药物分析-第09章-维生素类药物的分析课件.ppt

1、维生素：维生素：l是维持人体正常代谢机能所必需的微量是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物资。营养物资。l主要用于机体的能量转移和代主要用于机体的能量转移和代 谢调节谢调节l人体不能合成维生素，需从食物中摄取。人体不能合成维生素，需从食物中摄取。l维生素并非同属一类化合物，有些是醇、维生素并非同属一类化合物，有些是醇、酯，有些是酸、胺，还有些是酚和醛类。酯，有些是酸、胺，还有些是酚和醛类。VitMVitMVitPPVitPP脂溶性：脂溶性：VitAVitA、D2D2、D3D3、E E、K1K1等等 水溶性：水溶性：VitBVitB族族(B1(B1、B2B2、B6B6、B12)B12)VitC

2、 VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺、叶酸、烟酸、烟酰胺第一节第一节 维生素维生素A A一一基本结构与主要性质基本结构与主要性质1.1.基本结构：基本结构：具有共轭多烯侧链的环己烯具有共轭多烯侧链的环己烯CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3v 具有具有UVUV吸收吸收v 存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3-H 维生素维生素A A醇醇-COCH3 维生素维生素A A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 维生素维生素A A棕榈酸酯棕榈酸酯R:123456789 维生素维生素A 全反式全反式 325.5 100%新维生素新维生素Aa 2-顺顺 328 75%

3、新维生素新维生素Ab 4-顺顺 320.5 24%新维生素新维生素Ac 2,4-顺顺 310.5 15%异维生素异维生素Aa 6-顺顺 323 21%异维生素异维生素Ab 2,6-顺顺 324 24%max 相对生物效价相对生物效价 名称名称 顺反异构顺反异构生物效价生物效价一种营养素的生物学效价是指动物食入营一种营养素的生物学效价是指动物食入营养素中能被小肠吸收并参与代谢过程或贮养素中能被小肠吸收并参与代谢过程或贮存在动物组织中的部分占食入总量的比值。存在动物组织中的部分占食入总量的比值。相对生物效价指对某一标准物质的生物学相对生物效价指对某一标准物质的生物学效价的比值。效价的比值。2.主要

4、化学性质主要化学性质：易发生脱氢、脱水、聚合反应：易发生脱氢、脱水、聚合反应：CH2OHVitA2CH2VitA3鲸醇鲸醇CH2OHCH2OHCH3 溶解性：溶解性：不溶于水，微溶于乙醇，易溶于有机溶剂不溶于水，微溶于乙醇，易溶于有机溶剂（三（三氯甲烷、乙醚、环己烷）和植物油等。氯甲烷、乙醚、环己烷）和植物油等。酸酸醛醛环氧化物环氧化物、氧化剂、氧化剂紫外线、紫外线、VitAVitAVitAOO2 共轭多烯侧链易被氧化：共轭多烯侧链易被氧化：v 或有金属离子存在时更易氧化变质或有金属离子存在时更易氧化变质环氧化物环氧化物OCH2OHVitAVitA醛醛HOCVitAVitA酸酸COOH紫紫红红

5、蓝蓝色色3SbClVitACHCl3 紫外吸收特性：紫外吸收特性：维生素维生素A A分子中具有共轭多烯醇的侧链结构，分子中具有共轭多烯醇的侧链结构，在在325325328nm328nm有最大吸收。有最大吸收。与三氯化锑呈色与三氯化锑呈色维生素在三氯甲烷中能与三氯化锑试剂作用，维生素在三氯甲烷中能与三氯化锑试剂作用，产生不稳定的蓝色。产生不稳定的蓝色。二二鉴别实验鉴别实验1.三氯化锑反应三氯化锑反应维生素在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷中即维生素在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷中即显蓝色，渐变成紫红色。显蓝色，渐变成紫红色。原理：原理：维生素维生素A和氯化锑（和氯化锑（）中存在的氯化高）中存在的

6、氯化高锑（锑（V）作用形成不稳定的蓝色碳正离子。）作用形成不稳定的蓝色碳正离子。-RCOOSbCl5+CH2蓝色蓝色-RCOOSbCl5+CH2蓝色蓝色紫红紫红+CH2-RCOOSbCl5注意事项：注意事项：反应需在无水、无醇的条件下进行。反应需在无水、无醇的条件下进行。水 可 使 三 氯 化 锑 水 解 成 氯 化 氧 锑水 可 使 三 氯 化 锑 水 解 成 氯 化 氧 锑（SbOCl）。）。乙醇可以与正碳离子作用使其正电荷消乙醇可以与正碳离子作用使其正电荷消失。失。2.紫外分光光度法紫外分光光度法维生素维生素A分子中含有分子中含有5个共轭双键，其无水乙醇溶个共轭双键，其无水乙醇溶液在液在

