生物制品制造检定规程课件.ppt

1、LOGO第二十章第二十章 生物制品分析生物制品分析中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室 Contents第一节第一节 生物制品生物制品的的分类分类第二节第二节 生物制品生物制品的的质量质量要要求求第三节第三节 鉴鉴别试验别试验第四节第四节 生物制品生物制品检检查内容查内容第五节第五节 生物制品质量生物制品质量控制实控制实例例第六节第六节 思考题思考题中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室1 概述概述（一）（一）生物制品（生物制品（biological products）定义：生物制品是以微生物、细胞、动物或人源组

2、织定义：生物制品是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防、治疗和诊断的一类药物。，用于人类疾病的预防、治疗和诊断的一类药物。区分概念区分概念生物药物生物药物 生化药物生化药物生物技术药物生物技术药物基因工程药物基因工程药物中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室（二）生物制品的分类按应用分按应用分A 治疗类治疗类B 预防类预防类C 诊断类诊断类生物制品分类生物制品分类其他划分其他划分疫苗；疫苗；抗毒素及抗血清；抗毒素及抗血清；血液制品；血液制品；重组重组DNA制品；制品；（三）生

3、物制品发展和现状（三）生物制品发展和现状中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室1796年 英国医生Edward Jenner首创接种牛痘疫苗预防天花的方法，并得到了迅速的普及，牛痘苗成为人类早期成功应用的生物制品之一。1919年我国开始生产生物制品，在北京天坛建立中央防疫处专门从事疫苗、抗毒素等的制造工作。50年代 生物制品机构整顿调整，全国设有7个研究所和1个国家检定所，产量迅速提高近年来发展迅速 生物制品的生产由以往的生化提取方式，发展为细胞工程、基因工程表达，得到生物活性强、性质更优、成本更低并能够大量获得的生物制品。这些生物技术药物已被广泛应用于癌症、糖尿病、心血管疾病等

4、疾病的预防和治疗。1982年 世界上第一个生物技术药物重组人胰岛素获准生产销售。全球生物技术药物报批新药的数量急速上升，大有超过常规药物报批量的趋势目前 我国已有15种基因工程药物批准上市，另有约30种正在进行临床验证和临床试验，还有近30种进入中试和实验室研究阶段，其中一部分具有自主知识产权2005年我国批准重组人脑利钠肽等4 个生物制品一类新药。中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室（四）生物制品特点（四）生物制品特点1专一性强，毒副作用小2 稳定性差3分子量大，结构确证难2 生物制品质量要求生物制品质量要求主要内容：主要内容：v1）生物药品质量标准的发展）生物药品质量标准的

5、发展v2）生物药品质量标准内容简介）生物药品质量标准内容简介v3）生物样品检测的特点）生物样品检测的特点 Company L中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室一、我国生物制品质量标准的发展一、我国生物制品质量标准的发展中国生中国生物制品规物制品规程程生物制生物制品制造检品制造检定规程定规程第一部第一部中国生中国生物制品规物制品规程程英文英文版版19591979-20002003中国生中国生物制品规物制品规程程并入并入药典，作药典，作为中国药为中国药典三部典三部200505年版三部收载年版三部收载101个品种，其中新增个品种，其中新增44个，修订个，修订57个个药典三部内容药典

6、三部内容凡 例正 文索 引附 录通用检测方法检测方法制剂通则通 则生物制品术语及名词解释中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室制造名称及编排引文索引生物制品生产、检定、贮藏、运输等各环节所相应的规程生物药品或制剂质量标准中文索引生物样品检测的特点生物样品检测的特点标准内容和方法差异大标准内容和方法差异大全过程质量控制全过程质量控制生物活性检查和效价（含量）生物活性检查和效价（含量）测定测定严格的安全性检查严格的安全性检查中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室3 鉴别试验鉴别试验取样鉴别检查报告含量测定中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室 一、鉴别一、

