免疫学检测与防治-医学免疫学课件.pptx
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- 免疫学 检测 防治 医学 课件
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1、免疫学检测技术免疫学预防,免疫学治疗第一部分 免疫学检测技术抗体效应细胞抗原抗体反应细胞功能检测一、抗原抗体反应Ag/AbAg/Ab反应的特反应的特点点Ag/AbAg/Ab反应的特点反应的特点 1.高度特异性2.反应可逆3.适宜的Ag/Ab比例与浓度4.分为两个阶段Ag/AbAg/Ab反应的影响因素反应的影响因素盐离子浓度/离子强度温度酸碱度检测抗原或抗体的体外试验1、凝聚反应直接凝聚反应本身为颗粒性抗原检测抗原或抗体的体外试验1.凝聚反应间接凝聚反应吸附到相应载体上凝聚抑制试验检测抗原或抗体的体外试验2、沉淀反应单向琼脂扩散(定量)检测抗原或抗体的体外试验2、沉淀反应双向琼脂扩散检测抗原或抗
2、体的体外试验3、免疫标记技术抗原或抗体标记示踪物免疫酶测定检测抗原或抗体的体外试验3、免疫标记技术示踪物免疫酶测定直接法,间接法,夹心法ELISABAS-ELISA利用生物素-亲和素放大系统检测抗原或抗体的体外试验3、免疫标记技术示踪物免疫酶测定BAS-ELISA检测抗原或抗体的体外试验3、免疫标记技术示踪物免疫酶测定免疫组化Fast red检测抗原或抗体的体外试验3、免疫标记技术示踪物免疫荧光检测抗原或抗体的体外试验3、免疫标记技术示踪物放射免疫 是用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫测定。是用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫测定。常用的放射性核素有常用的放射性核素有131131I I、1
3、25125I I等。等。检测抗原或抗体的体外试验3、免疫标记技术示踪物免疫发光化学发光酶促发光检测抗原或抗体的体外试验3、免疫标记技术示踪物免疫发光生物发光电化学发光检测抗原或抗体的体外试验3、免疫标记技术示踪物免疫胶体金检测抗原或抗体的体外试验3、免疫标记技术示踪物免疫胶体金金标HBsAg HBsAg 羊抗HBsAg多抗(抗体)检测抗原或抗体的体外试验3、免疫标记技术示踪物免疫印迹检测抗原或抗体的体外试验3、蛋白质芯片二、免疫细胞的功能检测PBMC分离Ficoll分离(葡聚糖-泛影葡胺)二、免疫细胞的功能检测磁珠分离通过抗体结合表面分子捕获细胞二、免疫细胞的功能检测流式细胞术通过抗体结合表面
4、分子标识细胞Green Fluorescence IntensityNumber of CellsUnstained cellsFITC-labeled cellsRed Fluorescence IntensityGreen Fluorescence IntensityTwo Parameter HistogramAgFluorochromeLabeled Anti-IgTissue SectionUnlabeledAbFlowTipLaserFLDetectorLightScatterDetectorcell二、免疫细胞的功能检测抗原肽-MHC分子四聚体技术分析CTL免疫细胞功能测定1、T
5、细胞功能测定体外法 :T细胞增殖试验 形态学检查 3H-TdR/125I-UdR掺入法 MTT比色法体内法:迟发型超敏反应(DTH)OT-PPD皮试(结核菌素实验)SD-SK皮试(链激酶-链道酶实验)形态学检查活化后细胞形态改变 PHA刺激4872小时3H-TdR掺入法培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性丝裂原刺激后DNA和RNA合成增加MTT比色法T细胞活化后线粒体中的琥珀酸脱氢酶将MTT还原为紫褐色的甲臜颗粒DTH皮试试验免疫细胞功能测定2、B细胞功能测定分泌抗体的检测抗体形成细胞测定,常用溶血红斑试验 免疫细胞功能测定2、B细胞功能测定抗体形成细胞ELISPOT测
6、定靶细胞51Cr洗涤去除游离的51Cr效应细胞测量上清液中释放的51Cr混合培养4-6小时免疫细胞功能测定3、细胞毒性试验细胞杀伤试验51Cr释放法免疫细胞功能测定3、细胞毒性试验细胞杀伤试验乳酸脱氢酶释放法刃天青试卤灵硫辛酰胺脱氢酶免疫细胞功能测定3、细胞毒性试验细胞杀伤试验细胞染色法免疫细胞功能测定3、细胞毒性试验细胞杀伤试验凋亡细胞检测法 凋亡是一种重要的生理和病理过程,凋亡细胞形态学特征表现为体积变小,细胞变园,与周围细胞脱落、失去微绒毛,胞质浓缩,内质网扩张,核仁消失,核染色质浓缩程半月形或斑块状,出现核着边现象,出现凋亡小体免疫细胞功能测定3、细胞毒性试验细胞杀伤试验凋亡细胞检测法