7、326nm处有最大吸收。处有最大吸收。在盐酸催化下加热，发生脱水生成去水维生素在盐酸催化下加热，发生脱水生成去水维生素A（多一个双键），最大吸收红移，出现（多一个双键），最大吸收红移，出现3个吸收峰。个吸收峰。VitAVitAHCl去水无水乙醇maxmax为为326nm326nm一个吸收峰一个吸收峰maxmax为为350350390nm390nm三个吸收峰三个吸收峰去水去水VitAVitA（VitAVitA3 3）CH2CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3VitAVitA3.薄层色谱法薄层色谱法方法方法吸附剂：吸附剂：硅胶硅胶G G；展开剂：展开剂：环己烷环己烷-乙醚（乙醚（80:2080

8、:20）显色剂：显色剂：三氯化锑溶液三氯化锑溶液判断：判断：比较供试品和对照溶液所显蓝色斑点位置比较供试品和对照溶液所显蓝色斑点位置三三含量测定含量测定1.紫外分光光度法（三点校正法）紫外分光光度法（三点校正法）维生素维生素A A的最大吸收波长：的最大吸收波长：325325328nm328nm杂质干扰（杂质干扰（310310340nm340nm）：）：去氢维生素去氢维生素A A（VitA2VitA2）去水维生素去水维生素A A（VitA3VitA3）光照产物（无活性聚合物：鲸醇）光照产物（无活性聚合物：鲸醇）立体异构体（新维生素立体异构体（新维生素A Aa a、新维生素、新维生素A Ab b等

9、）等）氧化产物（环氧化物、维生素氧化产物（环氧化物、维生素A A醛、维生素醛、维生素A A酸）酸）三点法测定原理：三点法测定原理：在三个波长处测得吸光度，然后计算含量。在三个波长处测得吸光度，然后计算含量。1.1.条件：条件：杂质的吸收在杂质的吸收在310310340nm340nm波长范围内呈一条波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小。直线，且随波长的增大吸收度减小。物质对光的吸收具有加和性。物质对光的吸收具有加和性。2.2.波长的选择波长的选择 1 1：VitAVitA的的 maxmax（328nm328nm）；）；2 2、3 3：分别在：分别在 1 1的两侧各选一点的两侧各选一点2

10、113 第一法（等波长差法）：第一法（等波长差法）：231121KAAKAA333222111XAAXAAXAA2331112211KXAXAKXAXA加和性：加和性：加和性：加和性：（式（式1 1）CmXCmXCmX332211杂质的吸收在杂质的吸收在310310340nm340nm波长范围内呈一条直线波长范围内呈一条直线（式（式2 2）)();(31132112mXXmXX将将X X2 2、X X3 3代入式代入式1 1：23113111211211)(;)(KmXAXAKmXAXA（式（式4 4）（式（式3 3）式式3 3式式4 4：3212121111312211)1()1()()(A

11、KAKXAKAKXKK)()()()()()()(3122321121212131321231212111KKKKKKAKKAKKAXA A1(1(校正校正)为消除杂质干扰后的吸光度值：为消除杂质干扰后的吸光度值：11)(1XAA校正)()()()()()(3122321121212131321223211)(1KKKKKKAKKAKKAA校正cAbAaAA321)(1 校正1 1、2 2、3 3为预先选定波长为预先选定波长K1 1、K2 2是维生素是维生素A A纯品测得的吸光度比值纯品测得的吸光度比值用直接法测定维生素用直接法测定维生素A醋酸酯：醋酸酯：1=328nm、2=316nm、3=3

12、40nm)2(52.3340316328)(1AAAA校正 第二法（等吸收比法）：第二法（等吸收比法）：32176AAAFEM与与FDL为相似三角形：为相似三角形：KDLEMDLEM2313KDLEMX供试品在供试品在1 1、2 2、3 3处的吸光度分别为：处的吸光度分别为：A1、A2、A3：KXDLAA/32)(32AAKX即：即：又又：)(6731)(1YAYXAA校正XAAY66713即：即：将将X、Y代入式代入式 1：（式（式 1）231)(17)1(77KAKAAA校正用皂化法测定维生素用皂化法测定维生素A醇：醇：1=325nm、2=310nm、3=334nm310334325)(1

13、625.2375.47AAAA校正所求的值较实际应得之值要高所求的值较实际应得之值要高2.6%2.7%，根据实验证明，乘以根据实验证明，乘以97.35%后较准确后较准确:310334325)(1555.2260.4815.6AAAA校正吸光度校正小结1.校正都是通过最大吸收波长及其两侧二个波长的三点法进行；选择三点的共同要求是：在此波长范围内杂质的额吸收再一条直线上。2.校正公式有两种类型：等波长差法和等吸收比法。3.使用公式时要注意溶液种类以及供试品是维生素A酯或维生素A醇。1.1.测定方法测定方法第一法：直接测定法第一法：直接测定法 方法：方法：如供试品中干扰测定的杂质较少，可用溶剂如供试

