第七章细胞融合与体细胞杂交课件.ppt
- 【下载声明】
1. 本站全部试题类文档,若标题没写含答案,则无答案;标题注明含答案的文档,主观题也可能无答案。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
2. 本站全部PPT文档均不含视频和音频,PPT中出现的音频或视频标识(或文字)仅表示流程,实际无音频或视频文件。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
3. 本页资料《第七章细胞融合与体细胞杂交课件.ppt》由用户(三亚风情)主动上传,其收益全归该用户。163文库仅提供信息存储空间,仅对该用户上传内容的表现方式做保护处理,对上传内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(点击联系客服),我们立即给予删除!
4. 请根据预览情况,自愿下载本文。本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
5. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007及以上版本和PDF阅读器,压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 第七 细胞融合 体细胞杂交 课件
- 资源描述:
-
1、Page1细胞工程细胞工程第七章第七章 细胞融合与体细胞杂交细胞融合与体细胞杂交Page2细胞工程细胞工程 远缘杂交:远缘杂交:不同种属之间,或是地理上远缘的种内亚种之间个不同种属之间,或是地理上远缘的种内亚种之间个体的交配。种属间存在着隔离机制,致使远缘杂交常表现不亲体的交配。种属间存在着隔离机制,致使远缘杂交常表现不亲和或获得的远缘杂种表现不育。和或获得的远缘杂种表现不育。不亲和性:在有性生殖过程中,由于生物个体的细胞或组织水不亲和性:在有性生殖过程中,由于生物个体的细胞或组织水平上的不协调而使受精或接合不能正常进行,或是受精后不能平上的不协调而使受精或接合不能正常进行,或是受精后不能产生
2、后代的现象。一般表现为产生后代的现象。一般表现为生殖细胞不能融合,或受精卵不生殖细胞不能融合,或受精卵不能发育,或子代无繁殖能力能发育,或子代无繁殖能力等。不亲和性是稳定物种的重要机等。不亲和性是稳定物种的重要机理之一。理之一。第一节第一节 细胞融合细胞融合Page3细胞工程细胞工程杂交斑马:由斑马和马科动物杂交斑马:由斑马和马科动物杂交的产物。杂交的产物。狮虎:狮子和老虎的杂交产物。狮虎:狮子和老虎的杂交产物。豹狮:美洲豹与狮子的杂交产豹狮:美洲豹与狮子的杂交产物。物。Page4细胞工程细胞工程 细胞融合(细胞融合(Cell fusionCell fusion)是指使用人工方法使两个是指使用
3、人工方法使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。对于植物也叫原生质体融合,亲本细胞是体细胞,也对于植物也叫原生质体融合,亲本细胞是体细胞,也叫体细胞杂交(叫体细胞杂交(somatic cell hybridizationsomatic cell hybridization)。)。Page5细胞工程细胞工程uMuller于于1838年观察到脊椎动的肿瘤细胞能在体内自发地融合年观察到脊椎动的肿瘤细胞能在体内自发地融合产生多核的肿瘤细胞。产生多核的肿瘤细胞。uVirchow于于1858年描述了正常组织、发炎组织以及肿瘤组织中年描述了正常组织、发炎组织以及
4、肿瘤组织中的多核细胞现象。的多核细胞现象。uLuginbuhl于于1873年观察到天花病人的血液中也有多核的血细年观察到天花病人的血液中也有多核的血细胞存在。胞存在。uLange于于1875年第一个观察到脊椎动物(蛙类)的血液细胞发年第一个观察到脊椎动物(蛙类)的血液细胞发生融合的过程。生融合的过程。uCienkawski(1876)、Buck(1877)、Geddes(1880)在无脊椎动中在无脊椎动中发现了细胞合并现象。发现了细胞合并现象。细胞融合研究历史细胞融合研究历史Page6细胞工程细胞工程u1958年日本学者冈田(年日本学者冈田(Okada)发现)发现仙台病毒仙台病毒具有触发动物细
5、具有触发动物细胞融合的效应。胞融合的效应。u1974年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇(年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇(PEG)化学)化学融合法。融合法。u1975年年Kohler和和Milstein成功地融合了小鼠成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。瘤细胞而产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。u20世纪世纪80年代出现了电融合技术。年代出现了电融合技术。Page7细胞工程细胞工程细胞融合的分类细胞融合的分类1.1.材料:材料:原生质体(去除了细胞壁的裸露的细胞)、动物细胞原生质体(去除了细胞壁的裸露的细胞)、动物细胞2.2.
