公共场所卫生规范微生物指标-红软基地课件.ppt
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- 公共场所 卫生 规范 微生物 指标 基地 课件
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1、公共场所卫生监测微生物检验技术 公共场所卫生技术服务机构承担的工作公共场所卫生技术服务机构承担的工作(一)空气空气、微小气候(湿度、温度、风速)、采光、照明、噪声等室内环境的卫生检验、检测与评价;(二)顾客用品用具顾客用品用具的卫生检验、检测与评价;(三)游泳场(馆)和公共浴室水质游泳场(馆)和公共浴室水质卫生检验、检测与评价;(四)公共场所饮用水公共场所饮用水(包括:自备水、直饮水、二次供水)卫生检验、检测与评价;(五)集中空调通风系统集中空调通风系统的卫生检验、检测与评价。2013年公共场所卫生监测微生物指标生活饮用水 生活饮用水标准检验方法(GB/T 5750)(GB/T 5750)宾馆
2、微生物指标 公共场所卫生标准检验方法(GB/T 18204-2000)游泳池水微生物指标 公共场所卫生标准检验方法(GB/T 18204-2000)集中空调系统微生物指标 公共场所集中空调通风系统卫生规范(WS 394-2012)公共场所生活饮用水微生物检验公共场所生活饮用水微生物检验n指标:n菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌、贾第鞭毛虫、隐孢子虫 生活饮用水中微生物指标生活饮用水中微生物指标 名称名称 单位单位 限值限值n菌落总数 CFU/mL 100 n总大肠菌群 MPN/100mL或 CFU/100mL 不得检出 n耐热大肠菌群 MPN/100mL或 CFU/100mL
3、不得检出 n大肠埃希氏菌 MPN/100mL或 CFU/100mL 不得检出 n贾第鞭毛虫 个/10 L 1 n隐孢子虫 个/10 L 1水样的采集和保存水样的采集和保存n采样的原则:n1.采集的水样,必须具有代表性代表性,能真实n反映水质状况。n2.在实验室检测之前水样中微生物数量应保持不应保持不变。变。采样容器采样容器n1.采样容器应采用洁净、无色、无毒的硬质玻璃(又称硼硅玻璃)。样品瓶必须专瓶专用,切不可用实验室盛装过浓溶液的瓶作采样瓶。通常我们使用500ml的高压灭菌的细口瓶采样。n2.容器及瓶塞、瓶盖应能经受灭菌的温度容器及瓶塞、瓶盖应能经受灭菌的温度。n3.容器洗涤:将容器用自来水
4、和洗涤剂洗容器洗涤:将容器用自来水和洗涤剂洗n涤,并用自来水彻底冲洗后,用10%盐酸溶盐酸溶n液浸泡过夜,然后依次用自来水,蒸馏水洗n净。n4.容器灭菌:分干热和高压蒸气灭菌两种。容器灭菌:分干热和高压蒸气灭菌两种。n干热灭菌要求160下维持下维持2 h;高压蒸气灭;高压蒸气灭n菌要求121下维持下维持15 min,高压蒸汽灭菌,高压蒸汽灭菌n后的容器如不立即使用,应于60将瓶内冷将瓶内冷n凝水烘干。灭菌后的容器应在2周内使用周内使用。水样采集水样采集n单独采样。n同一水源、同一时间采集几类检测指标的水样时,应先采先采集供微生物学指标检测的水样集供微生物学指标检测的水样。n采样时应直接采集,不
5、得用水样涮洗已灭菌的采样瓶,并避免手指和其他物品对瓶口的沾污。n末梢水采集:采样前用酒精灯灼烧对水管口进行消毒,放水约5分钟后采集水样约玻璃瓶的分钟后采集水样约玻璃瓶的80%。容积整个过程要。容积整个过程要快,稳。不要让水流过大,以免溅出,管口不要与瓶口接快,稳。不要让水流过大,以免溅出,管口不要与瓶口接触,收集完应马上将瓶塞旋紧。触,收集完应马上将瓶塞旋紧。水样保存方法水样保存方法n黑暗处,4,4h内检测。内检测。n如有游离余氯应在采样瓶消毒前每125ml加加0.1mg硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠溶液(10%)。菌落总数检测方法菌落总数检测方法n1.平皿计数法平皿计数法n本法适用于生活饮用水及其