14、品中干扰测定的杂质较少，可用溶剂（环己烷）溶解供试品，制成每（环己烷）溶解供试品，制成每1ml1ml含含9 915IU15IU的溶液后直接测定。的溶液后直接测定。在在300300、316316、328328、340340、360nm360nm处的吸光度，处的吸光度，确定最大吸收波长（确定最大吸收波长（328nm328nm）。）。适合于纯度高的维生素适合于纯度高的维生素A A醋酸酯。醋酸酯。计算：计算：a.a.求求E E1cm1cm1%1%A A：实测吸光度：实测吸光度A A238238或校正吸光度或校正吸光度A A238238（校正）（校正）C C：为混合样品的浓度：为混合样品的浓度32834

15、0316328 3403163283282523AAA.A 校校正正LCAEcm(%)(%11样）（纯）（样）%1%1cmcmA A值的选择值的选择1.1.判断判断maxmax是否在是否在326326329nm329nm之间之间maxmax在在326326329nm329nm之间之间改用第二法改用第二法是是否否 求算求算Ai/A328并并与规定值比较与规定值比较 299.0AA811.0AA0000.1AA907.0AA555.0AA328360328340328328328316328300 规定值规定值 差值差值328iA/A2.2.判断差值是否超过规定值的判断差值是否超过规定值的0.02

16、0.02有一个以上超过有一个以上超过0.020.02无超过无超过0.020.02 计算计算 A A328328（校正）（校正）用用A A328328计算计算 3403163283282523AAA.A 校正校正%100AAAf328328)(328 校正校正03%15%3%第二法第二法第二法第二法A328(校正校正)A328(校正校正)fb.b.求效价（求效价（IU/gIU/g）：每）：每g g供试品中所含维生供试品中所含维生素素A A的国际单位数。的国际单位数。19001900：维生素：维生素A A醋酸酯在环己烷溶液中醋酸酯在环己烷溶液中 的换算因子的换算因子1900IU/g%11（样）（样

17、）cmE维生素维生素A A的国际单位（的国际单位（IU/gIU/g）国际规定：国际规定：1IU=0.3441IU=0.344g g维生素维生素A A醋酸酯；醋酸酯；1IU=0.3001IU=0.300g g维生素维生素A A醇；醇；所以：每所以：每1g1g维生素维生素A A醋酸酯相当的国际单位数：醋酸酯相当的国际单位数：每每1g1g维生素维生素A A醇相当的国际单位数：醇相当的国际单位数：IU2907000g/IU344.0g1016IU33300000.300.300g1016换算因子换算因子维生素维生素A A的的E E1cm1cm1%1%（纯）换算因子%11g/IUcmE183018203

18、330000换算因子1900153020907000换算因子维生素维生素A A醋酸酯：醋酸酯：维生素维生素A A醇：醇：标示量丸标示量100/IU标示量平均丸重100/gIU标示量平均丸重换算因数100LCAc.c.求维生素求维生素A A醋酸酯占标识量的百分含量：醋酸酯占标识量的百分含量：100%1001900%标识量）标识量（LWWDAA：实测吸光度：实测吸光度A238或校正吸光度或校正吸光度A238(校正校正)D：供试品的稀释倍数：供试品的稀释倍数L：比色池厚度：比色池厚度W：供试品取用量：供试品取用量W：胶丸的平均内容物重量：胶丸的平均内容物重量 1900：维生素：维生素A A醋酸酯在环

19、己烷溶液中的换算因子醋酸酯在环己烷溶液中的换算因子第二法第二法:皂化法皂化法方法：方法：如供试品中干扰测定的杂质较多，且用如供试品中干扰测定的杂质较多，且用第一法无法消除杂质干扰时，可加第一法无法消除杂质干扰时，可加KOHKOH乙乙醇溶液煮沸回流皂化。醇溶液煮沸回流皂化。皂化液经乙醚提取、洗涤、滤过、浓缩皂化液经乙醚提取、洗涤、滤过、浓缩和干燥处理，用异丙醇溶解残渣并稀释。和干燥处理，用异丙醇溶解残渣并稀释。测定测定300300、310310、325325、334nm334nm处的吸光度，处的吸光度，并确定最大吸收波长（并确定最大吸收波长（325nm325nm）。）。适合于维生素适合于维生素A