7、鉴别鉴别方法鉴别方法原理原理举例举例 理化鉴别法理化鉴别法化学鉴别化学鉴别采用现象明显、反应迅速的显色反采用现象明显、反应迅速的显色反应、沉淀反应等应、沉淀反应等双缩脲反双缩脲反映映物理鉴别物理鉴别利用其物理特征特性进行鉴别。利用其物理特征特性进行鉴别。UV、HPLC 生化鉴别法生化鉴别法免疫法免疫法利用特征性强的免疫反应。利用特征性强的免疫反应。免疫双扩免疫双扩散法散法酶法酶法利用酶类制剂的特征酶学性质利用酶类制剂的特征酶学性质链激酶链激酶电泳法电泳法利用蛋白质等带电的性质利用蛋白质等带电的性质琼脂糖凝琼脂糖凝胶电泳胶电泳 生物鉴别法生物鉴别法利用生物试验进行鉴别利用生物试验进行鉴别家兔惊厥

8、家兔惊厥试验试验中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室一、鉴别一、鉴别v 例例1（化学鉴别）：例如溶菌酶（化学鉴别）：例如溶菌酶（Lysozyme）的鉴别是利用溶菌酶肽）的鉴别是利用溶菌酶肽键在碱性条件下与键在碱性条件下与Cu2+络合生成有色配络合生成有色配位化合物的位化合物的显色反应显色反应进行的，其方法为进行的，其方法为：取本品约：取本品约2mg，加水，加水2滴使溶解，加滴使溶解，加10氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5滴与滴与10硫酸铜硫酸铜溶液溶液1滴，混匀后显紫红色。滴，混匀后显紫红色。中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室v 例例2（物理鉴别）：注射用重组人干扰

9、素（物理鉴别）：注射用重组人干扰素原液检定采用原液检定采用紫紫外光谱外光谱扫描进行鉴别，规定最大吸收峰波长应为扫描进行鉴别，规定最大吸收峰波长应为2803nm。一、鉴别一、鉴别v 例例3（免疫法）（免疫法）：人免疫球蛋白采用免疫双扩散法和免疫：人免疫球蛋白采用免疫双扩散法和免疫电泳法进行鉴别，免疫双扩散法中它仅与抗人血清发生抗电泳法进行鉴别，免疫双扩散法中它仅与抗人血清发生抗原抗体反应形成免疫复合物的沉淀线，而抗马、抗牛、抗原抗体反应形成免疫复合物的沉淀线，而抗马、抗牛、抗猪及抗羊血清均不产生沉淀线，免疫电泳法中与正常人血猪及抗羊血清均不产生沉淀线，免疫电泳法中与正常人血清比较，主要沉淀线为清

10、比较，主要沉淀线为IgG。中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室v 例例4（酶法）（酶法）：链激酶是专属性强的：链激酶是专属性强的蛋白水解酶，可以激活纤溶酶原转化蛋白水解酶，可以激活纤溶酶原转化为纤溶酶，引起纤维蛋白的溶解，使为纤溶酶，引起纤维蛋白的溶解，使纤维蛋白平板中出现溶圈，作为判断纤维蛋白平板中出现溶圈，作为判断指标。指标。一、鉴别一、鉴别例例5（电泳法）：例如肝素是一个（电泳法）：例如肝素是一个酸性粘多糖，进行琼脂糖凝胶电酸性粘多糖，进行琼脂糖凝胶电泳时，向正极方向移动，供试品泳时，向正极方向移动，供试品与肝素标准品进行对照，其移动与肝素标准品进行对照，其移动的位置应一

11、致。注射用重组链激的位置应一致。注射用重组链激酶，在等电聚焦电泳时主区带明酶，在等电聚焦电泳时主区带明显清晰，可利用等电聚焦电泳得显清晰，可利用等电聚焦电泳得到的等电点进行鉴别。到的等电点进行鉴别。中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室例例6（生物鉴别法）：例如，用家兔惊厥试验来鉴别胰岛素（生物鉴别法）：例如，用家兔惊厥试验来鉴别胰岛素，通过胰岛素降血糖作用进行鉴别。当计量大时，血糖降，通过胰岛素降血糖作用进行鉴别。当计量大时，血糖降低致一定水平，家兔发生惊厥，迅速注射葡萄糖注射液，低致一定水平，家兔发生惊厥，迅速注射葡萄糖注射液，补充血糖，惊厥停止补充血糖，惊厥停止二、检查二、