6、水源水中菌落总数的测定。菌落总数菌落总数n指在一定条件培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),1mL水样中所含菌落的总数。检验步骤检验步骤n生活饮用水n以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样,充分混匀的水样,注入灭菌平皿中,倾注约注入灭菌平皿中,倾注约15 mL已融化并冷却到已融化并冷却到45左右左右的营养琼脂培养基,立即旋摇平皿,使水样与培养基充分的营养琼脂培养基,立即旋摇平皿,使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种,同时另用一个平皿只混匀。每次检验时应做一平行接种,同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。倾注营养琼脂培养基作为空白对照。n待冷
7、却凝固后,翻转平皿,使底面向上,置于36培培养箱内培养养箱内培养48 h,进行菌落计数。即为,进行菌落计数。即为1mL水样中的菌落水样中的菌落总数。总数。水源水水源水n以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样,注入盛有9 mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:10稀释液。n吸取1:10的稀释液1 mL注入盛有9 mL灭菌生理盐水的试管中,混匀成1:100稀释液。按同法依次稀释成1:1 000,1:10 000稀释液筹备用。如此递增稀释一次,必须更换一支1 mL灭菌吸管。n用灭菌吸管取未稀释的水样和2个3个适宜稀释度的水样1 mL,分别注入灭菌平皿内。n以下操作同生活饮用水的检验步骤。菌落计数及报告
8、方法菌落计数及报告方法n菌落计数方法:先用肉眼观察,点数菌落数,然后再用放大5 倍倍10 倍的放大镜检查,以防遗漏。倍的放大镜检查,以防遗漏。n两个平板若其中一个平皿有较大片状菌落生长时,应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落数分布又很均匀,则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。求该稀释度的平均菌落数。不同稀释度的选择及报告方法不同稀释度的选择及报告方法n首先选择平均菌落数在30300之间者进行计算,若只有之间者进行计算,若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时一个稀释度的平均菌落数符
9、合此范围时,则将该菌落数乘则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。以稀释倍数报告之。n若有两个稀释度,其生长的菌落数均在30300之间,则之间,则视二者之比值来决定,若其比值小于视二者之比值来决定,若其比值小于2应报告两者的平均应报告两者的平均效。若大于或等于效。若大于或等于2则报告其中稀释度较小的菌落总数。则报告其中稀释度较小的菌落总数。n若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。n若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应以按稀释度最,则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。低的平均菌落数乘以稀释
10、倍数报告之。n若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间,则应以之间,则应以最接近最接近30或或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。n若所有稀释度的平板上均无菌落生长,则以未检出报告之。n如果所有平板上都菌落密布,不要用“多不可计多不可计”报告,报告,而应在稀释度最大的平板上,任意数其中而应在稀释度最大的平板上,任意数其中2个平板个平板1cm2中中的菌落数,除的菌落数,除2求出每平方厘米内平均菌落数,乘以皿底求出每平方厘米内平均菌落数,乘以皿底面积面积63.6,再乘其稀释倍数作报告。,再乘其稀释倍数作报告。n菌落计数的报告:菌落数在100以内时按实有数报告,
11、大以内时按实有数报告,大于于100时,采用两位有效数字,在两位有效数字后面的数时,采用两位有效数字,在两位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算,为了缩短数字后面的零数也可值,以四舍五入方法计算,为了缩短数字后面的零数也可用用10的指数来表示(见表的指数来表示(见表1“报告方式报告方式”栏)。栏)。总大肠菌群总大肠菌群n定义:一群在36条件下培养2448小时能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。n总大肠菌群是卫生学上的概念,不是细菌分类学概念,它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。n主要包括埃希氏