20、 A醇。醇。计算：计算：a.a.求求E E1cm1cm1%1%A A：实测吸光度：实测吸光度A A235235或校正吸光度或校正吸光度A A235235（校正）（校正）C：为混合样品的浓度为混合样品的浓度LCAEcm(%)(%11样33431032576AAA334310325325260.4555.2815.6AAAA校正）（纯）（样）%1%1cmcmA A值的选择值的选择1.1.判断判断maxmax是否在是否在323323327nm327nm之间之间maxmax在在323323327nm327nm之间之间取未皂化样品用色取未皂化样品用色谱法纯化后再测定谱法纯化后再测定是是否否 求算求算A3

21、00/A325并并与规定值比较与规定值比较2.2.判断判断A300/A325是否大于是否大于0.730.73取未皂化样品用色取未皂化样品用色谱法纯化后再测定谱法纯化后再测定是是否否计算计算A325(校正校正)%100325325)(325AAAf校正334310325325260.4555.2815.6AAAA校正03%3%校正325A325A校正325Afb.b.求效价（求效价（IU/gIU/g）：）：1 8 3 01 8 3 0：维 生 素：维 生 素 A A 醇 在 异 丙 醇 溶 液 中醇 在 异 丙 醇 溶 液 中 的换算因子的换算因子1830IU/g%11cmEc.c.求维生素求维

22、生素A A醋酸酯占标识量的百分含量：醋酸酯占标识量的百分含量：100%1001830%标识量）标识量（LWWDA VitAD胶丸中胶丸中VitA的含量测定的含量测定 精密称取本品精密称取本品(规格规格10000 10000 VitA IU/丸丸)装量差异装量差异项下（平均装量项下（平均装量0.08262g/0.08262g/丸）的内容物丸）的内容物 0.2399g 0.2399g 至至250ml250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取摇匀；精密量取2.0ml2.0ml，置另一，置另一20 ml20 ml量瓶中，用量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷

23、为空白，测环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为定最大吸收波长为328nm328nm，并测得下列波长处吸，并测得下列波长处吸收度。收度。例例A300 ：0.354A316 ：0.561A328 ：0.628A340 ：0.523A360 ：0.216A300/A328 ：0.555A316/A328 ：0.907A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.811A360/A328 ：0.299 求本品中维生素求本品中维生素A A的含量？的含量？605052305610628025232523340316328328.AAA.A 校正校正A300/A328 ：0

24、.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.833A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 +0.010.01 0+0.02+0.04=%)3%15(%7.3%100328328)(328AAAf校正%0.99%1001000008262.010020125022399.01900605.0%100)ml100/g(C1900A%328 标示量标示量平均丸重平均丸重标示量标示量校正校正蓝蓝色色 3SbClVitA优点：优点：简便、快速简便、快速max：618nm620nm，符合，符合Bee

25、r定律，可采用定律，可采用标准曲线法定量。标准曲线法定量。)(23SbOClSbClOH缺点：缺点：呈色不稳定（呈色不稳定（5 510s10s内）内）水分干扰水分干扰温度对呈色影响大，与标准曲线温差温度对呈色影响大，与标准曲线温差11专属性差，某些有关物质均与专属性差，某些有关物质均与SbClSbCl3 3显蓝色显蓝色三氯化锑有强腐蚀性三氯化锑有强腐蚀性2.三氯化锑比色法三氯化锑比色法第二节第二节 维生素维生素B B1 1维生素维生素B1B1广泛存在于米糠、麦麸和酵母中，具广泛存在于米糠、麦麸和酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能。有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能。用于治疗维

26、生素用于治疗维生素B1B1缺乏病、多发性神经炎和胃缺乏病、多发性神经炎和胃肠道疾病。肠道疾病。一一基本结构与主要性质基本结构与主要性质1.1.基本结构基本结构由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季胺类化合物。成的季胺类化合物。NSCH3CH2CH2OHNNH3CNH2CH2+HClCl-2.2.主要性质主要性质 溶解性溶解性易溶于水（显酸性）、微溶于乙醇、易溶于水（显酸性）、微溶于乙醇、不溶于乙醚不溶于乙醚 硫色素反应硫色素反应噻唑环在碱性介质中可开环，与嘧啶噻唑环在碱性介质中可开环，与嘧啶环上的氨基环合，再经铁氰化钾氧化环上的氨基环合，再经铁氰化钾氧化

27、成硫色素（溶于正丁醇显蓝色荧光）。成硫色素（溶于正丁醇显蓝色荧光）。紫外吸收特性紫外吸收特性具紫外吸收，最大吸收波长为具紫外吸收，最大吸收波长为246nm246nm。与生物碱沉淀试剂反应与生物碱沉淀试剂反应分子中含有两个杂环（嘧啶环和噻唑分子中含有两个杂环（嘧啶环和噻唑环），可与某些生物碱沉淀试剂（碘环），可与某些生物碱沉淀试剂（碘化汞钾、三硝基苯酚、碘溶液和硅钨化汞钾、三硝基苯酚、碘溶液和硅钨酸）反应生成组成恒定的沉淀。酸）反应生成组成恒定的沉淀。氯化物的特性氯化物的特性维生素维生素B1B1为盐酸盐，其水溶液显氯化为盐酸盐，其水溶液显氯化物的鉴别反应。物的鉴别反应。二二鉴别试验鉴别试验1.1

