抗体筛选和鉴定课件.ppt

1、 广州血液中心血型研究室 罗广平 输血前检查的目的 选择用于患者的血液或血液制品，使输入的成分能在受者体内有效存活，无不良反应。要求要求输入的红细胞在受者体内必须不凝集和不溶血，输入的血浆不导致患者自身红细胞显著破坏。输血前的血型血清学试验包括:lABO血型正反定型lRh（D）定型l抗体筛检和鉴定l交叉配合试验 试验项目 单项配合率 累积配合率 不做任何试验 644%644%ABO定型 350%994%Rh定型 04%998%抗体筛选 014%9994%交叉配血 001%9995%自身输血 100%100%l患者的病史和标本等的检查核对及处理l ABO和Rh(D)定型l 抗体筛选和鉴定l 交叉

2、配血试验l 已配合血液的标签与发出1病史资料和信息 l 输血前检查强调输血科(血库)工作人员应仔细阅读输血申请单。l检查前应尽可能了解，核对病人的有关资料，包括病人的姓名，年龄，床号、住院号及唯一性标识码，性别，种族，临床诊断，输血史，药物史，妊娠史。l凡资料填写不全的输血申请单要退回临床科室补充，不得迁就，也不能通过电话修改。1病史资料和信息 l如果病人以前有过试验，则要注意核查病人以前检查的血清学试验记录及以往输血反应的记录等。把以前的ABO、Rh血型和抗体检测的解释同现在的解释及任何异常情况的解答进行比较。l如既往曾经检出某种血型抗体，即使目前该抗体检测阴性，也应选择无相关抗原的血液输注

3、。2标本的要求u 标本必须有正确的标签。如果标本标签上的内容与血液申请单上的内容不一致或对病人身份确认有疑问的话，必须重抽一份新的血液标本，任何人不得对错误的标签进行修改。u所用血标本能代表患者当前的免疫学状态。输血前检查的各项试验必须使用3天内采集的血标本，反复输血的患者更应注意抽取新的标本作配血试验，避免因回忆反应而产生的抗体漏检。2标本的要求l要防止血样的稀释和溶血的产生，溶血的标本一般不能使用，原因是溶血标本的游离血红蛋白可以掩盖抗原抗体反应引起的溶血现象，对试验结果判断造成干扰。l输血后所有的标本均应妥善保存于28冰箱中，至少一周。（1）没有输血申请单或输血申请单资料填写不全，不能采

4、集血标本。（2）采集血标本者必须核对输血申请单上提供的病人姓名、性别、床号、住院号及唯一性标识码与实际病人是否一致。如果二者不一致，则不能抽血。（3）血标本采集者在离开病人床边之前必须在试管上贴上标明病人姓名、住院号、床号、唯一性标识码及抽标本曰期的标签；抽血者应在标签上签名，以示负责 。（4）实验室技术人员必须确认盛血试管上的标签内容与输血申请单上的资料一致。如果对病人身份确认有疑问，必须重新抽取标本，不允许经电话询问后就涂改错误的标签或错误的申请单。（5）实验室拒收没有标签的标本。(6)加强风险意识培训教育。l各血型系中，以A、B抗原性最强，Rh（D）抗原次之，当受者接受了所缺少的A、B抗

5、原后，几乎每个人都 会产生特异性同种抗体。l大约有2/3的Rh(D)阴性的人，接受Rh(D)阳性血液后可产生抗D抗体。l经 一次 妊娠Rh(+)的胎儿后，大约7%的Rh(-)妇女在6个月内血清学可测到抗D。l这些抗体是造成溶血性输血反应的主要原因。因此，每个病人和供血者除作A、B抗原定型外，最好还作Rh(D)抗原定型，然后选择合适的（同型或相容）献血者血液。l如对血型定型结果有疑问，必须在输血前妥善解决，否则在输血时很难选到相合的血液。1、技术和管理错误这是ABO定型试验中产生异常结果的主要原因，包括：（1）标本或试剂搞错，造成假阳性或假阴性结果。（2）器材不洁产生假阳性结果。（3）试剂污染或

