原料中非蛋白氮的检测课件.ppt

1、1.器皿和设备器皿和设备1.1 立体显微镜立体显微镜1.2 实验室用粉碎机实验室用粉碎机1.3 PH计计1.4 漩涡混合器漩涡混合器1.5 45 目筛目筛1.6 试管试管1.7 培养皿培养皿1.8 滴管滴管1.9 点滴板点滴板1.10 常规化验设备和玻璃器皿常规化验设备和玻璃器皿2.化学试剂化学试剂2.1 尿素酶，尿素酶，Merck#1.08489.00005(或等效或等效)2.2 溴百里香酚兰，分析纯溴百里香酚兰，分析纯2.3 氢氧化钠，分析纯氢氧化钠，分析纯2.4 盐酸盐酸 37%，分析纯，分析纯2.5 二苯胺，分析纯二苯胺，分析纯2.6 Chromotropic acid(C10H6O8

2、S2Na2)，分析纯，分析纯2.7 硫酸硫酸 98%，分析纯，分析纯2.8 碘化钾，分析纯碘化钾，分析纯2.9 氯化汞，分析纯氯化汞，分析纯2.10 石油醚，分析纯石油醚，分析纯2.11 无水乙醇，分析纯无水乙醇，分析纯2.12 三聚氰酸，分析纯三聚氰酸，分析纯2.13 尿素，分析纯尿素，分析纯2.14 硝酸钾，分析纯硝酸钾，分析纯2.15 氯化铵，分析纯氯化铵，分析纯2.16 三聚氰胺，分析纯三聚氰胺，分析纯2.17 生物蛋白精生物蛋白精 ESB2.18 尿醛聚合物尿醛聚合物2.19 蒸馏水蒸馏水3.试剂准备试剂准备3.1 0.4尿素酶尿素酶 取 0.4g 尿素酶溶于 100ml 蒸馏水中，

3、放在冰箱里保存。3.2 0.1的溴百里酚蓝的溴百里酚蓝 取 0.1g 溴百里酚蓝溶于1.6ml 0.1N NaOH(NaOH 0.4g 溶于 100ml 水)，混匀，用蒸馏水定容到 100 ml，用 0.1N HCL(量取 0.88ml HCL加入到 100ml 蒸馏水中)标定PH 2.32.4，之后将溶液转入棕色玻璃试剂瓶，放在冰箱里保存。3.3 0.5二苯胺二苯胺 取 0.5g 二苯胺，倒入 20ml 蒸馏水，再慢慢加入 80ml 硫酸混匀即可。3.4 0.5的变色酸的变色酸 取 0.5g 变色酸，倒入 100ml 硫酸中，搅匀即可。3.5 20%NaOH 取 20g NaOH溶于蒸馏水里

4、，然后定容到 100 毫升，混匀，室温保存。3.6 奈斯勒试剂奈斯勒试剂 3.5g KI加入 1.25g HgCl2 加入 80ml 蒸馏水，搅拌，加 12g NaOH，用蒸馏水定容到 100ml，用滤纸过滤溶液，将滤液保存到棕色玻璃试剂瓶中。3.7 75%H2SO4 缓慢将 25ml 浓硫酸注入 25ml 蒸馏水中，混匀，室温保存。3.8 40%乙醇乙醇 将 40ml 乙醇与 60ml 蒸馏水混匀，室温保存。3.9 饱和三聚氰酸溶液饱和三聚氰酸溶液 取 1g 三聚氰酸溶于 100ml 80蒸馏水中，混匀，室温保存。3.10 参照物准备参照物准备3.10 参照物准备参照物准备 通过将几种非蛋白

5、氮化学药品混合到原料中制备非蛋白氮的参照物，按参照物样品重量为100克计算。非蛋白氮类型非蛋白氮类型化学药品化学药品化学药品重量化学药品重量(克克)0.1%NPN0.25%NPN0.5%NPN1.0%NPN尿素尿素尿素0.1g0.25g0.5g1.0gNO-3K NO30.16g0.4g0.8g1.6gNH+4NH4Cl0.3g0.74g1.49g2.97g尿醛聚合物尿醛聚合物尿醛聚合物尿醛聚合物0.1g0.25g0.5g1.0gESB生物蛋白精生物蛋白精ESB生物蛋白精生物蛋白精0.1g0.25g0.5g1.0g三聚氰胺三聚氰胺三聚氰胺三聚氰胺0.1g0.25g0.5g1.0g为了使样品结果