28、.硫色素反应硫色素反应原理原理:在碱性介质中可被铁氰化钾氧化成硫在碱性介质中可被铁氰化钾氧化成硫色素（溶于正丁醇显蓝色荧光）。色素（溶于正丁醇显蓝色荧光）。NNH3CNH2HClNSCH3C2H4OHCH2NaOHCH2NNH3CNH2CH3NNaSC2H4OHO-H2OCH2NNH3CNH2CH3NNaSC2H4OHONNH3CNCH3NNaSC2H4OHNNH3CNCH3NNaSC2H4OH 环合环合NNH3CNCH3NSC2H4OHH（硫色素）（硫色素）H2（O）NNH3CNCH3NSC2H4OHHNNH3CNCH3NSC2H4OH硫色素反应为维生素硫色素反应为维生素B1B1所特有的专属

29、反应所特有的专属反应方法：方法：取供试品取供试品约约5mg加加NaOH试液试液2.5ml溶解溶解加铁氰化钾加铁氰化钾0.5ml与与正丁醇正丁醇5ml，振摇，振摇上层溶液显上层溶液显蓝色荧光蓝色荧光加酸使呈酸性加酸使呈酸性荧光消失荧光消失加碱使呈碱性加碱使呈碱性荧光又重现荧光又重现2.2.沉淀反应沉淀反应 与碘化汞钾生成淡黄色沉淀与碘化汞钾生成淡黄色沉淀 与碘生成红色沉淀与碘生成红色沉淀 与硅钨酸生成白色沉淀与硅钨酸生成白色沉淀 与苦酮酸形成扇形白色结晶与苦酮酸形成扇形白色结晶3.氯化物反应：氯化物反应：本品水溶液显氯化物的鉴别反应。本品水溶液显氯化物的鉴别反应。4.硝酸铅反应硝酸铅反应与与Na

30、OHNaOH共热，分解产生共热，分解产生NaSNaS，可与硝酸铅生，可与硝酸铅生成黑色沉淀。成黑色沉淀。三三含量测定含量测定1.非水滴定法非水滴定法原理：原理：维生素维生素B1B1分子中含有两个碱性的已成盐的伯胺和分子中含有两个碱性的已成盐的伯胺和季铵基团，在非水溶液中（在醋酸汞存在下），季铵基团，在非水溶液中（在醋酸汞存在下），均可与高氯酸（均可与高氯酸（0.1mol/L0.1mol/L）作用。）作用。HClOClOBHClOHClClBAcHg）（喹那啶红亚甲蓝（紫红喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）天蓝）注意事项：注意事项：醋酸汞可与氢卤酸作用生成非解离的卤化汞溶醋酸汞可与氢卤酸作用生成非解离的

31、卤化汞溶液，已消除氢卤酸盐对非水滴定法的干扰。液，已消除氢卤酸盐对非水滴定法的干扰。维生素维生素B1B1具有两个碱性基团，与高氯酸反应的具有两个碱性基团，与高氯酸反应的摩尔比为摩尔比为1:21:2。ml/mg.nMcT861622733710%WFTVV%空空样样含量含量2.紫外分光光度法紫外分光光度法（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=421%cmE11A=ECLg/100ml%WEA%cm100110011 标示量标示量平均片重平均片重稀释度稀释度规格规格g/g/片片稀释度稀释倍数1g片剂、注射剂片剂、注射剂ChPChP:（每（每ml）相当于标示量的）相当于标示量的%=%VEA

32、%cm1001110011 标示量标示量稀释度稀释度规格规格g/mlml3.硫色素荧光法硫色素荧光法荧光硫色素异丁醇铁氰化钾 1VitBNaOH原理：原理：方法与计算：方法与计算：激发波长激发波长365nm；发射波长；发射波长435nm+NaOH+铁氰化钾铁氰化钾+异丁醇异丁醇+NaOH+异丁醇异丁醇+NaOH+铁氰化钾铁氰化钾+异丁醇异丁醇+NaOH+异丁醇异丁醇SdAb%WWdSbA%VitB1001 稀稀释释度度稀稀释释度度样样对对对照液对照液供试液供试液注意事项：注意事项：铁氰化钾与维生素铁氰化钾与维生素B1B1的反应虽非定量完成，的反应虽非定量完成，但在一定的条件下形成的硫色素与维生