7、 梯度凝胶电泳 细胞凋亡时主要的生化特征是细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩其染色质发生浓缩,染色质染色质DNA在在核小体单位之间的连接处断裂核小体单位之间的连接处断裂,形形成成50300kb长的长的DNA大片段大片段,或或180200bp整数倍的寡核苷酸片段整数倍的寡核苷酸片段,在凝胶电泳上表现为梯形电泳图在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱谱(DNA ladder)。免疫细胞功能测定3、细胞毒性试验细胞杀伤试验凋亡细胞检测法 FACS亚二倍体细胞检测免疫细胞功能测定3、细胞毒性试验细胞杀伤试验凋亡细胞检测法 TUNEL法 细胞凋亡中,染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3-OH
8、末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3-末端,从而可进行凋亡细胞的检测 免疫细胞功能测定3、吞噬功能测定氯化硝基四氮唑蓝(NBT)试验:中性粒细胞的杀伤效应 NBT甲臜颗粒巨噬细胞吞噬试验:巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能,常用鸡红细胞(CRBC)或荧光颗粒进行吞噬检测免疫细胞功能测定4、细胞因子检测生物活性检测:增殖或增殖抑制;细胞病变抑制法 免疫学检测:ELISA检测,胞内细胞因子流式细胞术检测,ELISPOT检测第二部分 免疫学防治 根据免疫学原理,利用物理、化学和生物学的手段人
9、为地增强或抑制机体的免疫功能,达到预防和治疗疾病目的的措施。How to get immunity to the diseases?How to get immunity to the diseases?自然免疫自然免疫主动主动被动被动人工免疫人工免疫主动主动被动被动获得免疫的途径获得免疫的途径n人工主动免疫人工主动免疫(Artificial active immunity)给机体输入给机体输入抗原性物质抗原性物质,激活机体的免疫应答,使机体自身,激活机体的免疫应答,使机体自身产生抵抗疾病的能力。产生抵抗疾病的能力。n人工被动免疫人工被动免疫(Artificial passive immuni
10、ty)将对疾病有免疫力的供者的将对疾病有免疫力的供者的免疫应答产物免疫应答产物转移给受者,或自转移给受者,或自体免疫细胞体外处理后回输自身,以预防或治疗疾病。体免疫细胞体外处理后回输自身,以预防或治疗疾病。第一节 免疫预防疫疫 苗苗概念:疫苗是利用微生物及其代谢产物,概念:疫苗是利用微生物及其代谢产物,经过人工减毒或灭活或基因工程等经过人工减毒或灭活或基因工程等 方法制成,用于预防疾病的人工主方法制成,用于预防疾病的人工主 动免疫制剂。动免疫制剂。疫疫 苗苗疫苗的基本要求疫苗的基本要求 1.安全:安全:无致病性、致癌性,避免无关蛋白和内毒素污染,推崇口服或尽量减少注射次数;2.有效:有效:保护
11、性免疫以 体液或细胞免疫为主或两者兼备;能引起显著的免疫记忆,维持时间很长;3.实用:实用:接种简单、易于保存运输、价格低廉。疫苗的分类疫苗的分类减毒活疫苗减毒活疫苗灭活疫苗灭活疫苗类毒素疫苗类毒素疫苗 亚单位疫苗亚单位疫苗DNADNA疫苗疫苗可食用疫苗可食用疫苗减毒活疫苗减毒活疫苗 是用减毒或无毒力的是用减毒或无毒力的活病原微生物活病原微生物制成。制成。卡介苗、口服小儿麻痹疫苗(糖丸)卡介苗、口服小儿麻痹疫苗(糖丸)优点:优点:模拟自然感染,一般只需接种一次。模拟自然感染,一般只需接种一次。免疫原性强、免疫效果好免疫原性强、免疫效果好 缺点:缺点:可能出现毒力回复突变可能出现毒力回复突变减毒
12、活疫苗减毒活疫苗牛型结核杆菌牛型结核杆菌 Mycobacterium bovis 置于含胆汁的置于含胆汁的培养基,逐渐培养基,逐渐增加胆汁的浓增加胆汁的浓度度卡介苗卡介苗 Bacillus Calmette-Guerin (BCG)在胆汁中适应性生在胆汁中适应性生长,充分减毒成为长,充分减毒成为预防肺结核的疫苗。预防肺结核的疫苗。13年年230次传代次传代法国科学家法国科学家CalmetteGuerin灭活疫苗灭活疫苗 选用免疫原性强的病原体,经人工大量培养后,选用免疫原性强的病原体,经人工大量培养后,用理化方法灭活制成。又称用理化方法灭活制成。又称“死疫苗死疫苗”。如:流感疫苗、甲肝疫苗如:
13、流感疫苗、甲肝疫苗 优点:优点:安全安全 缺点:缺点:免疫原性较差,主要诱导特异性抗体的免疫原性较差,主要诱导特异性抗体的 产生;需加强免疫。产生;需加强免疫。流感疫苗制备流程流感疫苗制备流程死疫苗和活疫苗的比较 区别点 灭活疫苗 减毒活疫苗制剂特点死、强毒株活、弱毒或无毒接种剂量及次数较多,2-3次较少,1次副作用较大较小保存及有效期易保存,较稳定易失效,4保存免疫效果较差,维持数月至2年较好,维持3-5年或更长类毒素疫苗类毒素疫苗 类毒素是用细菌的外毒素经类毒素是用细菌的外毒素经0.30.4%甲醛处理制甲醛处理制成。如破伤风、百日咳、白喉类毒素疫苗成。如破伤风、百日咳、白喉类毒素疫苗亚单位
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