快速率法的优点：是快 速、不需要减去样本速、不需要减去样本 和试剂本底读数，校和试剂本底读数，校 正结果也较稳定。正结果也较稳定。实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理当光源的

9、光路（角度与正前方夹角为当光源的光路（角度与正前方夹角为0 00 0时），通时），通 过一定体积的溶液，由于溶液中抗原抗体结合复过一定体积的溶液，由于溶液中抗原抗体结合复 合物粒子对入射光因反射、吸收或散射而衰减。合物粒子对入射光因反射、吸收或散射而衰减。透射光的强度和形成的复合物的量呈反比。透射光的强度和形成的复合物的量呈反比。检测器检测器检测器检测器光源光源 透镜透镜 滤光片滤光片平光线平光线散散射射光光透射光透射光 散射比浊、透射比浊光路图散射比浊、透射比浊光路图实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS（一）（一）基本原理基本原理v 是个极其简

10、单的方法。在抗原过量情况下是个极其简单的方法。在抗原过量情况下，与待测与待测样品中相应的样品中相应的IgIg发生抗原发生抗原-抗体反应，形成可溶性复合抗体反应，形成可溶性复合物，使反应介质的浊度发生改变。物，使反应介质的浊度发生改变。v 测量方法利用分光光度计测量被吸收的量。读数以测量方法利用分光光度计测量被吸收的量。读数以吸收单位（吸收单位（A A）或）或ODOD值表示，值表示，A A值反映了入射光和透射值反映了入射光和透射光的比率。待测物中光的比率。待测物中IgIg含量可通过标准曲线计算得出。含量可通过标准曲线计算得出。v 待测样品中的抗原含量与吸光度呈正比，而与透射待测样品中的抗原含量与

11、吸光度呈正比，而与透射光呈反比。光呈反比。v 反应在反应在PEGPEG的作用下，加速复合物的形成。的作用下，加速复合物的形成。实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS（二）（二）实验要求实验要求实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS 检检范范围围测测如免疫球蛋白如免疫球蛋白IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM、；补体补体C3C3、C4C4；血浆蛋白血浆蛋白AATAAT、TRFTRF、A1MA1M、CERCER；尿蛋白系列尿蛋白系列尿微量白蛋白尿微量白蛋白 视黄醇结合蛋白视黄醇结合蛋白 转铁蛋白转铁蛋白

12、 2 2 微球蛋白微球蛋白(2 2 M)M)1 1 微球蛋白微球蛋白(1 1 M)M)小分子治疗药物小分子治疗药物检检范范围围测测血浆、体液中特种蛋白血浆、体液中特种蛋白实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS乳胶2 种反应模式:+实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS反应过程图缓冲液缓冲液试剂试剂1搅拌器搅拌器样品样品混混匀匀胶乳胶乳试剂试剂2混混匀匀第一次读数第一次读数第二次读数第二次读数实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS吸光度/时间实验免疫浊度技术实

13、验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS检测模式图最终点最终点 D最终点最终点-样品空白样品空白 D-A最终点最终点 初始点初始点 D-B动力学动力学 (C-B)/时间时间试剂试剂2（胶乳或抗血清）（胶乳或抗血清）样品和试样品和试剂剂1（缓（缓冲液）冲液）时间D.O.OD 变化变化实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS钩状效应实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS钩状现象抗体过剩区 沉淀随抗原量的加入而增多 上清液中仍然有游离的抗体平衡区 产生最大量的沉淀 没有游离的抗原和抗体

14、抗原过剩区 由于抗原量过多，造成小的免疫复合 物出现,上清液中有游离的抗原实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTS各组份的作用缓冲体系缓冲体系:提供最适合反应条件,提高反应灵敏度。避免非特异性反应。缩短反应时间。主要反应物主要反应物:完成抗原抗体反应所需的成份。校准校准:建立测定吸光度和物质含量之间的计算关系。质控质控:验证校准。实验免疫浊度技术实验免疫浊度技术Edited by E.Dalla Dea ESTSEdited by E.Dalla Dea ESTSEdited by E.Dalla Dea ESTS IMMAGE Immunochem

