课题3-血红蛋白的提取和分离课件.pptx

1、课题课题3 3 血红蛋白的血红蛋白的提取和提取和分离分离组成元素 C、H、O、N、S等等等等氨基酸氨基酸脱水缩合多肽多肽折叠盘旋蛋白质蛋白质一、蛋白质的特性基本单位结构组成氨基酸氨基酸蛋白质的相对分子质量在蛋白质的相对分子质量在100001000000100001000000之间，且之间，且各有差异。各有差异。相对分子量思考思考1 1 分离生物大分子的基本思路是什么？分离生物大分子的基本思路是什么？选用一定的物理或化学的方法分离具有选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。不同物理或化学性质的生物大分子。思考思考2 2 蛋白质的分离和提取的原理是什么？蛋白质的分离和提取

2、的原理是什么？根据蛋白质各种特性的差异，如分子的根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。和力等等，可以用来分离不同蛋白质。纸层析法利用在滤纸上不同种的分子运动速率不一样而出现利用在滤纸上不同种的分子运动速率不一样而出现了颜色分层现象的方法。了颜色分层现象的方法。层析法层析法/色谱法色谱法利用在某载体上，不同种的分子运动速率不利用在某载体上，不同种的分子运动速率不一样，而出现了颜色分层现象的方法。一样，而出现了颜色分层现象的方法。载体

3、：载体：滤纸、凝胶柱等滤纸、凝胶柱等二、二、凝胶色谱法（分配色谱法）：凝胶色谱法（分配色谱法）：1、凝胶：、凝胶：一些微小多孔的一些微小多孔的球体球体如如葡聚糖、葡聚糖、琼脂糖琼脂糖2、原理原理：当当不同的蛋白质通过凝胶时，相对不同的蛋白质通过凝胶时，相对（）的蛋白质容易进入凝）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（胶内部的通道，路程（），移动速度），移动速度（），而（），而（）的）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（）移动，路程（）移动，路程（），移），移动速度（动速度（），相对分子质量不同的），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。蛋白质因此得以分离

4、。相对分子质量较小相对分子质量较小较长较长较慢较慢相对分子质量较大相对分子质量较大凝胶外部凝胶外部较短较短较快较快 洗脱洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使促使蛋白质分子的差速流动。蛋白质分子的差速流动。混合物混合物上上 柱柱洗洗脱脱大分子流动快大分子流动快小分子流动慢小分子流动慢收收 集集大分子大分子收收 集集小分子小分子 1、概念、概念：在在一定的范围内，能对抗外来少量强一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶

5、液。用的溶液叫做缓冲溶液。三、三、缓冲溶液：缓冲溶液：思考：说出人体血液中缓冲对。思考：说出人体血液中缓冲对。NaH2PO4 /Na2HPO4H2CO3 /NaHCO3思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？液是什么？它的目的是什么？使用使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内冲液模拟细胞内的的pH环境，保证血红蛋环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）和材料的科学研究（活性）定义：定义：在外加电场的作用下，带电粒子在外加电场的作用

6、下，带电粒子在电场在电场的作用下发生迁移的作用下发生迁移的现象。的现象。四、电泳四、电泳：粒子运动方向：向与所带电荷相反的电极F电场力=qE又F=maV=atv=(q/m)Et-在不考虑粒子的形状前提下，一定的电场在不考虑粒子的形状前提下，一定的电场强度、一定的时间内，粒子的运动速度与其质量和强度、一定的时间内，粒子的运动速度与其质量和带点情况相关联带点情况相关联在电场中，粒子的带电量越大、颗粒越小、在电场中，粒子的带电量越大、颗粒越小、形状越接近于球形，运动速度越快。形状越接近于球形，运动速度越快。2 2、常见方法、常见方法琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳聚聚丙稀酰胺凝胶电泳丙稀酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量：测定蛋白质的相对分子质量：SDS-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法聚丙烯酰胺凝胶电泳法