脂肪干细胞的临床应用课件.ppt

1、脂肪干细胞及其应用 09级生科一班 青美芳 孙倩脂肪干细胞定向分化及临床应用 概述 脂肪干细胞的定义 脂肪干细胞的分离、培养与鉴定 脂肪干细胞成脂及成骨分化的影响因素 同时影响成脂和成骨分化的因素 脂肪干细胞的临床应用 概述 随着城市化进程加速，肥胖在我国尤其是大城市发病率增长迅速。肥胖是由于长期的能量摄入超过能量消耗引起的脂肪组织过剩的疾病。在成人阶段脂肪细胞数量保持恒定是一种细胞死亡与补充更新的动态平衡过程。然而相关研究提示，成熟的脂肪细胞是一种终末分化的细胞，只有有限的增殖和复制的能力。以此推测，脂肪组织中存在着干细胞群，发挥着更新脂肪细胞的作用并且贯穿整个生命过程。近年来，肥胖发病率呈

2、上趋势。北京有关部门曾专门进行过一次“肥胖抽样调查”。结果显示北京成人超重已超过40，其中男性为327，女性为673，中小学生肥胖病已超过20的警戒线，近期由国家有关部门联合对30个省市722岁30万名学生的体质健康调查表明：男生超重及肥胖率已达12.03。对此全社会给予了充分的重视。脂肪干细胞 定义：脂肪干细胞（Adipose-derived stem cells,ADSCs）是一种存在于脂肪组织中的间充质干细胞，在皮下白色脂肪组织中约占细胞总量的10%-20%，具有一般干细胞的特点，即自我更新和多向分化潜能；这种细胞群易于分离，在特定条件下可分化为骨、软骨、心肌等。脂肪干细胞的分离、培养与

3、鉴定脂肪干细胞的分离、培养与鉴定 分离与培养分离与培养：ADSCs最早是上世纪60年代Rodbell 和Jones从脂肪组织中分离出的。他们切碎鼠的脂肪垫，经过充分冲洗以去除血细胞，然后用胶原酶进行消化、离心，进而从基质血管组分(stromal vascular fraction,SVF)中分化出成熟的脂肪细胞。一般而言，ADSCs的分离都是在分离脂肪组织后随即进行。如图1所示将分离的脂肪组织在磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline PBS）中充分清洗，以去除毛发和油滴等；然后将脂肪组织用眼科剪剪碎，加入胶原酶在37水浴摇床消化30min,用含有10%FBS的 DME

4、M/F-12培养基终止消化，细胞筛过滤后，800rpm/min 预离心，上清液2400 rpm/min离心得到的沉淀即为SVF，其中含有ADSCs，用含有10%FBS的 DMEM/F-12培养基重悬细胞沉淀，将单细胞悬液种植到培养瓶或培养板中，37，5%CO2孵箱孵育。鉴定：鉴定：Rodeheffer等把CD31(-)CD45(-)Ter119(-)CD29(+)Sca1(+)CD24(+)的细胞作为ADSCs的分选指标（图二）。流式细胞仪检测和免疫组化染色可以对ADSCs的确认有辅助作用，但是ADSCs的鉴定主要还是在确认其多向分化能力方面。通过多向诱导并且检测确定诱导成功是鉴定ADSCs的

5、金标准。脂肪干细胞成脂及成骨分化的影脂肪干细胞成脂及成骨分化的影响因素响因素 成脂分化的影响因成脂分化的影响因素素 1.供体因素种属来源 组织部位 年龄性别 连续传代 冷冻保存 2.分化诱导因子 表皮生长因子 成纤维因子 成骨分化的影响因成骨分化的影响因素素 1.供体因素 组织部位年龄性别 冷冻保存2.分化诱导因子 骨形成态蛋白 自体富含血小板血浆或富含生长因子血浆 3.其他（拉伸应变、透明质酸、氧浓度、钙离子）同时影响成脂和成骨分化的因素同时影响成脂和成骨分化的因素 干细胞巢（stem cell niche）干细胞巢即干细胞周围的微环境构成，一般包括干细胞的相邻细胞、粘附分子及基质等。干细巢

6、为干细胞提供了一个隐蔽的场所，直到有分化号的刺激它才脱离静止的状态。因此干细胞巢在维持干细胞的静止和抑制分化方面发挥着重要作用。脂肪干细胞的临床应用脂肪干细胞的临床应用 1.在组织工程方面,由于其具有多向分化潜能,也同样得到重视,因此是组织工程理想的种子细胞，受到人们的关注。2.脂肪干细胞是脂肪移植合适的靶细胞，脂肪组织工程有望在乳房再造术、除皱术及凹陷畸形矫正术中发挥作用。3.ADSCs在体外增殖速度快,不必进行永生化处理就能获取足够的细胞用于移植；自体移植,可以避免排斥反应等优点4.ADSCs 体内成骨成软骨方面的实验研究也是目前研究的热点之一。参考文献参考文献 Katz AJ,Tholp

7、ady A,Tholpady SS,Shang H,Ogle RC.Cell surface and transcriptional characterization of human adipose-derived adherent stromal(hADAS)cells.Stem cells(Dayton,Ohio)2005;23:412-23.Rodeheffer MS,Birsoy K,Friedman JM.Identification of white adipocyte progenitor cells in vivo.Cell 2008;135:240-9.Zhu M,Kohan E,Bradley J,Hedrick M,Benhaim P,Zuk P.The effect of age on osteogenic,adipogenic and proliferative potential of female adipose-derived stem cells.Journal of tissue engineering and regenerative medicine 2009;3:290-301.Thank you！