33、素但在一定的条件下形成的硫色素与维生素B1B1的浓度成正比。的浓度成正比。硫色素反应为维生素硫色素反应为维生素B1B1的专属性反应，不受的专属性反应，不受氧化产物的干扰，测定结果较为准确，但操氧化产物的干扰，测定结果较为准确，但操作繁琐。作繁琐。使用的氧化剂，除铁氰化钾外，可用氯化汞使用的氧化剂，除铁氰化钾外，可用氯化汞或溴化氰。或溴化氰。溴化氰能将维生素溴化氰能将维生素B1B1完全定量氧化为硫色素，完全定量氧化为硫色素，适用于临床体液分析。适用于临床体液分析。第三节第三节 维生素维生素C C维生素维生素C C（L-L-抗坏血酸）具有抗坏血酸）具有4 4中光学异构，以中光学异构，以L-L-构构

34、型右旋体的生物活性最强。型右旋体的生物活性最强。一一基本结构与主要性质基本结构与主要性质1.1.基本结构基本结构具有烯二醇结构和内酯环，且有具有烯二醇结构和内酯环，且有2 2个手性碳个手性碳原子（原子（C4C4、C5C5），使维生素），使维生素C C性质极为活泼，性质极为活泼，且具旋光性。且具旋光性。654321OOHHOO C OHHCH2OH2.2.主要性质主要性质 溶解性：溶解性：易溶于水（呈酸性）、微溶乙醇、不易溶于水（呈酸性）、微溶乙醇、不溶于三氯甲烷和乙醚。溶于三氯甲烷和乙醚。酸性：酸性：烯二醇基中烯二醇基中C3-OH收共轭效应影响，收共轭效应影响，酸性较强（酸性较强（pK1=4.

35、17）；）；C2-OH酸性酸性较弱（较弱（pK2=11.57）旋光性：旋光性：有有2 2个手性碳原子个手性碳原子,具旋光性。具旋光性。OOHHOO C OHHCH2OH123456 还原性：还原性：分子中的烯二醇基具有极强的还原性，分子中的烯二醇基具有极强的还原性，已被氧化为二酮基成为去氢抗坏血酸，已被氧化为二酮基成为去氢抗坏血酸，在碱性或强酸性溶液中能进一步水解在碱性或强酸性溶液中能进一步水解为二酮洛糖酸而失去活性。为二酮洛糖酸而失去活性。O二烯醇结构二烯醇结构二酮基结构二酮基结构OHOHCCOOCCCH2OHOOOO C OHHCH2OHCHHOCHOHCOCOCOONa HH+OH-有活

36、性有活性有活性有活性无活性无活性OHOO C OHHCH2OHHOO 水解性：水解性：维生素维生素C和碳酸钠作用可生成钠盐，和碳酸钠作用可生成钠盐，内酯环并得稳定，不致发生水解；在内酯环并得稳定，不致发生水解；在强碱中，内酯环可水解，生成酮酸盐。强碱中，内酯环可水解，生成酮酸盐。单钠盐单钠盐32CONa酮酮酸酸盐盐水水解解 NaOHOHOO C OHHCH2OHHOOHOO C OHHCH2OHNaOCOONaOCOCCHOHHOCHCH2OHNa2CO3NaOH 糖类的性质：糖类的性质：化学结构与糖类相似，具有糖类的性化学结构与糖类相似，具有糖类的性质和显色反应。质和显色反应。蓝蓝色色糠糠醛

37、醛吡吡咯咯脱脱水水 HVitC50显显色色糠糠醛醛衍衍生生物物糠糠醛醛酚酚类类脱脱水水 H糖类糖类 紫外吸收特性：紫外吸收特性：具共轭双键，其稀盐酸溶液具共轭双键，其稀盐酸溶液max=243max=243，碱性溶液碱性溶液max=265max=265。二二鉴别试验鉴别试验1.1.与硝酸银反应与硝酸银反应烯二醇基具有强还原性，可被硝酸银氧化烯二醇基具有强还原性，可被硝酸银氧化为去氢抗坏血酸，同时产生黑色银沉淀。为去氢抗坏血酸，同时产生黑色银沉淀。OHOO COHHCH2OHNaOOOO COHHCH2OHO+AgNO3+2HNO3+2Ag2.2.与与2,6-2,6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应2,6

38、-2,6-二氯靛酚的氧化型在酸性介质中位玫二氯靛酚的氧化型在酸性介质中位玫瑰红色，在碱性介质中位蓝色，与维生素瑰红色，在碱性介质中位蓝色，与维生素C C作用后生成还原型无色的酚亚胺。作用后生成还原型无色的酚亚胺。无无色色二二氯氯靛靛酚酚，VitC62氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色H还原型还原型蓝色蓝色 OHOHNClHOClONClHOClOHH（玫瑰色）（玫瑰色）（无色）（无色）2.2.与其他氧化剂反应与其他氧化剂反应可被亚甲蓝、高锰酸钾、碱性酒石酸铜试可被亚甲蓝、高锰酸钾、碱性酒石酸铜试液、磷钼酸等氧化剂氧化为去氢抗坏血酸液、磷钼酸等氧化剂氧化为去氢抗坏血酸。去氢抗坏血酸OVitCOCH2O

