动物传染病抗体检测技术课件.ppt

1、动物传染病抗体的检测2015.7.11血清学试验的类型凝集试验凝集试验沉淀试验沉淀试验补体结合试验补体结合试验中和试验中和试验免疫标记技术免疫标记技术凝集试验的类型凝集试验的类型 -直接凝集试验和间接凝集试验直接凝集试验和间接凝集试验u 直接凝集试验：颗粒性抗原与抗体进行的凝集试验直接凝集试验：颗粒性抗原与抗体进行的凝集试验l平板凝集试验平板凝集试验全血平板凝集试验，用于鸡白痢、鸡败血支原体病的检疫全血平板凝集试验，用于鸡白痢、鸡败血支原体病的检疫血清平板凝集试验，用于布氏杆菌病的检疫血清平板凝集试验，用于布氏杆菌病的检疫l 试管凝集试验试管凝集试验凝集试验凝集试验颗粒性抗原颗粒性抗原（细菌等

2、）（细菌等）抗体抗体凝集现象凝集现象鸡白痢的平板凝集试验鸡白痢的平板凝集试验-种鸡场中鸡白痢的净化种鸡场中鸡白痢的净化血液血液抗抗原原阴性阴性血清血清阳性阳性血清血清抗抗原原抗抗原原1 加诊断抗原加诊断抗原2 加鸡的全血、加鸡的全血、阳性血清、阴阳性血清、阴性血清性血清3 混匀混匀4 静置静置2min,观察结果。观察结果。血清平板凝集试验 -牛羊病的初筛试管凝集试验 -牛羊病的确诊间接凝集试验：可溶性抗原和抗体进行的凝集试验，需颗粒性载体的参与。间接血凝试验：红细胞为载体如猪瘟间接血凝抗体的检测 致敏红细胞致敏红细胞红细胞红细胞抗原抗原红细胞红细胞抗原抗原致敏红细胞致敏红细胞被检抗体被检抗体红

3、细胞凝集红细胞凝集 原理：原理：猪瘟病毒的抗原结合与红细胞制成正向间接猪瘟病毒的抗原结合与红细胞制成正向间接血凝抗原。血凝抗原。被检血清中如有猪瘟抗体可与红细胞表面被检血清中如有猪瘟抗体可与红细胞表面的病毒相结合，出现红细胞凝集。的病毒相结合，出现红细胞凝集。正向间接血凝检测猪瘟抗体 1.加稀释液：加稀释液：第一排的第一排的1-9孔、第三排孔、第三排1-3孔、孔、5-6孔，第四排的孔，第四排的1-12孔每孔加入稀释液孔每孔加入稀释液50ul；2.倍比稀释：倍比稀释：被检血清稀释：每个检样用一排进行倍比稀释，吸取被检血清稀释：每个检样用一排进行倍比稀释，吸取50ul被检血清加入第一被检血清加入第

4、一排的第一孔，倍比稀释到第排的第一孔，倍比稀释到第9孔；孔；阴性血清稀释：吸取阴性对照血清阴性血清稀释：吸取阴性对照血清50ul第三排孔的第一孔，倍比稀释到第第三排孔的第一孔，倍比稀释到第3孔；第孔；第5、6孔为稀释液对照，不加血清；孔为稀释液对照，不加血清；阳性血清稀释：吸取阳性对照血清阳性血清稀释：吸取阳性对照血清50ul加入第四排的第一孔，倍比稀释到第加入第四排的第一孔，倍比稀释到第12孔；孔；2.加猪瘟正向间接血凝抗原，每孔各加猪瘟正向间接血凝抗原，每孔各50ul；以上各孔加入抗原；以上各孔加入抗原25ul；振荡混匀；振荡混匀1min;3.反应：反应：37C孵育孵育2h;4.观察结果：