12、检查一般杂质检查一般杂质检查特殊杂质检查特殊杂质检查安全性检查安全性检查包括氯化物、硫酸盐、磷酸盐、铵盐、铁盐、重包括氯化物、硫酸盐、磷酸盐、铵盐、铁盐、重金属、酸度、溶液澄清度、水分及干燥失重等金属、酸度、溶液澄清度、水分及干燥失重等生物制品中的特殊杂质都是生物制品中的特殊杂质都是生产、贮藏生产、贮藏中引入中引入的。如药品纯度检查；多糖类的核酸、蛋白质；的。如药品纯度检查；多糖类的核酸、蛋白质；胰蛋白酶的糜蛋白酶等胰蛋白酶的糜蛋白酶等主要包括：热原检查、细菌内毒素检查、异常毒性主要包括：热原检查、细菌内毒素检查、异常毒性检查、降压物质检查、无菌检查、过敏物质检查、检查、降压物质检查、无菌检查

13、、过敏物质检查、外源性外源性DNA残留量、宿主菌蛋白残留量等。残留量、宿主菌蛋白残留量等。中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室二、检查二、检查 例例7（特殊杂质检查）：重组人甲状旁腺激素（特殊杂质检查）：重组人甲状旁腺激素rh-PTH(1-34)的的HPLC纯度检测法纯度检测法色谱条件色谱条件 流动相流动相A为为0.1%TFA的水溶液；的水溶液；B为为0.1%TFA乙乙腈腈-水（水（95 5）。流速）。流速1 ml/min。采用。采用Symmetry ORC18色谱柱（色谱柱（5m，4.6 150mm）；检测波长）；检测波长214nm；柱温；柱温40；进样量；进样量20l。梯度

14、程序。梯度程序 为为040min线性程序至线性程序至100%B。结果 在上述色谱条件下，各杂质与主峰能完全分离。色谱图见图12-3。主要可见两类杂质，即rh-PTH(1-34)主峰前出现的杂质Z1Z3和主峰后出现的杂质Z4。经实验发现，Z1Z3为氧化产生的降解产物，Z4为生产工艺中引入的杂质。中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室三、含量测定三、含量测定生物制品的含量表示方法通常有两种百分含量百分含量例如蛋白质总量的测定例如蛋白质总量的测定生物效价或生物效价或酶活力单位酶活力单位例如对酶类、蛋白类等生物制品，除蛋白例如对酶类、蛋白类等生物制品，除蛋白质含量测定外，还进行活性测定质

15、含量测定外，还进行活性测定常见的效价测定方法包括免疫学测常见的效价测定方法包括免疫学测定法、细胞病变抑制法、酶法等定法、细胞病变抑制法、酶法等中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室四、四、鉴别试验鉴别试验 鉴别就是依据生物制品的生物学特点，利用免疫学等方法来判断与确证产品的真伪。酶分析法要点：1.以酶为工具,目的在于测定其他物质的含量2.被测物可以是底物、辅酶、活化剂或抑制剂等3.分析步骤：a.选择适宜的工具酶 b.测定酶反应 c.校正曲线 d.测定被测物的浓度或量中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室四、四、鉴别试验鉴别试验分析基础：基于抗原和抗体特征性反应分析基

16、础：基于抗原和抗体特征性反应特点：选择性高，检测限极低特点：选择性高，检测限极低用途：临床、生物制药和环境化学等领域用途：临床、生物制药和环境化学等领域中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室（一）免疫鉴定法（一）免疫鉴定法1.免疫斑点法免疫斑点法原理原理1.供试品与特异性抗体结供试品与特异性抗体结合合2.上述抗体再与酶标抗体上述抗体再与酶标抗体性能特异性结合，性能特异性结合，3.通过酶学反应的显色，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进对供试品的抗原特异性进行检查。行检查。321中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室免疫斑点法检查步骤免疫斑点法检查步骤预处理预处