6、失效产生假阳性或假阴性结果。（4）离心过度或不足，产生假阳性或假阴性结果。（5）阳性反应产生溶血现象未能识别，导致假阴性结果。（6）漏加试剂，产生假阴性结果。（7）结果记录或判断错误，产生假阳性或假阴性结果。（8）细胞与血清比例不适当，产生假阳性或假阴性结果。2、血清异常 华通氏胶或血清蛋白异常引起串钱状形成，影响反定型结果。3、红细胞致敏 在含高蛋白介质的试剂中可发生凝集，产生假阳性结果。4、异常基因型 ABO亚型的弱抗原难以检出，产生假阴性结果。5、近期输血 曾异型输血，使病人血液标本成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝集”现象。6、嵌合体血型 体内有两群红细胞，定型时显示“

7、混合外观凝集”现象。7、疾病因素导致抗原减弱 某些白血病病人ABO血型抗原可受到抑制，检出困难。8、红细胞多凝集现象 红细胞因遗传或获得性的表面异常，发生多凝集现象。9、获得性类B 由于革兰氏阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性。10、近期内进行大量的血浆置换治疗，影响抗体效价，造成反定型困难。11、异常的血浆蛋白 病人血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例和高浓度的纤维蛋白原等能导致缗钱状形成，造成假凝集现象。12、不规则抗体的存在 受检者血浆中，含有ABO血型抗体以外的不规则抗体，与试剂A、B细胞上的相应抗原起反应。13、低丙种球蛋白血症 低丙种球蛋白血症病例，可能会因免疫球蛋白水平全面下降

8、使血清定型时不见凝集或仅见弱凝集反应。14、药物等因素 药物、右旋糖酐及静脉注射某些造影剂可引起红细胞聚集而类似凝集。15、年龄因素 在未产生自己抗体的婴儿、由母亲被动获得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，试验时可出现异常结果。lRh定型主要鉴定D抗原，定型时应按抗D血清试剂的使用说明进行，并注意设立对照试验系统。lDu型的鉴定及意义 l只有病人有抗D以外的抗体时才有必要确定献血者Rh（D）以外的抗原，选择抗体对应的阴性抗原血液和病人配血，可避免溶血性输血反应的发生。Rh血型系统的抗体及其临床意义1 Rh抗体的免疫球蛋白性质：大部分Rh抗体属IgG,主要为IgG1和IgG3亚类,部分属IgG2

9、和IgG4。免疫反应初期，抗体以IgM+IgG混合出现，以IgM为主。以后IgM消失，以IgG抗体为主。Rh血型系统的抗体及其临床意义2 Rh抗体的产生：主要途径有两个l通过Rh血型异型输血免疫产生。l通过母婴Rh血型不合的妊娠免疫而产生。3常见的Rh抗体和抗体混合物：除抗D外，常见的Rh抗体还有：抗E，抗C，抗c，抗e，抗Ce，抗cE，抗ce，抗CE等。4Rh抗体的临床意义：受血者血浆中如含有Rh抗体，在输入含相应抗原的血液后，将引起严重的溶血性输血反应。IgG类的Rh抗体由于能通过胎盘，从而破坏胎儿有相应抗原的红细胞，引起新生儿溶血病。因此，Rh抗体具有十分重要的临床意义。3导致导致Rh血

10、型鉴定可能出现假阳性的原因：血型鉴定可能出现假阳性的原因：（1）受检细胞已被免疫球蛋白致敏，或标本血清中含有引起红细胞凝集的因子。（2）受检细胞与抗血清孵育时间过长，含高蛋白的定型试剂会引起串钱状形成。（3）标本抗凝不当，受检过程中出现凝血或不的纤维蛋白凝块，误判为阳性。（4）定型血清中含有事先未被检测的其它特异性抗体，造成假阳性定型结果。（5）多凝集细胞造成定型的假阳性。（6）检定用器材或抗血清被污染，造成假阳性。4导致导致Rh血型鉴定可能出现假阴性的原因：血型鉴定可能出现假阴性的原因：（1）受检细胞悬液浓度太高，与抗血清比例失调。（2）漏加或错加定型血清。（3）定型血清的使用方法错误，没有