6、从基因型来看从基因型来看:(1 1)同核体:基因型相同的细胞融合成的融合细胞。)同核体:基因型相同的细胞融合成的融合细胞。(2 2)异核体:来自不同基因型的融合细胞。)异核体:来自不同基因型的融合细胞。3.3.从融合效果从融合效果:(1 1)对称融合()对称融合(Symmetric fusionSymmetric fusion):两个完整的细胞间的融合。):两个完整的细胞间的融合。(2 2)不对称融合()不对称融合(Asymmetric fusionAsymmetric fusion):利用物理或化学方法):利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再与另外一个完整细胞进行融合。使某亲本的核
7、或细胞质失活后再与另外一个完整细胞进行融合。Page8细胞工程细胞工程根据融合时细胞的完整程度根据融合时细胞的完整程度 1)1)对称融合对称融合 Page9细胞工程细胞工程 2)2)非对称融合非对称融合 利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行融合,它可以分为三种情况:再进行融合,它可以分为三种情况:融合细胞融合细胞=A=A细胞核细胞核+B+B细胞质细胞质融合细胞融合细胞=A=A细胞细胞(核核+质质)+B)+B细胞质细胞质融合细胞融合细胞=A=A细胞细胞(核核+质质)+B)+B细胞细胞(部分核部分核+质质)Page10细胞工程细胞工程 非对
8、称融合非对称融合Page11细胞工程细胞工程 2.2.根据原生质体的融合方式根据原生质体的融合方式1 1)自发融合)自发融合2 2)诱导融合)诱导融合Page12细胞工程细胞工程1 1)自发融合)自发融合 用酶法分解细胞壁后自发的进行融合。这类融合是用酶法分解细胞壁后自发的进行融合。这类融合是种内融合,与胞间连丝有关,融合的个体一般不能种内融合,与胞间连丝有关,融合的个体一般不能进一步发育。进一步发育。Page13细胞工程细胞工程2 2)诱导融合)诱导融合 是指制备出原生质体后,加入诱导剂或用其他方法是指制备出原生质体后,加入诱导剂或用其他方法促使两个亲本原生质体融合,诱导融合可以是种内促使两
9、个亲本原生质体融合,诱导融合可以是种内的,也可以是种间的,甚至是属间、科间的融合。的,也可以是种间的,甚至是属间、科间的融合。Page14细胞工程细胞工程显显微微镜镜下下细细胞胞融融合合过过程程Page15细胞工程细胞工程植物融合细胞成长状态对比植物融合细胞成长状态对比,左瓶中为太空微重力环境下左瓶中为太空微重力环境下融合的细胞,右瓶为地面融融合的细胞,右瓶为地面融合的细胞。合的细胞。Page16细胞工程细胞工程融合的过程,原理与关键融合的过程,原理与关键Page17细胞工程细胞工程细胞融合的主要步骤细胞融合的主要步骤 原生质体靠近 形成细胞桥 胞质渗透 细胞核融合 显微镜下的细胞融合过程显微
10、镜下的细胞融合过程 Page18细胞工程细胞工程细胞融合的原理细胞融合的原理 细胞融合的基础是细胞膜的流动性,细胞融合的基础是细胞膜的流动性,细胞膜磷脂分子细胞膜磷脂分子扰动出现通道扰动出现通道 细胞桥。细胞桥。生物膜的流动镶嵌模型(fluid mosaic model)Page19细胞工程细胞工程融合过程中两个细胞融合过程中两个细胞膜从彼此接触到破裂膜从彼此接触到破裂形成细胞桥的变化过形成细胞桥的变化过程图解。程图解。Page20细胞工程细胞工程关键:细胞核的融合关键:细胞核的融合 若是没发生细胞核的融合,仅发生了细胞质若是没发生细胞核的融合,仅发生了细胞质的融合,则可能成为的融合,则可能成
11、为嵌合细胞。嵌合细胞。细胞核的合细胞核的合并发生在有丝分裂过程中。但是这种有丝分并发生在有丝分裂过程中。但是这种有丝分裂只有当两个核的裂只有当两个核的DNADNA合成基本同步时才能发合成基本同步时才能发生:两个核同时进行有丝分裂,形成一个纺生:两个核同时进行有丝分裂,形成一个纺锤体,全部染色体都排列在一个赤道板上,锤体,全部染色体都排列在一个赤道板上,结果伴随着细胞分裂就形成了单核的子细胞,结果伴随着细胞分裂就形成了单核的子细胞,其细胞核中含有双亲细胞的染色体。其细胞核中含有双亲细胞的染色体。Page21细胞工程细胞工程细胞融合的意义细胞融合的意义u理论上说理论上说任何细胞任何细胞,都有可能通