39、HOOOO C OHHOHOO C OHHCH2OHHO红红碱碱性性酒酒石石酸酸铜铜 OCuVitC MnKMnOVitC3.3.糖类的反应糖类的反应在三氯醋酸或盐酸存在下水解、脱羧、生在三氯醋酸或盐酸存在下水解、脱羧、生成戊糖，再失水，转化为糠醛，加入吡咯，成戊糖，再失水，转化为糠醛，加入吡咯，加热、溶液呈蓝色加热、溶液呈蓝色。蓝蓝色色糠糠醛醛戊戊糖糖脱脱水水三三氯氯醋醋酸酸 VitC或盐酸或盐酸50吡咯吡咯OO C OHHCH2OHHOOHCH2OHOO C OHHHHOOCCOHO OCHOH3CH2OHH2O-CO2-H2OOCHN（蓝色）（蓝色）OCHO(糠醛糠醛)OCHOH3CH2

40、OHCH（戊糖）（戊糖）NNH50(吡咯吡咯)三三含量测定含量测定维生素C具有很强的还原性，可被不同氧化剂定量氧化。1.碘量法碘量法 原理：原理：IIVitCH2去氢抗坏血酸指示剂：淀粉指示液指示剂：淀粉指示液OO C OHHOOCH2OHHI2+OHOO C OHHCH2OHHOH+2I+注意事项：注意事项：供试液用新沸冷供试液用新沸冷H H2 2O O溶解配制，减少水中溶溶解配制，减少水中溶解的氧对测定的影响。解的氧对测定的影响。滴定在酸性环境下进行，在酸性介质中维生滴定在酸性环境下进行，在酸性介质中维生素素C C受空气中氧的氧化速度减慢。受空气中氧的氧化速度减慢。供试品溶液配制好后应立即

41、滴定，减少供试品溶液配制好后应立即滴定，减少O O2 2的的干扰。干扰。附加剂干扰的排除附加剂干扰的排除片剂片剂 滑石粉滑石粉 过滤过滤Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 注射剂注射剂 抗氧剂抗氧剂 丙酮丙酮甲醛甲醛CHHOOaS3a S O+H2N H ON2252HO NH COS3a33COCHCH33CHCHCNaSO3OH33CHCHCNaSO3OH2.2,6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法 原理：原理：酚亚胺酚亚胺二氯靛酚二氯靛酚，VitC自身指示终点法自身指示终点法蓝蓝色色玫玫瑰瑰红红 OHH无无色色还还原原 方法：方法：空空样样二氯靛酚液二氯靛酚液空白空白

42、样品样品VVHAcHPO 3注意事项：注意事项：酸性环境（酸性环境（HPOHPO3 3-HAc-HAc）稳定）稳定VitCVitC维生素维生素C C的氧化速度远比干扰物质快，快速滴的氧化速度远比干扰物质快，快速滴定（定（2min2min内）可防止其他还原性物质干扰。内）可防止其他还原性物质干扰。亦可采用剩余比色测定亦可采用剩余比色测定（剩余染料）测二氯靛酚（定量过量）AVitC（醋酸乙酯提取）缺点缺点需经常标定需经常标定贮存贮存一周一周2,6-2,6-二氯靛酚滴定液不稳定二氯靛酚滴定液不稳定2,6-2,6-二氯靛酚氧化力较强，干扰多二氯靛酚氧化力较强，干扰多第四节第四节 维生素维生素E E维生

43、素维生素E E为为-生育酚及其各种酯类，有天然品和合生育酚及其各种酯类，有天然品和合成品之分。天然品为右旋体，合成品为消旋体。右成品之分。天然品为右旋体，合成品为消旋体。右旋体与消旋体生物效价比为旋体与消旋体生物效价比为1.4 1.4：1010。一一基本结构与主要性质基本结构与主要性质1.1.基本结构基本结构为苯并二氢吡喃衍为苯并二氢吡喃衍生物，苯环上有一生物，苯环上有一个乙酰化的酚羟基。个乙酰化的酚羟基。（苯并二氢吡喃醇）（苯并二氢吡喃醇）OHO名名 称称R R1 1R R2 2相对活性相对活性-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CHCH3 3CHCH3 3H HH HC