6、有效，为了使样品结果有效，NPN参照样品必须和待测样品一起检测。参照样品必须和待测样品一起检测。4.检测步骤检测步骤 检测方法包括对尿素、铵盐、硝酸盐检测方法包括对尿素、铵盐、硝酸盐/亚硝酸盐、尿醛聚合物、生物亚硝酸盐、尿醛聚合物、生物蛋白精和三聚氰胺的检测。如果样品在检测前需要脱脂，下面有两种脱蛋白精和三聚氰胺的检测。如果样品在检测前需要脱脂，下面有两种脱脂方法。脂方法。常规脱脂常规脱脂 快速脱脂快速脱脂 样品放在滤纸里包裹好样品放在滤纸里包裹好 将样品放在大烧杯中将样品放在大烧杯中 加入石油醚没过样品加入石油醚没过样品 用石油醚浸泡用石油醚浸泡 搅动搅动15分钟分钟 用滤纸过滤收集脱脂样品

7、用滤纸过滤收集脱脂样品 等待等待2-3小时小时 取出滤纸包放到通风橱风干取出滤纸包放到通风橱风干 样品放到通风橱风干样品放到通风橱风干 称取称取2克样品克样品+10ml蒸馏水蒸馏水静置静置10分钟分钟尿素检测尿素检测铵盐检测铵盐检测硝酸盐检测硝酸盐检测搅拌、混匀搅拌、混匀10-15秒秒取上清液检测非蛋白氮取上清液检测非蛋白氮取上清液检测非蛋白氮取上清液检测非蛋白氮静置静置10分钟分钟取上清液取上清液 6-8 6-8 滴在点滴板滴在点滴板尿素检测尿素检测加加0.1%溴百里香酚兰溴百里香酚兰2-3滴，滴，0.4%尿素酶尿素酶4-5滴滴。结果：蓝色结果：蓝色铵盐检测铵盐检测硝酸盐检测硝酸盐检测加加2

8、-3滴奈氏勒试剂滴奈氏勒试剂结果：深橘红色变灰结果：深橘红色变灰加加0.5%二苯胺二苯胺2-3滴滴结果：中间出现兰黑色结果：中间出现兰黑色取上清液取上清液 6-8 滴在点滴板滴在点滴板取上清液取上清液6-8滴在点滴板滴在点滴板判定最低限0.25%判定最低限0.05%判定最低限0.1%结果：结果：5-10分钟内出现紫罗兰色分钟内出现紫罗兰色判定最低限判定最低限 0.15%4.2.2 方法方法2 范围：仅适用于动物类产品。范围：仅适用于动物类产品。取取3g样品于样品于50ml具塞离心管里具塞离心管里 加加35ml煮沸的煮沸的20%NaOH溶液溶液 漩涡混匀后，放置漩涡混匀后，放置5分钟分钟 将上清

9、液倒掉，留取下沉物将上清液倒掉，留取下沉物 加加35ml蒸馏水蒸馏水 混匀，放置混匀，放置5分钟分钟 倒掉上清液倒掉上清液 用蒸馏水洗涤下沉物用蒸馏水洗涤下沉物3-4次，直至洗涤液透明次，直至洗涤液透明 下沉物用蒸馏水转移到下沉物用蒸馏水转移到10ml试管中试管中 加加1ml0.5%变色酸，混合后观察颜色变色酸，混合后观察颜色 如果颜色不明显可以再加如果颜色不明显可以再加1ml0.5%变色酸，混合后观察颜色变色酸，混合后观察颜色 结果：呈现紫罗兰色结果：呈现紫罗兰色判定最低限判定最低限 0.25%4.3 ESB生物蛋白精检测生物蛋白精检测 范围：适用于动物类产品和植物类产品范围：适用于动物类产

10、品和植物类产品判定最低限判定最低限0.1%4.4 三聚氰胺检测三聚氰胺检测 有两种方法判定三聚氰胺。有两种方法判定三聚氰胺。4.4.1 方法方法1 (0.5%二苯胺二苯胺/奈斯勒方法奈斯勒方法)白色部分呈橘红色白色部分呈橘红色判定最低限判定最低限 0.05%4.4.2 方法方法2(三聚氰酸法三聚氰酸法)适合于动物类产品适合于动物类产品 适合于植物类产品适合于植物类产品 取取 4g 脱脂样品脱脂样品 取取 5g 样品样品-Ve判定最低限 0.03%原原 料料 判定最低限判定最低限动物类产品动物类产品鱼粉鱼粉/鱼头粉鱼头粉/鸡肉副鸡肉副产品产品/猪肉粉猪肉粉0.03%鱿鱼肝粉鱿鱼肝粉0.05%植物类产品植物类产品菜粕菜粕/小麦蛋白粉小麦蛋白粉0.03%玉米蛋白粉玉米蛋白粉/豆粕豆粕/面面粉粉0.05%