17、理上样上样干燥干燥1h1h，浸入封闭液浸入封闭液1h1h用缓冲液洗涤用缓冲液洗涤加入供试品抗体，加入供试品抗体，过夜过夜生物素标记的第二抗体，生物素标记的第二抗体，放置放置40min用缓冲液洗涤用缓冲液洗涤亲和素溶液和生物素标记的亲和素溶液和生物素标记的辣根或氧化物酶，放置辣根或氧化物酶，放置1h显色显色用缓冲液洗涤用缓冲液洗涤中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室（一）免疫鉴定法（一）免疫鉴定法 2.免疫印迹法免疫印迹法检查法检查法 1）SDS-PAGE进行电泳后转移到硝酸纤维素膜上进行电泳后转移到硝酸纤维素膜上2）进行免疫斑点法的操作）进行免疫斑点法的操作中国药科大学药物分析

18、教研室中国药科大学药物分析教研室（一）免疫鉴定法（一）免疫鉴定法 3.免疫双扩散法免疫双扩散法原理：原理：1.在打有特定小孔的琼脂板在打有特定小孔的琼脂板上，在相邻的两孔内分别加入抗上，在相邻的两孔内分别加入抗原和抗体原和抗体 2.相对应的抗原、抗体在适相对应的抗原、抗体在适宜的浓度、比例下，相互扩散宜的浓度、比例下，相互扩散 3.一定时间后，在抗原和抗一定时间后，在抗原和抗体孔之间形成免疫复合物的沉淀体孔之间形成免疫复合物的沉淀线。线。中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室（一）免疫鉴定法（一）免疫鉴定法 4.免疫电泳法免疫电泳法原理：原理：1.通过琼脂凝胶电泳将供通过琼脂凝胶

19、电泳将供试品中的各蛋白抗原组分分试品中的各蛋白抗原组分分成不同的区带成不同的区带 2.各抗原与相应的抗体各抗原与相应的抗体进行双向免疫扩散进行双向免疫扩散 3.当两者的比例合适时当两者的比例合适时形成可见的沉淀弧。形成可见的沉淀弧。中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室4 生物制品检查内容生物制品检查内容v 生物制品的质量检定包括安全性和效力检定两方面：生物制品的质量检定包括安全性和效力检定两方面：前者包括毒性试验、防腐剂试验、热原质试验和有关安全前者包括毒性试验、防腐剂试验、热原质试验和有关安全性的特殊试验等；后者包括浓度测定（含菌数或纯化抗原性的特殊试验等；后者包括浓度测定（

20、含菌数或纯化抗原量）、活菌率或病毒滴度测定、动物保护率试验、免疫抗量）、活菌率或病毒滴度测定、动物保护率试验、免疫抗体滴度测定和稳定性试验等。体滴度测定和稳定性试验等。v 将生物制品的质量检测大致分为理化检定、将生物制品的质量检测大致分为理化检定、安全检定和效力检定三个方面安全检定和效力检定三个方面：v（一）物理性状的检查（一）物理性状的检查 1外观外观 2真空度及溶解速率真空度及溶解速率 3装量装量 v（二）蛋白质含量测定（二）蛋白质含量测定v（三）防腐剂和灭活剂含量测定（三）防腐剂和灭活剂含量测定v（四）纯度检查（四）纯度检查v（五）相对分子质量或分子大小测定（五）相对分子质量或分子大小测

21、定v（六）其他（六）其他v（七）安全检查（七）安全检查 1安全检查对象安全检查对象 2安全检查内容安全检查内容 （1）过敏性物质的检查）过敏性物质的检查 （2）杀菌、灭活和脱毒检查杀菌、灭活和脱毒检查 （3）残余毒力和毒性物质的检查）残余毒力和毒性物质的检查 （4）外源性污染的检查）外源性污染的检查 v（八）生物制品的效力测定（八）生物制品的效力测定v（九）杂质检查（九）杂质检查 1宿主细胞（菌）蛋白残留量的检查宿主细胞（菌）蛋白残留量的检查 2外源外源DNA残留量的检查残留量的检查 3残余抗生素的检查残余抗生素的检查 4产品相关杂质的检查产品相关杂质的检查 Company Logo（一）注射