12、过体细胞杂交而成为新的,都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源。这对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。生物资源。这对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。u融合过程融合过程不存在有性杂交过程中的生殖隔离机制不存在有性杂交过程中的生殖隔离机制的限制,的限制,为为远缘物种间的遗传物质交换远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径。提供了有效途径。u体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统双亲的核外遗传系统,在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DNADNA亦可发亦可发生重组,从而产生新的核外遗传系统。生重
13、组,从而产生新的核外遗传系统。u淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体的制备。淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体的制备。Page22细胞工程细胞工程pomato 绵山羊 Page23细胞工程细胞工程 细胞融合的常用方法细胞融合的常用方法物理法:显微操作,电场刺激等物理法:显微操作,电场刺激等化学法:硝酸钠诱导、化学法:硝酸钠诱导、PEGPEG法,高钙离子结合高法,高钙离子结合高pHpH法法生物法:仙台病毒法生物法:仙台病毒法Page24细胞工程细胞工程病毒法的主要步骤病毒法的主要步骤1.两个原生质体或细胞在病毒两个原生质体或细胞在病毒黏结黏结作用下彼此靠近;作用下彼此靠近;2.通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两
14、个细胞膜间互相渗通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透,胞质互相渗透;透,胞质互相渗透;3.两个原生质体的细胞核互相融合,两个细胞融为一体;两个原生质体的细胞核互相融合,两个细胞融为一体;4.进入正常的细胞分裂途径,分裂成含有两种染色体的杂种细进入正常的细胞分裂途径,分裂成含有两种染色体的杂种细胞。胞。基本原理:是利用病毒具有凝集细胞的能力基本原理:是利用病毒具有凝集细胞的能力生物法:仙台病毒法生物法:仙台病毒法Page25细胞工程细胞工程用用灭活的病毒灭活的病毒诱导的诱导的动物细胞融合过程示动物细胞融合过程示意图意图 Page26细胞工程细胞工程化学诱导融合方法化学诱导融合方
15、法 NaNONaNO3 3法法 高高pH-pH-高高CaCa2+2+法法 PEGPEG诱导融合法诱导融合法Page27细胞工程细胞工程(一)(一)NaNO3法法 NaNO3的作用:中和质膜的负电荷,使原生质体不的作用:中和质膜的负电荷,使原生质体不再相互排斥,而紧密结合在一起。不足:诱导频率再相互排斥,而紧密结合在一起。不足:诱导频率不高。不高。Page28细胞工程细胞工程(二)高(二)高pH-高高CaCa2+2+法法 用用pH10.5的的50 mMCaCl2溶液在溶液在37时,诱发原生时,诱发原生质体融合。质体融合。优点:杂种产量高。优点:杂种产量高。不足:高不足:高pH值对细胞有毒害作用。
16、值对细胞有毒害作用。Page29细胞工程细胞工程u聚乙二醇聚乙二醇(PEG)结构为:结构为:HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,分,分子量大于子量大于 200小于小于6000者均可用作细胞融合剂。者均可用作细胞融合剂。u通常用分子量低于通常用分子量低于1000的的PEG作融合剂最好,作融合剂最好,50PEG溶液溶液能产生能产生 最多杂交细胞。最多杂交细胞。uPEG溶液在溶液在pH6.0时细胞融合率最高。时细胞融合率最高。u优点是易得,用法简单,融合效果稳定。优点是易得,用法简单,融合效果稳定。(三)(三)聚乙二醇(聚乙二醇(PEGPEG)法)法Page30细胞工程细胞工程聚聚乙乙二二醇醇
展开阅读全文