12、菌属,克雷伯氏菌属、肠杆菌属和柠檬酸杆菌属等的细菌。卫生学概念卫生学概念n总大肠菌群分布较广,在温血动物粪便和自然界广泛存在。人、畜粪便对外界环境的污染是总大肠菌群在自然界存在的主要原因。但它也来自植物的土壤,它所包括的微生物在地面水中也可繁殖。n粪便中多以典型大肠杆菌为主,而外界环境中则以总大肠菌群其他型别较多。多管发酵法多管发酵法n本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定。n总大肠菌群检测比较简单,所以被广泛用做水源的卫生指标和食品加工卫生状况的通用指标。也是评价生活饮用水卫生质量的重要指标之一。EMB分离培养分离培养n将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,于36 l 培
13、养箱内培养培养箱内培养18h24h,观察菌落形态,挑取,观察菌落形态,挑取符合下列特征的菌落作革兰氏染色、镜检和证实试验。符合下列特征的菌落作革兰氏染色、镜检和证实试验。n深紫黑色、具有金属光泽的菌落;n紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落;n淡紫红色、中心较深的菌落。镜镜 检检复发酵复发酵结果报告结果报告n根据证实为总大肠菌群阳性的管数,查MPN(most probable number,最可能数)检索表,最可能数)检索表,报告每报告每1 00 mL水样中的总大肠菌群最可能数水样中的总大肠菌群最可能数(MPN)值。值。n稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数。n如所有乳糖发酵管均阴性时,可报告总大肠
14、菌群未检出(注意稀释度)。耐热大肠菌群计数耐热大肠菌群计数n定义:在44.5培养24h48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。n是大肠菌群的一个亚群,主要是埃希氏菌属和耐热克雷伯菌属。它很少在地面水中繁殖,且仅来源于人和温血动物的粪便,因此其卫生学意义更大,检出之表明饮水已被粪便污染,有可能有肠道致病菌和寄生虫等病原体的危险。大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌定义:大肠埃希氏菌广泛存在于是人和温血动物的肠道中,能够在44.5发酵乳糖产酸产气、IMViC生化试验为+-或-+-大肠埃希氏菌主要是用于指示水源近期受到粪便污染。该指标与粪便污染的相关性好检验方法检验方法n多管发酵法n总大
15、肠菌群多管发酵法初发酵检测阳性管,用接种环挑一环到EC-MUG管中,管中,44.5培养培养24h2h,用,用366nm紫外灯照摄,产生兰色荧光紫外灯照摄,产生兰色荧光者为阳性者为阳性酶底物法酶底物法n大肠埃希氏菌产生-葡萄糖醛酸酶(-glucuronidase)分解四甲基伞形酮-D-葡萄糖苷(4-methyl-umbelliferyl-D-glucuronide,MUG)使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理,来判断水样中是否含有大肠埃希氏菌。n定性试验、定量试验(10管法、51孔定量盘法)n培养基:EC-MUGn黄色有蓝色荧光者为阳性黄色有蓝色荧光者为阳性n水样不变黄有蓝色荧光者不属
16、于阳性水样不变黄有蓝色荧光者不属于阳性公共场所卫生检验、检测与评价公共场所卫生检验、检测与评价n公共场所空气细菌总数测定(GB/T 18204.1-2000)n茶具、毛巾、床上卧具等公共用品的细菌总数和大肠菌群 公共场所空气细菌总数检验方法公共场所空气细菌总数检验方法(GB/T 18204.1-2000GB/T 18204.1-2000)n撞击法:将集菌的营养琼脂平板置361培养48h,计数菌落数。n自然沉降法:将已采样平板置361培养48h,计数每块平板上菌落数,求出全部采样点的平均菌落数。公共场所空气细菌总数结果报告公共场所空气细菌总数结果报告n撞击法 计算公式:细菌总数=平皿菌落数/(采
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