22、用重组人干扰素（一）注射用重组人干扰素1b质量标准质量标准 注射用重组人干扰素注射用重组人干扰素1bZhusheyong Chongzu Ren Ganraosu 1bRecombinant Human Interferon 1b for Injection 本品系由含有高效表达人干扰素本品系由含有高效表达人干扰素1b基因的大肠杆菌，经发酵、分离基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。和高度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。1 基本要求基本要求 生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具

23、、动物等应符合“凡例凡例”的有关要求。的有关要求。2 制造制造2.1 工程菌菌种工程菌菌种2.1.3 菌种检定菌种检定 主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定2.1.3.1 划种划种LB琼脂平板琼脂平板 应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长2.1.3.2 染色镜检染色镜检 应为典型的革兰阴性杆菌。应为典型的革兰阴性杆菌。5 生物制品质量控制示例生物制品质量控制示例Company Logo2.1.3.3 对抗生素的抗性对抗生素的抗性 应与原始菌种相符。应与原始菌种相符。2.1.3.4 电镜检查（

24、工作种子批可免做）电镜检查（工作种子批可免做）应为典型大肠杆菌形态，无应为典型大肠杆菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。2.1.3.5 生化反应生化反应 应符合大肠杆菌生物学性状。应符合大肠杆菌生物学性状。2.1.3.6干扰素表达量干扰素表达量 在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。2.1.3.7 表达的干扰素型别表达的干扰素型别 应用应用1b型干扰素参考血清做中和试验，型干扰素参考血清做中和试验，证明型别无误。证明型别无误。2.1.3.8 质粒检查质粒检查 该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。该质粒的酶

25、切图谱应与原始重组质粒相符。2.2 原液原液2.2.1 种子液制备种子液制备 将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜培养基（可将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜培养基（可含适量抗生素）中培养，供发酵罐含适量抗生素）中培养，供发酵罐接种用。接种用。2.2.2 发酵用培养基发酵用培养基 采用适宜的不含任何抗生素的培养基。采用适宜的不含任何抗生素的培养基。2.2.3 种子液接种及发酵培养。种子液接种及发酵培养。2.2.3.1 在灭菌培养基中接种适量种子液。在灭菌培养基中接种适量种子液。Company Logo2.2.3.2 在适宜的温度下进行发酵，应根据经批准的发酵工艺进行，并确在适宜的温度下进行发

26、酵，应根据经批准的发酵工艺进行，并确定相应的发酵条件，如温度、定相应的发酵条件，如温度、pH值、溶氧、补料、发酵时间等。发酵值、溶氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查（附录液应定期进行质粒丢失率检查（附录G）.2.2.4 发酵液处理发酵液处理 用适宜的方法收集处理菌体。用适宜的方法收集处理菌体。2.2.5 初步纯化初步纯化 采用经批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规采用经批准的纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。定的要求。2.2.6 高度纯化高度纯化 经初步纯化后，采用经批准的工艺进行高度纯化，使其经初步纯化后，采用经批准的工艺进行高度纯化，使其达到达到3.1项

27、要求，即为干扰素原液。加入适宜稳定剂，除菌过滤后于温项要求，即为干扰素原液。加入适宜稳定剂，除菌过滤后于温度下保存，并规定其有效期。度下保存，并规定其有效期。2.2.7 原液检定原液检定 按按3.1项进行。项进行。2.3 半成品半成品2.3.1 配制与除菌配制与除菌2.3.1.1 稀释液配制稀释液配制 按经批准的配方配制稀释液。配制后应立即用于稀释按经批准的配方配制稀释液。配制后应立即用于稀释2.3.1.2 稀释与除菌稀释与除菌 将检定合格加稳定剂的干扰素原液用将检定合格加稳定剂的干扰素原液用2.3.1.1项稀释液项稀释液稀释至所需浓度。除菌过滤后即为半成品，保存于稀释至所需浓度。除菌过滤后即