44、HCH3 3H HCHCH3 3H H1.01.00.50.50.20.20.10.1OR1HOR2CH3*（三甲基十三烷基）2.2.主要性质主要性质 溶解性：溶解性：易溶于无水乙醇、丙酮、乙醚，不溶易溶于无水乙醇、丙酮、乙醚，不溶于水。于水。水解性：水解性：苯环上的乙酰化的酚羟基，在酸性或苯环上的乙酰化的酚羟基，在酸性或碱性溶液中加热可水解成游离生育酚。碱性溶液中加热可水解成游离生育酚。氧化性：氧化性：在无氧条件下对热稳定，对氧十分敏在无氧条件下对热稳定，对氧十分敏感，遇光、空气可被氧化为感，遇光、空气可被氧化为-生育醌生育醌和和-生育酚二聚体。生育酚二聚体。二二鉴别试验鉴别试验1.1.硝酸

45、反应硝酸反应 3OHNOVitE生育红生育酚75，15橙红色橙红色OOCH3C16H33H3CCH3O（橙红色）（橙红色）生育红生育红CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚生育酚HNO3强氧化剂强氧化剂2.2.三氯化铁三氯化铁-联吡啶反应联吡啶反应红色生育醌对生育酚联吡啶 223FeFeVitEFeKOHOOOH3CCH3OHCH3C16H33CH3CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚生育酚对对-生育醌生育醌+3FeO弱氧化弱氧化剂剂血红血红色色+23Fe3+2FeNNNN3.3.紫外分光光度法紫外分光光度法 =41.045.5%cmE11max=284nmmin=254

46、nm0.01%0.01%无水乙醇中，无水乙醇中，4.4.薄层色谱法薄层色谱法薄层板：薄层板：硅胶硅胶G G展开剂：展开剂：环己烷环己烷-乙醚乙醚(4?1)显色剂：显色剂：硫酸（硫酸（105105，5min5min）维生素维生素E E：R Rf f =0.7=0.7三三杂质检查杂质检查1.1.酸度酸度检查维生素检查维生素E E的制备过程中引入的游离醋酸。的制备过程中引入的游离醋酸。乙醇和乙醚各乙醇和乙醚各15ml15ml置于锥形瓶中置于锥形瓶中酚酞指示液酚酞指示液0.5ml0.5ml滴加滴加NaOHNaOH滴定液滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）至）至微显粉红色微显粉红色加本品加本品1.

47、0g,1.0g,溶溶解后，用解后，用NaOHNaOH(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定滴定VNaOH0.5ml2.2.生育酚生育酚检查维生素检查维生素E E制备过程中未酯化的生育酚。制备过程中未酯化的生育酚。原理：原理：利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈定量利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈定量还原成硫酸亚铈。在一定条件下以还原成硫酸亚铈。在一定条件下以0.1g本品本品消耗硫酸铈滴定液（消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L）的体积赖）的体积赖控制游离生育酚的限度。控制游离生育酚的限度。生育醌生育醌对对生育酚生育酚 3422CeCe指示剂：二苯胺（亮黄指示剂：二苯胺（亮黄灰紫）灰紫）nCM

48、T （M生育酚生育酚 =430.8）（ml/mg154.228.43001.0T 计算（滴定液消耗体积）：计算（滴定液消耗体积）：中国药典中国药典（20052005）规定：游离生育酚）规定：游离生育酚2.15%2.15%100(%)STVLml0.12.154mg/mlg1.0%15.2(%)TSLV硫酸铈滴定硫酸铈滴定液消耗体积液消耗体积药典规定药典规定消耗硫酸铈液（消耗硫酸铈液（0.01mol/L0.01mol/L）1.0ml1.0ml设：应消耗硫酸铈液设：应消耗硫酸铈液 V mlV ml0.010.011.01.0实际浓度实际浓度V V硫酸铈实际浓度硫酸铈实际浓度）（0.101.0mlV

49、 若硫酸铈液浓度不是若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L0.01000mol/L，应重新计算硫酸铈的消耗量应重新计算硫酸铈的消耗量四四含量测定含量测定1.1.气相色谱法气相色谱法中国药典中国药典（20052005）采用气相色谱法测）采用气相色谱法测定维生素定维生素E E的含量。的含量。选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好载气：载气：N N2 2固定相：固定相：硅酮（硅酮（OV-17OV-17）；）；涂布浓度：涂布浓度：2%2%担体：担体：硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温：柱温：265265检测器：检测器：氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(F

50、ID)(FID)内标：内标：正三十二烷正三十二烷计算：计算：内标法内标法系统适应性试验：系统适应性试验：n500n500，R2R2VitE测定的色谱条件测定的色谱条件维生素维生素E E气相色谱分析气相色谱分析供试液（样品供试液（样品+内标）内标）对照液（对照对照液（对照+内标）内标）内标物内标物是样品中不存在的物质是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近与被测组分峰靠近能与各组分完全分离能与各组分完全分离与被测组分的量接近与被测组分的量接近测定方法测定方法1KAA 内内对对2KAA 内内样样%WWKK%VitE10012 稀释度稀释度稀释度稀释度样样对对计算方法计算方法例例内标液：内标液：取正三十