基因工程专题课件.ppt

1、识别双链识别双链DNADNA分子上特定的核苷酸序列，分子上特定的核苷酸序列，（4-64-6个碱基对，且具有个碱基对，且具有回文结构回文结构）并有）并有相应的酶切位点相应的酶切位点3 3）结果：）结果：形成形成黏性末端或平末端黏性末端或平末端主要是从原核生物中分离纯化出来的一主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶种酶,旨在将旨在将DNADNA片段片段化。化。2 2）特点：）特点：n+1n黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端5353Bam HGTCCAGGCCTAGGATCC GGGATCCCCTAGGHindGACCTGGTCGACCAGCTG平末端平末端黏性末端黏性末端GTCCAGGACCTG目的

2、基因目的基因限制酶限制酶A载体载体限制酶限制酶A重组体重组体限制酶限制酶B思考：思考：1、用限制酶、用限制酶A和限制酶和限制酶B酶切重组体，可得几酶切重组体，可得几个个DNA片段片段？思考：思考：2 2、用、用DNADNA连接酶可得连接酶可得几种重组体？几种重组体？DNA连接酶连接酶GTCGACCAGCTGHind:GTCCAGGACCTGCCCGGGGGGCCCCCCGGGGGGCCCSmaGTCGGGCAGCCC、不同的限制酶如产生相同的黏性末端，、不同的限制酶如产生相同的黏性末端，则可进行则可进行DNADNA连接。连接。、重组、重组DNADNA上的酶切位点可能改变。上的酶切位点可能改变。

3、GGATCC CCTAGG AGATCT TCTAGAGCCTAG GATCC GATCTAG GATCT AGGATCTCCTAGA211 1、0808江苏生物江苏生物3232题：题：（5）采用采用EcoR和和Pst酶切，得到酶切，得到_种种DNA片断。片断。采用采用EcoR和和Sma酶切，得到酶切，得到_种种DNA片断。片断。目的基因目的基因限制酶限制酶A载体载体限制酶限制酶A DNA连接酶连接酶重组体重组体 载体自载体自 身环化身环化目的基因目的基因 自身环化自身环化优势：优势：形成的重组质粒只有形成的重组质粒只有一种，避免了筛选。一种，避免了筛选。5、（普陀）在构建含目的基因的重组质粒

4、、（普陀）在构建含目的基因的重组质粒A时，如果使用时，如果使用EcoR进行酶切，则含目的基因的外源进行酶切，则含目的基因的外源DNA 片段和质粒在片段和质粒在DNA连接酶的作用下，至少可形成连接酶的作用下，至少可形成 种环状产物。种环状产物。3为防止含目的基因的外源为防止含目的基因的外源DNA片段自身环化，片段自身环化，应选用应选用_(限制）酶进行切割。限制）酶进行切割。BamH 和和Hind 含一个抗性基因的质粒含一个抗性基因的质粒:1、目的基因的插入位点：、目的基因的插入位点：3、重组、重组DNA的筛选：的筛选：2、导入的受体细胞是否应含抗、导入的受体细胞是否应含抗 性基因：性基因：（如大

5、肠杆菌）（如大肠杆菌）不含不含抗性基因之外抗性基因之外导入大肠杆菌并接种导入大肠杆菌并接种培养基含抗生素培养基含抗生素出现菌落出现菌落出现菌落出现菌落 无菌落无菌落(质粒未导入质粒未导入)含目的基因产物的检测含目的基因产物的检测第一次筛选第一次筛选:第二次筛选第二次筛选:含两个抗性基因的质粒含两个抗性基因的质粒:1、目的基因的插入位点：、目的基因的插入位点：3、重组、重组DNA的筛选：的筛选：2、导入的受体细胞是否应含抗、导入的受体细胞是否应含抗 性基因性基因（如大肠杆菌）（如大肠杆菌）：插入一个抗性基因内插入一个抗性基因内,保留一保留一个抗性基因个抗性基因培养基应怎样加入抗生素培养基应怎样加入抗生素?不含不含抗生素抗生素1 1、2 2抗生素抗生素1 1抗生素抗生素2 2质粒导入质粒导入大肠杆菌大肠杆菌导入大肠杆菌并接种导入大肠杆菌并接种培养基含培养基含抗生素抗生素2出现菌落出现菌落 两种培养基两种培养基均无菌落均无菌落(质粒未导入质粒未导入)培养基含培养基含抗生素抗生素1不出现菌落不出现菌落大肠杆菌大肠杆菌中含质粒中含质粒出现菌落出现菌落出现菌落出现菌落大肠杆菌中大肠杆菌中含重组质粒含重组质粒大肠杆菌大肠杆菌中含质粒中含质粒