5、观察结果：阴性对照的第阴性对照的第3孔和稀释液对照孔应为孔底圆点，液体澄清；阳性对照的孔和稀释液对照孔应为孔底圆点，液体澄清；阳性对照的1-8孔为完全凝集，结果正常可读。孔为完全凝集，结果正常可读。被检样品完全凝集的孔数为抗体效价。被检样品完全凝集的孔数为抗体效价。接种猪瘟疫苗的猪群免疫抗体效价至少应达到接种猪瘟疫苗的猪群免疫抗体效价至少应达到1:16，具有保护力。，具有保护力。正向间接血凝检测猪瘟抗体沉淀试验的类型环状沉淀试验琼脂凝胶扩散试验 免疫电泳环状沉淀试验方法：在小口径试管中进行。原理：试管内，下层沉淀素与上层沉淀原在液体界面应形成白色沉淀环。白色沉淀环白色沉淀环沉沉淀淀原原沉沉淀淀

6、素素血血清清用途：主要用于抗原的定性试验，如 炭 疽 杆 菌 的Ascoli试验、链球菌的血清型鉴定、血迹鉴定等。琼脂凝胶扩散试验1%1%琼脂凝胶孔径为琼脂凝胶孔径为85nm85nm，能使许多可溶性抗，能使许多可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散。当抗原与抗体在凝原与抗体在凝胶中扩散。当抗原与抗体在凝胶中的一定位置上相遇时，则两者结合形成胶中的一定位置上相遇时，则两者结合形成沉淀线。沉淀线。F抗体的检测：测抗体时，加待检血清的相邻孔应加入标准阳性血清作为对照，以资比较。测定抗体效价时可倍比稀释血清，以出现沉淀带的血清最大稀释度为抗体效价。白色沉淀线白色沉淀线v 由于病毒个体微小，须用电子显微镜观察在病

7、毒病的检验技术中：电子显微镜价格昂贵、技术要求高，临床化验不用电子显微镜价格昂贵、技术要求高，临床化验不用v 血清学试验血清学试验可检测抗体，也可检测动物体内的病毒抗原，检测时间较短比较常用v 病毒的培养病毒的培养须用活细胞血清学试验是猪病毒病化验常用方法血清学试验是猪病毒病化验常用方法比较常用，但费力费时比较常用，但费力费时v胶体金标记抗体快速诊断技术（金标抗体技术）胶体金标记抗体快速诊断技术（金标抗体技术）v酶标抗体技术，如酶联免疫吸附试验（酶标抗体技术，如酶联免疫吸附试验（ELISA）v 荧光抗体技术荧光抗体技术常用的免疫标记技术常用的免疫标记技术金标检测 ELISA酶标记抗体或抗原，定

8、性或定量检测抗酶标记抗体或抗原，定性或定量检测抗原或抗体的技术原或抗体的技术ELISA（enzyme-linked immuno sorbent assay）酶联免疫吸附试验移液器酶标板ELISA结果原理：原理：ELISA检测PRRS抗体（IDEXX试剂盒阻断ELISA）PRRSV待检抗体酶标PRRSV抗体PRRSV抗原原理：原理：ELISA检测PRRS抗体（IDEXX试剂盒阻断ELISA）PRRSV待检抗体酶标PRRSV抗体抗原预先吸附于反应板孔的内表面加底物显色 1.稀释被检血清稀释被检血清：将被检血清稀释40倍（195ul稀释液+5ul被检血清）;2.加样：在酶标板的加样：在酶标板的1、

9、2孔加入阴性血清，孔加入阴性血清，3、4孔加入阳性血孔加入阳性血清，清，5-8孔依次加入上述稀释好的被检血清孔依次加入上述稀释好的被检血清;25C孵育孵育30min;（均为（均为100ul）3.洗涤：洗涤：3-5次次,每次每孔加入洗涤液每次每孔加入洗涤液300ul；4.加酶标抗体：每孔加酶标抗体：每孔100ul；25C孵育孵育30min;；5.重复第重复第3步洗涤；步洗涤；6.加底物溶液：每孔各加底物溶液：每孔各100ul；25C孵育孵育30min;7.加终止液：每孔各加终止液：每孔各100ul；8.读板：将检测板置于酶标仪进行检测。读板：将检测板置于酶标仪进行检测。ELISA检测PRRS抗体（IDEXX试剂盒）荧光抗体检测12/15(4)virus（+）virus（-）倒置荧光显微镜THANKS