28、为半成品，保存于28。2.3.2 半成品检定半成品检定 按按3.2项进行。项进行。Company Logo2.4 成品成品2.4.1 分批分批 应符合应符合“生物制品分批规程生物制品分批规程”规定。规定。2.4.2 分装及冻干分装及冻干 应符合应符合“生物制品分装和冻干规程生物制品分装和冻干规程”规定。规定。2.4.3 规格规格 应为经批准的规格。应为经批准的规格。2.4.4 包装包装 应符合应符合“生物制品包装规程生物制品包装规程”规定。规定。3 检定检定3.1 原液检定原液检定3.1.1 生物学活性生物学活性 依法测定（附录依法测定（附录C）。）。3.1.2 蛋白质测定（附录蛋白质测定（附

29、录B）。色谱柱以适合分离分子质量为）。色谱柱以适合分离分子质量为560kD蛋蛋白质的色谱用含量白质的色谱用含量 依法测定（附录依法测定（附录 B第二法）。第二法）。3.1.3 比活性比活性 为生物学活性与蛋白质含量之比，每为生物学活性与蛋白质含量之比，每1mg蛋白质应不低于蛋白质应不低于1.0107IU。3.1.4 纯度纯度3.1.4.1 电泳法电泳法 依法测定（附录依法测定（附录C）。用非还原型）。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶浓度为电泳法，分离胶浓度为15，加样量应不低于，加样量应不低于10g（考马斯亮蓝（考马斯亮蓝R250染色法）或染色法）或5g（银染法）。

30、经扫描仪扫描，纯度应不低于（银染法）。经扫描仪扫描，纯度应不低于95.0。Company Logo3.1.4.2 高效液相色谱法高效液相色谱法 依法凝胶为填充剂依法凝胶为填充剂;流动相为流动相为0.1mol/L磷酸磷酸盐盐-0.1mol/L氯化钠缓冲液，氯化钠缓冲液，pH7.0；上样量不低于；上样量不低于20g，于波长，于波长280nm处检测，以干扰素色谱峰计算理论板数应不低于处检测，以干扰素色谱峰计算理论板数应不低于1000。按面。按面积归一化法计算，干扰素主峰面积应不低于总面积的积归一化法计算，干扰素主峰面积应不低于总面积的95.0。3.1.5 分子量分子量 依法测定（附录依法测定（附录C

31、）。用还原型）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶浓度为法，分离胶浓度为15，加样量应不低于，加样量应不低于1.0g，制品的分子质量应为，制品的分子质量应为19.4kD1.94kD。3.1.6 外源性外源性DNA残留量残留量 每每1次人用剂量应不高于次人用剂量应不高于10ng（附录（附录B）。）。3.1.7 鼠鼠IgG残留量残留量 如采用单克隆抗体亲和色谱法纯化，应进行本项检定如采用单克隆抗体亲和色谱法纯化，应进行本项检定。每。每1次人用剂量鼠次人用剂量鼠IgG残留量应不高于残留量应不高于100ng（附录（附录 L）。）。3.1.8 宿主菌蛋白残留量宿主菌蛋白残留量

32、 应不高于总蛋白质的应不高于总蛋白质的0.10(附录附录C)。3.1.9 残余抗生素活性残余抗生素活性 依法测定（附录依法测定（附录 A），不应有残余氨卞西林或其），不应有残余氨卞西林或其他抗生素活性。他抗生素活性。3.1.10细菌内毒素检查细菌内毒素检查 每每30万万IU应小于应小于10EU（附录（附录 E凝胶限量试验）凝胶限量试验）。3.1.11 等电点等电点 主区带应为主区带应为4.06.5（附录（附录D）。）。Company Logo3.1.12 紫外光谱扫描紫外光谱扫描 最大吸收峰波长应为最大吸收峰波长应为278nm3nm（附录（附录A）。）。3.1.13 肽图（至少每半年测定肽图（