15、istry SystemEdited by E.Dalla Dea ESTS IMMAGE IMMAGE 双光径速双光径速率浊度分析系统率浊度分析系统高效蛋白分析仪高效蛋白分析仪随机随机TDMTDM分析仪分析仪两种技术两种技术(透射法透射法+散射法散射法)，四种方法，四种方法速率散射比浊法速率散射比浊法(蛋白检测蛋白检测)速率抑制散射比浊法速率抑制散射比浊法(TDM)TDM)近红外颗粒速率法免疫分析近红外颗粒速率法免疫分析(Rate NIPIA)Rate NIPIA)速率抑制速率抑制NIPIA (NIPIA (低分子量低分子量TDM)TDM)Edited by E.Dalla Dea ESTS

16、IMMAGEIMMAGE检测原理检测原理-速率散射法速率散射法(670(670nmnm)ARRAYARRAY的优秀传统：的优秀传统：20 20年实践证明卓越的精确度和准确度年实践证明卓越的精确度和准确度激光光源激光光源Edited by E.Dalla Dea ESTS近红外颗粒透射免疫分析法：近红外颗粒透射免疫分析法：速率透射法速率透射法(940(940nm)nm)增加高敏分析检测菜单：地高辛，H-CRP，铁蛋白排除高胆红素和溶血性样本的非特异性干扰LED光源光源Edited by E.Dalla Dea ESTS12Conjugate-antibody complexing213Inhib

17、ition of complexing by hapten(drug)1.Conjugate(hapten on carrier)2.Antibody3.Hapten(drug)速率散射抑制法速率散射抑制法(670(670nm)nm)TDM TDM检测检测Edited by E.Dalla Dea ESTSOn board cooling system试剂冷藏系统试剂冷藏系统-增加试剂稳定性增加试剂稳定性四个缓冲液位四个缓冲液位-完成完成1400个测试个测试样品针试剂针分离样品针试剂针分离-同时完成取样和加试剂同时完成取样和加试剂 提高检测速度提高检测速度 全面的液面探测系统全面的液面探测系统

18、 Level Sensor Fluid SensorIMMAGEEdited by E.Dalla Dea ESTS3939个半永久性反应杯个半永久性反应杯-同时检测质控、定标和样本同时检测质控、定标和样本全面的条形码系统全面的条形码系统(各种通用条形码各种通用条形码)7272个样本位个样本位(每试剂位检测每试剂位检测2424种项目种项目)真正的随机急诊真正的随机急诊功能功能(不需停机不需停机)IMMAGEEdited by E.Dalla Dea ESTS-自动校正光源自动校正光源-原始试管功能原始试管功能-灵活的系统界面：触摸式，鼠标，键盘灵活的系统界面：触摸式，鼠标，键盘-24小时随时待

19、机小时随时待机-每日保养：擦拭探针每日保养：擦拭探针-特殊的试剂盖特殊的试剂盖:不再需要开关瓶不再需要开关瓶(穿刺式穿刺式)IMMAGE简便的操作系统简便的操作系统Edited by E.Dalla Dea ESTS单点定标单点定标IMMAGEEdited by E.Dalla Dea ESTS在速率峰基础上完成的定标曲线在速率峰基础上完成的定标曲线Concentration RateEdited by E.Dalla Dea ESTS单点定标单点定标IMMAGE减少定标次数减少定标次数 提高检测速度提高检测速度 节省试剂用量节省试剂用量NCCLSNCCLS证实：证实：单点定标的准确性常常优于

20、多点定标，单点定标的准确性常常优于多点定标，至少是结果相同的至少是结果相同的Edited by E.Dalla Dea ESTS18241824个月的试剂开瓶有效期个月的试剂开瓶有效期同一样本不需分装，在一次运行同一样本不需分装，在一次运行 中可以同时检测所有试剂项目中可以同时检测所有试剂项目IMMAGEEdited by E.Dalla Dea ESTS用户自定义系统用户自定义系统IMMAGE增加检测菜单增加检测菜单高达高达50个项目位个项目位一次可同时检测一次可同时检测 6 个项目个项目两种光学方法可以选择两种光学方法可以选择 670nmNIA 940nmNIPIA专用自定义软件专用自定义软件简便的定标程序简便的定标程序