11、按说明书进行。（4）离心后重悬细胞扣时，摇动用力时度，摇散微弱的凝集。抗血清或酶溶液保存不当，导致失效。l目的是发现有临床意义的不规则抗体，献血者血清最好也作不规则抗体筛选，如发现有不规则抗体就将它排除，不可用于输血，特别是大量输血时，为了避免输入血液相互间的反应，对献血者进行抗体筛选具有重要价值。l抗体筛选试验意义：欧美等发达国家的血库已将抗体筛选试验列为输血前检验的常规项目，在交叉配血试验前完成或同时进行。当抗体筛选试验为阴性，且以往的记录未检出有临床意义的抗体时，可用盐水法快速配血，确认ABO血型相容即可输血。如抗体筛选试验阳性，应进一步作抗体鉴定，根据所鉴定出的抗体特异性事先选择缺乏对

12、应抗原的献血者血液配血，以缩短寻找合适血源及配血时间。l所谓不规则抗体是指抗A，抗B以外的血型抗体。l取决于被检个体（献血者或病人）的血型和用于检查的技术，大约有0.3%2%的群体血清中含有同种抗体。l对外来红细胞抗原的免疫可能由妊娠、输血或故意注射免疫物质而引起。l 抗体筛选试验的原则是用受检的血清与特殊的试剂红细胞筛选红细胞在不同的介质中起反应，以发现在37中有反应活性的抗体。l常使的试验方法有盐水介质试验法、低离子强度介质法（LISS）、酶技术、抗球蛋白试验、Polybrene及其改良法、微柱凝胶技术等等，可按抗体的血清学行为和试验的具体条件选择，但必须做抗球蛋白试验确证。（一）、筛选细

13、胞的组成（一）、筛选细胞的组成 通常是以通常是以23个单人份的个单人份的O型红细胞组成一套筛选型红细胞组成一套筛选细胞试剂，包括以下常见的抗原：细胞试剂，包括以下常见的抗原：D,C,E,c,e,M,N,S,s,P,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,Jkb（二）、抗体鉴定（二）、抗体鉴定 抗体筛选试验阳性，应作抗体鉴定试验，以确定抗体筛选试验阳性，应作抗体鉴定试验，以确定其特异其特异性。性。l交叉配血试验也称配合性试验，实际上是检查不配合性，使病人，献血者血液之间没有可测到的不相配合的抗原，抗体成份。l交叉配血应在37孵育，除作盐水介质法配血外，还应选用酶法、抗球蛋白试验法、Pol

14、ybrene 或其改良法等能有效检出不完全抗体的配血方法。（1）大多数情况下能证实献血者的红细胞与病人的ABO血型是配合的。（2）能检查出存在于病人血清中的针对献血者红细胞的大多数抗体。（3）有无工作上的差错事故（如认错病人，拿错血袋等）。（1）保证输入的红细胞有正常存活率。（2）防止病人的免疫作用。（3）从病人的血清中检出所有红细胞抗体。（4）防止由于针对献血者抗原而发生的记忆性抗体应答引起的迟延性溶血性反应。病人以前就有此种抗体但未能查出这种免疫作用。（5）检查出献血者或病人中所有的ABO血型错误。（6）检查出献血者或病人中所有的Rh血型错误。（7）检出对红细胞以外的抗体（如血小板、白细胞

15、、血清蛋白抗体等）。用血申请单一定要注明输血的理由，以便血库技术人员能选择最合适的血液进行配合性试验，患者输注的血液必须认真地加以选择，以适应每个不同患者的要求（原则是ABO、Rh(D)同型或相容性输血）。按照库存血“先入先出”的管理原则，一般来说，首先用较陈的血，但有以下情况属于例外：1患者接受大量的血液（超过其自身的总血量）需要供给最新鲜的血液。2患者本身血容量小，但又需接受大量的血液，如新生儿换血或任何不到5岁的患者输血，都应当给予尽量新鲜的血液。3超过5岁的患者为了纠正贫血要求输血，可以给予浓缩红细胞。接受定期输血的患者，如镰状细胞性贫血、地中海贫血等患者，需选择不超过7天的相对新鲜的