33、至少每半年测定1次）次）依法测定（附录依法测定（附录 E），应与对照），应与对照品图形一致。品图形一致。3.1.14 N-末端氨基酸序列（至少每年测定末端氨基酸序列（至少每年测定1次）次）用氨基酸序列分析仪用氨基酸序列分析仪测定，测定，N-末端序列应为：末端序列应为：Cys-Asp-Leu-Pro-Glu-Thr-His-Ser-Leu-Asp-Asn-Arg-Arg-Thr-Leu。3.2 半成品检定半成品检定3.2.1 细菌内毒素检查细菌内毒素检查 每每30万万IU应小于应小于10EU(附录附录 E凝胶限量试验凝胶限量试验)。3.2.2 无菌检查无菌检查 依法检查（附录依法检查（附录 A）

34、，应符合规定。），应符合规定。3.3 成品检定成品检定除水分测定外，应按标示量加入灭菌注射用水，复溶后进行其余各项检定除水分测定外，应按标示量加入灭菌注射用水，复溶后进行其余各项检定3.3.1 鉴别试验鉴别试验 按免疫印迹法（附录按免疫印迹法（附录 A）或免疫斑点法（附录）或免疫斑点法（附录 B）测定，应为阳性。测定，应为阳性。3.3.2 物理检查物理检查3.3.2.1 外观外观 应为白色薄壳状疏松体，加入注射用水后迅速复溶为澄明应为白色薄壳状疏松体，加入注射用水后迅速复溶为澄明液体，不得含有肉眼可见的不容物。液体，不得含有肉眼可见的不容物。Company Logo3.3.2.2 可见异物可见

35、异物 依法检查（附录依法检查（附录B），应符合规定。），应符合规定。3.3.2.3 装量差异装量差异 按附录按附录A中装量差异项进行，应符合规定。中装量差异项进行，应符合规定。3.3.3 化学检定化学检定3.3.3.1 水分水分 应不高于应不高于3.0(附录附录 D)。3.3.3.2 pH值值 应为应为6.57.5（附录（附录 A）3.3.4 生物学活性生物学活性 应为标示量的应为标示量的80150（附录（附录 C）3.3.5 无菌检查无菌检查 依法检查（附录依法检查（附录 A），应符合规定。），应符合规定。3.3.6 细菌内毒素检查细菌内毒素检查 每每1次人用剂量应小于次人用剂量应小于10E

36、U（附录（附录 E凝胶限量凝胶限量试验）。试验）。3.3.7 异常毒性检查异常毒性检查 依法检查（附录依法检查（附录 F小鼠试验法）应符合要求。小鼠试验法）应符合要求。4 保存、运输及有效期保存、运输及有效期于于28避光保存和运输。自分装之日起，按批准的有效期执行。避光保存和运输。自分装之日起，按批准的有效期执行。5 使用说明使用说明应符合应符合“生物制品包装规程生物制品包装规程”规定。规定。6 思考题思考题1.生物制品相对于化学药物和中药有哪些特点？生物制品相对于化学药物和中药有哪些特点？2.中国药典中国药典2010年版三部的内容组织与一部、年版三部的内容组织与一部、二部有何区别？二部有何区别？3.生物制品质量标准有哪些特点？生物制品质量标准有哪些特点？4.注射用重组人干扰素注射用重组人干扰素1b成品的鉴别为何采用免成品的鉴别为何采用免疫进行而没有采用化学鉴别方法？疫进行而没有采用化学鉴别方法？5.为什么说肽图谱可作为蛋白质的精确鉴别？为什么说肽图谱可作为蛋白质的精确鉴别？6.生物制品安全性检查的项目有哪些？其中哪些是生物制品安全性检查的项目有哪些？其中哪些是基因工程药物特有的安全性检查项目？基因工程药物特有的安全性检查项目？中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室LOGO中国药科大学药物分析教研室