16、血液，这样做会使输血间隔期延长一些。4患者当前检出或既往曾检出某种血型特异性抗体，则需选择该抗体对应抗原阴性的血液配血，例如：患者检出抗E，则需选择ABO血型与患者同型或相容且Rh血型E抗原阴性之血液配血。又例如：患者既往曾检出有抗Jka抗体，尽管随着时间的延长该抗体水平下降，当前已不能检出该抗体，但为患者选择血液时仍需选择ABO血型与患者同型或相容且Kidd血型Jka抗原阴性之血液配血，只有这样才能避免因回忆反应产生的抗Jka导致迟发性溶血性输血反应。（1）病人血清对供者红细胞 检测对供者红细胞起反应的抗体，一般称为“主侧”配血。（2）病人红细胞对供者血清 检测对受者红细胞起反应的抗体，一般

17、称为“次侧”配血。（3）病人血清对病人红细胞 称为“自身对照”试验。目的是显示或排除自身抗体，直接抗球蛋白试验阳性及红细胞串钱状假阳性的存在。l酶技术配血方法 l低离子强度凝聚胺（Polybrene）交叉配血法 l血型抗体快速反应介质交叉配血法（Polybrene一步法）l抗球蛋白配血法l微柱凝胶试验配血法 1、缗钱状（串钱状）的形成 常见于多发性骨髓瘤，巨球蛋白血，以及其它表现为血沉加速的一些病例中。2、交叉配血试验结果不相容，显示有未检明的同种抗体存在。3、在室温反应中，显示有自身抗体存在。4、在抗球蛋白试验中显示有自身抗体。5、存在抗体筛选试验阴性和交叉配血结果阳性现象，提示可能有未检明

18、的抗体存在。6、交叉配血试验中，离心力不当，选成了假阴性或假阳性。7、水浴箱温度不正确，造成错误结果。8、红细胞不正确洗涤和悬浮，使抗球蛋白试验出现假阴性。9、血清中如含有溶血性抗体，则相应红细胞被溶解而不是凝集，交叉配血结果应视为阳性反应。l 配血试验显示供、受者血液配合，则应该有一种标志表明该血可以输给该患者。最好是使用配血标签，标签可以用某种方式附在血袋上。l在配血单上，需写清楚病人的姓名，床号，ABO及Rh血型，医院名称，血袋编号，交叉配血试验结果的解释，发出血液内容的名称，日期和时间，以及工作人员的姓名。l反复核对输血申请单，配血报告单和血液的标签，正确无误后，将血液或血液制品及时发

19、出。本血液与以下患者配合患者姓名：患者住院号：患者标识码：患者床号：血型：效期：配血日期：签名：如不使用请交还血库如不使用请交还血库（一）、加强责任心，认真执行查对制度，认真填写有关标签，避免采错或搞错血标本，报告单应有两人核对及签名，领取血液时应有两人共同核对有关记录，防止发错血。（二）、除急症输血外，晚上不进行输血。（三）、尽量不将O型血输给异型病人。（四）、输血前由两名以上医护人员在床前共同核对病人姓名、血型以及血袋标签，配血报告等各项记录。输血过程密切注意病人反应。（五）、注意药物配伍禁忌。把任何其它药物与献血者的血混合或注射到输血器的管子中都有潜在的危险。例如：15%的葡萄糖溶液会引

20、起红细胞聚集，因此绝不能加到血液中同时输注。20.2%盐水葡萄糖与全血混合时会发生血管内溶血。3林格氏溶液中的钙可引起ACD或CPD血凝固。4、某些药物如利尿酸、氢化可的松等加入到血液时，有潜在危险。5、献血员血循环中的药物可转移给病人而可能产意想不到的恶果，应仔细询问献血员正在服用的药物，只有这种药物对病人无害时才能接纳为献 血员，上述危险也就可避免。6、把好交叉配血关。对反复输血的病人和经产妇在输血前除做盐水介质交叉配血外，还应加做能检出IgG类抗体的配血技术，如Polybrene技术、抗人球蛋白法、酶技术等，防止不完全抗体漏检而造成溶血反应，有条件的单位最好把不规则抗体筛选试验也列入输血前常规检查。谢谢